改-艾滋病实验室的建立、生物安全要求及管理.doc

艾滋病实验室的建立、生物安全要求及管理制度写在课前的话：艾滋病实验室在HIV的检测过程中发挥越来越重要的作用，然而检验人员的保护措施仍处于较为初级的阶段。专家提出，医学检验导致医务工作者发生生物安全事故的避免措施及办法的研究应尽快提到议事日程上来。通过此课件的学习，使学员熟悉艾滋病实验室的分类及其职能，充分掌握各类艾滋病实验室的必须配置和应具备的管理制度。一、艾滋病实验室的生物安全内容（一）实验室的生物安全的概念是指在从事病原微生物实验活动的实验室中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害，对环境的污染和对公众的伤害，为保证试验研究的科学性还应保护被试验因子免受污染。 1、生物危险感染性的致病因子，无论是直接感染，还是间接地散播到环境中，对人类、动物或植物都是一个现实的或潜在的危险。 生物危害主要经过以下四种途径感染（1） 眼结膜感染吸入感染经口摄入经皮肤感染眼结膜入侵（2） 呼吸道感染（3） 消化道摄入（4） 皮肤接触感染2、健康工作者HIV感染的职业危险一般健康工作者感染HIV的几率是非常低。截止到99年6月报道的数据，经皮肤感染47例，单次HIV暴露的危险性是0.3%。经黏膜感染5例，危险性是0.03%。经皮肤感染为0例，统计学估计经皮肤单次HIV暴露的危险性小于0.03%。健康工作者HIV感染的职业危险暴露类型经皮粘膜未知皮肤报告数量（截至99年6月） 47 5 1 0单次HIV暴露的危险性（）0.30.031000kp/ml，基因型耐药检测（建议对进入临床关怀的所有患者进PAP涂片PPD、interferon- release assay (IGRA) 弓形虫抗体IgGRPR /VDRL衣原体、淋病双球菌检测STD治疗胸部X线辅助受体嗜性（Tropism ）检测 HLA-B*5701 检测3、常用药物不良反应监测AZT：严重贫血，监测血常规DDI：胰腺炎，监测AMYNVP：皮疹和严重肝损害，监测肝功 PI：脂代谢、糖代谢异常，监测血脂、血糖针对HIV的特异性的实验室检查，包括HIV抗体的检查、CD4+T淋巴细胞的检查或者HIV核酸的测定等，那么，对特殊实验室有哪些特殊的要求和功能分区呢？五、HIV特殊检测实验室具体要求及功能分区（一）血清学检测实验室：必须具备生物安全柜（生物安全二级）；加氧离心机；冰箱；酶标仪，洗板机；加样器。（二）CD4检测实验室：具备样品处理区；流式细胞仪检测区。1、CD4+T淋巴细胞检测实验室规划建议分为两个房间，一是样本准备区，二是样本检测和分析区。样本的准备区，要求房间进出口之后有样本接受区和样本的存放区，应具备处理样本的生物安全柜和冰箱。样本检测和分析区，必须具备流式细胞仪和其的一些辅助设备，包括计算机、打印机、结果分析和发布区。实验室气流要求从样本准备区流动到样本检测和分析区。2、样品准备区：应达到生物安全二级（BSL-2）实验室要求，用于样品处理、流式检测样品制备。须具备生物安全柜、移液器、冰箱、漩涡混匀器和离心机。3、流式细胞检测区：必备流式细胞仪，流式细胞仪检测区是用于完成制备的样本进行上机检测。（三）HIV核酸检测实验室要求分四个区域：试剂准备区；标本制备区；扩增区和产物分析区。1、 临床的PCR诊断实验室设计方案（如图）实验材料, 只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区样品处理区扩增区扩增产物分析区，不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。尽量减少人员由扩增后区返回扩增前区的频度。 工作流向专用走廊产物分析区扩增区标本制备区试剂准备区缓冲区缓冲区缓冲区空气流向空气流向空气流向空气流向2、 标本制备区要求有生物安全柜、样本冰箱、可调移液器一套（包括小量程、中量程和大量程）、带滤芯（防止气溶胶）及无RNA酶的吸嘴、台式微型离心机（最大RCF 16000g，最小RCF12500g）、试管架、涡旋器、无菌的EP管、加热块等。标本制备区的功能是临床标本的保存，核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。3、 扩增区要求有螺式的Cobas扩增仪、RT-PCR扩增仪、NucliSens EasyQ、普通PCR仪，荧光定量PCR仪及专用工作服等。4、 扩增区是DNA或者cDNA扩增的区域。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等亦可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。5、产物分析区要求有孵箱、酶标仪、洗板机、数据处理系统及专用工作服，可能还需要跑胶系统和凝胶成像系统。产物分析区功能是用来进行扩增片断的测定。艾滋病的职业暴露是指医务工作者、实验室工作人员及有关监管人员在从事HIV/AIDS诊断、治疗、护理、预防、检验、管