葡萄糖(GLU)测定11.doc

Laboratory Medicine Department,Tianjin Baodi Hospital 天津市宝坻区人民医院检验科标准操作文件葡萄糖（GLU）测定1.第1页页首内容葡萄糖（GLU）测定（HK法）天津市宝坻区人民医院检验科操作规程文件号：CZGC/SH/014第四版共3页本规程每2年复审一次复审日期：2013年5月1日复审人：陈玉良（签名）规程编写者：崔树明审批者：陈玉良批准日期：2013年5月6日实施日期：2013年5月10日文件分发部门和/或个人：检验科医务科；保管者：王文志（签名）院长办公室；保管者：刘会芹（签名）院档案室；保管者：刘会芹（签名）检验科；主任：陈玉良（签名）临床化学检验室：崔树明（签名）2.原理在己糖激酶催化下，葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP）和镁离子存在的情况下被已糖激酶（HK）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP）。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）使G-6-P氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原（NADH）。在340/380nm的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。 HK葡萄糖 + ATP -G-6-P+ ADP Mg2+G6PDHG-6-P + NAD+-6-磷酸葡萄糖+NADH + H+ 3.样本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。3.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。3.3 标本类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。3.4标本稳定性：样本须在30分钟内分离血清或血浆，28下冷藏的血清或血浆可稳定24小时，-20冰冻起来可稳定1个月。3.5样本处理：血标本应尽快送检验室。室温下放置10-15min后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。4.试剂4.1 试剂：本科使用使用华氏亚太医学科技有限公司葡萄糖检测试剂盒，LOT：041211。此试剂盒为液体单一试剂，即开既用，无须特殊准备。4.2试剂主要成分如下：三乙醇胺缓冲液 50mmol/LATP 1.5mmol/LNAD 0.7mmol/L己糖激酶 2.0KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 3.0KU/L注意：1. 此试剂为体外诊断用。2. 不要入口，吞下有害。3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。4.3 试剂的储存与稳定性：4.3.1未开封的试剂于2-8保存，稳定至有效期。4.3.2已开封的试剂在阴暗处（2-8）可稳定一个月。4.3.3避光保存，用后立即盖好封盖。4.3.4发现试剂中有沉淀物禁止使用。4.4 校准血清：BECKMAN公司提供，产品批号为 0115 。为冻干品，未开封者2-8保存至有效期。临用前用5ml去离子水复溶，放置30min，混匀待完全溶解后使用。复溶的血清2-8可稳定4天。当有以下情况时需要重新定标：1 换试剂批号或出现质控漂移时。2 当仪器做完保养后。3 重要零件更换时。4.5质控品：RONDOX公司提供，LECEL-2LEVEL-3，产品批号为759UN及551UE。冻干品，未开封者2-8保存至有效期。使用前用5ml去离子水复溶，30分钟后轻轻混匀，待完全溶解后使用。复溶后的血清2-8可稳定4天。每天随样品一起测定，测定值应在允许范围以内。5.仪器奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪6操作6.1 AU2700开机6.1.1检查W1、W2清洗液及稀释液有足够量，不足时补充；6.1.2打开水机水源的自来水阀门，按水机前面板的（POWER ON）键，开启水机；6.1.3按分析仪前面板的（POWER ON）键，开启分析仪主机；6.1.4确认打印机为开机并处于联机状态，开启中文机；6.1.5确认仪器上在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足时添加，并在系统状态下的试剂状态检查试剂。6.2 开始分析6.2.1将兰架第一位置放水，黄架相应位置放入校准液；6.2.2将兰架、黄架、白色标本架放入样品台上；6.2.3用鼠标点击在屏幕最上方（开始分析）图标；6.2.4点击屏下方（EXIT）图标，退到主屏幕。6.3分析参数样品体积1.6ul 温度 37试剂1体积240ul方法 终点法试剂2体积0.0ul单位 mmol/L波长340nm 定标方式 AB读点0-27 完整的实验参数与操作程序可以在AU2700用户手册中查到。7 计算：结果无须手工计算，结果自动以mmol/L输入微机打印。报告结果：异常结果的处理程序：根据仪器参数的参考范围会打印异常标志，以“H”、“L”表示，“H”表示高于正常，“L”表示低于正常。报告格式：以自动打印的报告单报告8 操作性能8.1 准确度：不准确度5。8.2 精密度：批内瓶间差CV3，批间差CV5。8.3.线性范围：可达40.0mmol/l。9.参考值参考范围：3.89-6.11mmol/l10.危急值：2.50 mmol/l 33.20 mmol/l10.临床意义：血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定。当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖。生理性高血糖见于：饭后1-2h，摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。病理性高血糖：见于内分泌功能障碍引起的高血糖，如胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常，临床上称为糖尿病。颅内压增高时刺激血糖中枢，如颅内出血、颅外伤、脑膜炎等。病理性低血糖：见于胰岛细胞增生或瘤等使胰岛素分泌增多，对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶机能减退、肾上腺皮质机能减退而使肾上腺皮质激素分泌减少。严重的肝病患者，由于肝脏贮存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效的调节血糖。11.操作过程注意事项：1.浓度换算为mmol/l18=mg/dL2.试剂与样品的用量，可按比例改变