第十三章免疫组织化学技术.doc

第十三章 免疫组织化学技术第一部分 目的要求和教学内容目的要求：掌握金免疫测定的方法，免疫金银染色的原理、方法，熟悉胶体金和免疫金的特性和制备。一、免疫胶体金标记原理。二、免疫胶体金的制备原则：标记要点和影响因素，胶体金标记蛋白的纯化和鉴定。三、免疫金（银）染色法：滤纸模型的免疫金（银）染色应用，免疫金（银）染色技术类型，组织切片的免疫金（银）染色法。第二部分 测 试 题一、选择题（一）A1 型题(标准型)1 .PAP复合物中的酶是A.碱性磷酸酶B.葡萄糖氧化酶C.辣根过氧化物酶D.胃蛋白酶E.胶原酶2.PAP的特点是几个抗酶抗体和3 个过氧化物酶分子组成复合物，结构非常稳定A.1B.2C.3D.4E.63.ABC法中的“桥”是指A.第一抗体B. 第二抗体C. 第三抗体D.亲和素E.链霉素亲和素4.双标记荧光免疫法中，如用罗丹明标记A 抗体，呈什么颜色，用异硫氰酸荧光素标记B抗体，呈什么颜色A.黄绿色，橘红色B.橘红色，黄绿色C.红色，淡黄色D.淡黄色，红色E.橙黄色，浅绿色5. 荧光免疫间接法比直接法荧光增强多少倍，敏感性提高多少倍A.12B.24C.36D.48E.5106. 胶体金标记蛋白时，待标记蛋白的实际用量是在稳定1ml 胶体金所需蛋白基础上再增加多少A. 510%B. 1020%C. 2030%D. 3040%E. 4050%7.铁蛋白是一种含铁 多少，相对分子量为650900KD 的球形蛋白A.15%B.20%C.25%D.30%E.35%8.下列哪种方法制备的胶体金是红色A.枸橼酸三钠B.白磷C.维生素CD.乙醇-超声波E.硼酸钠9.免疫组化技术的关键步骤是A.标本处理B.抗体的处理与保存C.设立对照试验D.结果判断E.免疫染色10.免疫组化技术的首要试剂是A.抗原B.标记物C.固定剂D.抗体E.洗涤液二、填空题1.用丙酮做固定剂的抗原是（ ）；用1%聚甲醛做固定剂的抗原是（ ）；用10%甲醛做固定剂的抗原是（ ）；用95%乙醇做固定剂的抗原是（ ）；用四氯化磺做固定剂的抗原是（ ）。2.免疫染色对特殊标本的进一步处理常用 （ ）和（ ）法。3.免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是（ ）、（ ）和（ ）。4.酶免疫组化技术中最常用的酶有（ ）、（ ）及（ ）。5.免疫电镜标本的制备主要有（ ）、（ ）和（ ）三种。6.免疫组化中最常用的制片方法是（ ）和（ ）。三、名词解释题1.胶体金2.免疫组化技术四、简答题1.何谓免疫电镜技术？2.免疫组化标本固定时，好的固定剂应满足哪些要求？3.简述荧光免疫组化技术直接法的原理。4.简述免疫胶体金标记的原理。五、论述题试述酶免疫组化技术的原理及其应用。标准答案一、选择题（标准型）1. C 2 B 3 D 4 B 5 B 6 B 7 C 8 A 9 E 10 D二、填空题1 免疫球蛋白、激素、类脂质、蛋白质、酶。2.冰冻切片，石蜡切片3.胞质型 细胞核型，细胞膜表面型4.辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶 葡萄糖氧化酶5.非包埋法免疫染色，包埋前免疫染色，包埋后免疫染色6.蛋白酶消化法，非特异吸附法三、名词解释题1.免疫组化技术是指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，借助可见的标记物，对相应抗原或抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检验方法。2.胶体金是氯金酸在还原剂如白磷、维生素C枸橼酸纳和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金。四、简答题1.免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高度精确、灵敏的技术。2.答：1）能快速固定抗原2）防止抗原物质扩散3）固定后的抗原能被抗体识别，不影响抗原抗体反应。3.答：将荧光素标记的已知抗体（或抗原）与切片（印片）中相应抗原（或抗体）直接发生反应，以检测组织与细胞标本中的靶抗原（或抗体）。4.答：胶体金颗粒标记蛋白质的原理是金颗粒表面负电荷与蛋白质正电荷之间非共价键的静电引力互相吸引，当达到范登华引力半径范围之内时，蛋白质与金颗粒表面形成牢固结合。五、论述题酶免疫组化技术的原理：酶免疫组化技术是利用酶标记已知抗体（或抗原），然后与组织标本中相应抗原（或抗体）在一定条件下相互结合形成带酶分子的复合物，酶遇到底物时，能催化底物水解，或氧化或还原，产生有色的不溶性产物，出现显色反应，在显微镜