微生物扩项资料.doc

资质认定是CMA，实验室认可是CNAS。参加内审员培训后建立体系。如果建立了就根据要检的项目按照标准采购培养基、耗材、设备、标准菌株及建立无菌室,P2实验室。实验室刚改造，生物安全柜和洁净台在两个不同的房间，洁净系统共用。两间房间共用缓冲间和风淋房。具体路线为微生物实验室准备间（10万级），一缓，风淋，二缓，洁净操作台房/生物安全柜房（万级）。这两间房间门相对，门都朝里开，但为了不造成交叉污染，用正压控制流向。生物安全柜房间与二缓之间装有压差计，二缓到生物安全柜房间始终正压约5MPa。生物安全柜房间为直排，无回风。由于本公司实验室暂时还未检测致病菌，系统暂时还能过关。金葡菌、铜绿假单胞、大肠埃希菌这些都是生物安全等级二级的致病菌，需要在生物安全柜中操作。生物安全柜是保护样品，环境和人员的设备。用普通的层流操作台肯定是不安全的，因为操作过程中细菌有可能以气溶胶的形式散发出去。金葡菌、铜绿假单胞、大肠埃希菌不会像结核杆菌那样靠空气传播的，但是它们可以存在于气溶胶中，感染伤口。消毒剂最好不要用含氯的，否则灭菌时气味很难闻，有种含洁尔灭的消毒剂挺好的，但是不清楚洁尔灭高压会不会产生有害物。生物安全柜里检测致病菌，洁净操作台检测霉菌、酵母类的实验室资质认定评审准则有多少个要素?19个要素，管理要求11个，技术要求8个。管理要求：1、组织2、管理体系3、文件控制4、分包5、服务和供应品采购6、合同评审7、申诉和投诉8、纠正措施、预防措施和改进9、记录10、内审11、管理评审技术要求1、人员2、设施和环境条件3、检测和校准方法4、设备和标准物质5、量值溯源6、抽样和样品处置7、结果质量控制8、结果报告2 设备、仪器2.1 设备2.1.1 无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。2.1.1.1 结构和要求 见无菌检查法2.1.1.2 操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间的净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。2.1.1.3 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。2.1.1.4 洁净级别及检查方法 通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法（参照医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。洁净级别尘粒数/m3浮游菌（个）/ m3沉降菌 （个）/（90mm?0.5h）微粒直径0.5m微粒直径5m100级10000级100000级3，500350，0003，500，0000200020，00051005001310沉降菌数测定（法）无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经3035预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上，在3035培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。有条件的单位、同时应检查无菌操作架和净化工作台上的浮游菌和尘粒数，分别应达到10000级和100级。如菌落数或尘粒数超标，应清洗过滤系统中的过滤器，必要时予以更换。2.1.1.5 在每次操作前、后，用0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。2.1.2 阳性菌试验应另设单独的净化工作台，不得在供试品检验用的无菌室内或奸猾工作台上操作。2.1.3 无菌室与洗刷、灭菌消毒、培养、结果观察及办公间等配套设施应相对集中，布局合理，避免污染，便于管理。2.2 仪器2.2.1 恒温培养箱（3035）、生化培养箱（2025）、微波炉、匀浆仪（30008000r/min）或康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250300）、电冰箱、离心机、离心管、0.45m滤膜及薄膜过滤器、蒸汽灭菌器（使用时要进行生物指示剂灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。菌落计数器、显微镜（1500x）、电子天平或天平（感量0.1g），pH系列比色计。2.2.2玻璃器皿 锥形瓶（250300ml，内装玻璃珠若干；500ml，1000ml）、培养皿（直径9cm）、量筒（100ml，500ml）、试管（18mm180mm、28mm198mm）及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）、注射器（20ml或30ml等）、注射针头、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）、不锈钢桶（带盖）。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入与约2cm适宜疏松的棉花，置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞或棉塞，若 振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于高压蒸汽121灭菌30min，烘干或160干热灭菌2h，备用。2.2.3 用具大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%75%乙醇溶液浸泡）。无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。接种环（白铱金或镍铬合金，环径45mm、长度610cm）、乙醇灯、乙醇棉球或碘状棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖（12cm）、实验记录纸等。3 试液、稀释剂和试剂3.1 试液3.1.1 0.1%苯扎溴铵溶液或其它适宜消毒液（供洗手、擦拭操作台面用）。3.1.2 5%石炭酸溶液或其他适宜消毒液（配好后装入玻璃消毒缸内，供消毒菌吸管用）。3.1.3 75%乙醇溶液。3.1.4 碘酊或碘伏溶液。3.2 稀释剂和试剂稀释剂配制后，高压蒸汽灭菌法灭菌。3.2.1 0.9%无菌氯化钠溶液附录3.1。3.2.2 pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液附录3.2。3.2.3 无菌聚山梨酯80氯化钠溶液附录3.4。3.2.4 pH6.8无菌磷酸盐缓冲液。3.2.5 pH7.6无菌磷酸盐缓冲液按药典附录 D配制后，过滤，分装，灭菌。3.2.6 0.1%无菌氯化三苯四氮唑溶液（TTC）附录2.15。3.2.7 pH7.2无菌磷酸盐缓冲液附录3.5。4 培养基4.1 营养琼脂培养基附录5.2。4.2 玫瑰红钠琼脂培养基附录5.3。4.3 酵母浸出粉胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基附录5.4。培养基制备注意事项：4.3.1 采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基pH值进行校验。若为自配培养基，原料应挑选，琼脂凝固力应测定，以确定配制时琼脂用量。试剂规格应为化学纯以上。4.3.2 配制的培养基不应有沉淀。如有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。4.3.3 培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。4.3.4 培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。4.3.5 灭菌后