色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用.doc

黄色网站 作者设想的双重TaqMan-MGB探针技能没有只可用来A( H3N2)亚型流感野病毒NA基因E119V耐药位点的监测，也可同声作为该亚型的分型鉴定引物，存正在快捷、高迟钝性和特同性的劣势，尤其实用于临床标本的检测。旧有NA耐药检测办法分成表型检测法和基因型检测法。interim guidelines for use of antiviral agems-United States,200506 influenza season. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 2006, 55(2) : 44-466 Takayama l, Nakauchi M , Fujisaki S, et al. Rapid detection of theS247N neuraminidase mutation in influenza A ( HINl ) pdm09VLrus by one-step duplex RT-PCR assa). J Virol Mechods, 2012,188 5 Centers for Disease Control and Prevention ( CDC) . High levels ofadamantane resistance among influenza A ( H3N2 ) viruses and测办法等，保守测序办法物耗长，利润较高，况且需数据要高贵的测序仪表；焦盐酸测序办法固然检测通量大，然而也需求一定的检测仪表；而基于MGB探针的PCR检测办法检测通量大，检测进度快，存正在较高的迟钝性和特同性，况且只要要一般的荧光容量PCR仪表。4检测混合野病毒耐药位点等位基因：A/Texas/12/2007( H3N2)和A/Washington/l/2007( H3N2)野病毒(HA=8)依照5%- 95%系列没有同对比混合后，提取RNA并做10倍倍比浓缩，对于没有同深浅和没有同对比的2种混合野病毒，停止rRT-PCR检测。表型检测法是检测NA抑止剂对于NA酶活性的反应，只能检测结合的野病毒，没有能检测临床标本。与其余罕见深呼吸道野病毒没有具有穿插反响。眼前，应用MGB探钟技能曾经顺利构建了对准于甲型HINI流感野病毒H274Y和S247N耐药渐变株的检测技能6。4浓缩度按没有同对比混合时ADV、RSV-A、RSV-B、hMPV、HboV的DNA和（或者）RNA作为沙盘，应用上述引物探针停止rRT-PCR扩中华防止医术刊物2013年5月箜47卷第5Chin J Prev Med：May 2013，V01. 47，No5表1 混合野病毒耐药位点等位基因的检测后果注：Tex2为A/Texas/12/2007( H3 N2)；Wal为A/Washington/l/2007/( H3 N2)；N专人阳性增，均未视察到阴性扩增直线，标明设想的引物探针存正在很高的特同性。l Cox NJ. Subbarao K. Global epidemiology of influenza: past andresenL. Annu Rev Med , 2000 ,51 : 407 421.2J Ferraris 0, Lina B. Mutations of neuraminidase implicated inneuraminidase inhibitors resistance. J Clin Virol ,2008 ,41 ( 1 ) :13-19.3 Wong S.Pabbaraju K, Wong A, et al. Development of a real-timeRT-PCR assay for detection of resistance to oseltamivir in influenzaA pandemic ( HINI ) 2009 virus using single nucleotidepoiymorphism probes. J Virol Methods ,2011 , 173 ( 2 ) : 259 -265.二峡社 , 1997 : 100-102.议论NA抑止剂是眼前专一牢靠的医治流感野病毒沾染的抗野病毒药品3。对于内中20株野病毒的NA基因序列停止综合，证明该署毒株的NAI 19位点均为谷氨酸(E)，标明本钻研设想的办法与序列内定后果分歧。后果标明，以10_1浓缩度混合时H3 N2-119E和H3 N2-119V检测的对比范畴均是5% - 1000-/o。而耐药毒株的涌现会使临床医治，特别是对于险症病例的医治更为辣手，因而，构建快捷、烦琐、奇异的耐药株检测办法对于病人诊断下药和监测病况的停滞有着主要意思。辨别以RV、FluB、HINI、PIV1、PIV2、PIV3、5应用临床标本结合株考证引物探针：选取经国度流感核心鉴定阴性的111株A( H3N2)亚型流感毒株停止NA基因E119V实变检测，应用H3 N2-119V探针停止的rRT-PCR检测后果显现，111份均为阳性，而H3 N2-119E探针的检测后果均为阴性，即未检测到E119V渐变毒株。A( H3N2)亚型流感野病毒的NA发作E119V变异后，能招致野病毒对于奥司他韦迟钝性升高心1，本国流感野病毒耐酒性监测尚在于起步阶段，眼前尚无E119V渐变株的简报。而野病毒以较低的10。于是，正在检测耐药渐变与药品迟钝株的混合模本中存正在显然劣势，并且此办法