SOP-BL-01-02 常规石蜡包埋组织制片(常规切片)的制备.doc

四川友谊医院作业指导书常规石蜡包埋组织制片制备标准操作流程文件编号：SOP-BL-01-02版本：A/0SOP常规石蜡包埋组织制片制备标准操作流程 1)制备程序 1水洗。 2脱水。 3透明。 4浸蜡。 5包埋。 6切片。 2)注意事项 组织切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。3)常规切片的手工操作 1水洗 用流水冲洗已经固定的组织块30min。 2脱水(常温下) (1)乙醇甲醛(AF)液固定：60120min。 (2)80乙醇：60120min。 (3)95乙醇I：60120min。 (4)95乙醇：60120min。 (5)无水乙醇I：3060min。 (6)无水乙醇：3060min。 (7)无水乙醇：3060min。 注意事项：未经充分固定的组织不得进入脱水程序；用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5l0倍以上；自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水；脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换)；较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水；组织块置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化)；丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。3透明 (1)二甲苯I：20min。 (2)二甲苯：20min。 (3)二甲苯：20min。 注意事项：二甲苯的容积应为组织块总体积的510倍以上；组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长(以防组织硬、脆)，并依不同种类组织及其大小而异(组织块呈现棕黄或暗红色透明即可)；二甲苯应及时过滤、更换；组织块经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。 4浸蜡 (1)石蜡工(4550)：60min。 (2)石蜡(5658)：60min。 (3)石蜡(5658)：60min。 注意事项：熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中(70)进行，不得用明火加温；熔蜡的容积应为组织块总体积的510倍以上；组织块经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程，应尽可能减少将透明后组织块表面的二甲苯带人熔蜡中；浸蜡时间适宜，过短时浸蜡不充分(组织过软)，过长时组织硬脆；熔蜡应及时过滤、更换。 5包埋 (1)先将熔化的石蜡倾人包埋模具中，再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块，使组织块的最大面或被特别指定处的组织面向下埋入熔蜡中，应将组织块平整地置放于包埋模具底面的中央处。包埋于同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直包埋(立埋)。 (2)将与组织块相关的病理号小条置人包埋模具内熔蜡的一侧。 (3)待包埋模具内的熔蜡表面凝固后，即将模具移人冷水中加速凝固。 (4)从包埋模具中取出凝固的包埋蜡块(简称蜡块)，用刀片去除组织块周围的过多石蜡(组织块周围保留l2mm石蜡为宜)。将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。 (5)将病理号小条牢固地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。 (6)把修整好的蜡块烙贴在支持器上，以备切片。 (7)使用包埋机的方法按有关厂商的说明书操作。 (8)注意事项。 应将组织块严格分件包埋。包埋时一定要首先认真核对组织块的病理号(包括次级号)、块数和取材医师对包埋面的要求，准确地置入相应的病理号小条。发生包埋差错时，必须立即与取材医师和病理科当班负责人取得联系，及时处置。 必须严防各种异物污染，勿将无关组织如缝线、纸屑或其他异物(尤其是硬质异物)埋人蜡块内。 包埋过程要操作迅速，以免组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。 包埋用的熔蜡应纯净，熔点适宜。浸蜡I用软蜡(熔点为4550)，浸蜡、和包埋用蜡均用硬蜡(熔点为5658)。 包埋用熔蜡使用前应先静置沉淀、过滤。 熔蜡时不得使用明火，以防燃烧。包埋用熔蜡的温度应30。乙醇、二甲苯和