游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法).doc

八饮料中游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合饮料中游离色氨酸的测定本方法检测限：饮料中游离色氨酸为30g/100ml。（一） 方法提要 试样的游离色氨酸经处理后，在高效反相色谱C18柱上分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量游离色氨酸的含量。（二） 仪器1. 高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。2. 超声清洗仪（溶剂脱气用）。3. 天平（精确到0.0001g）。4. 微孔滤膜（HF 0.45 m）。（三）试剂1. 1.0mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠（分析纯），加适量去离子水并稀释到100ml。2. 甲醇（色谱纯）。3. 0.1%(m/V)磷酸溶液：1.0g磷酸（分析纯）加水至1000mL，溶解混匀，过微孔滤膜0.45m，待用。4. 色氨酸对照品，Fluka公司(纯度99.5%)。5. 色氨酸标准溶液：精密称取色氨酸对照品约0.0300g，移入100ml容量瓶中，加入少许水，再加入50L1.0mol/L氢氧化钠溶液，超声溶解并用水定容到100mL，成浓度为300g/mL的标准储备液。取标准储备液5.0mL用去离子水定容到50mL，成为浓度为30g/mL的标准溶液。（四）测定步骤1. 样品处理：汽水、可乐型饮料：取均匀试样置于小烧杯中，微温除去二氧化碳（或超声脱气10min），经0.45m微孔滤膜过滤后供进样用。果汁类：取均匀试样置于离心管中，5000rpm/min离心20min，上清液经0.45m微孔滤膜过滤后供进样用。2. 标准工作曲线制作。精密吸取色氨酸标准溶液1.0，5.0，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用水定容到100mL，摇匀。分别取10L标准工作系列溶液进样分析，以测得的色氨酸的峰面积，分别对色氨酸的浓度绘制标准曲线。3色谱条件色谱柱：Ultimate C18液相色谱柱 4.6mm i.d. 150mm, 5m。流动相：甲醇0.1%磷酸溶液=18+82（V+V）。流速：1mL/min。柱温：35。紫外检测波长：280nm。4. 样品测定：取样品滤液10L进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量。标准色谱图（五） 结果计算根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中游离色氨酸含量，计算出样品中的含量。试样中游离色氨酸含量按下式进行计算。X= 式中：X试样中游离色氨酸含量，单位为毫克每一百克（mg/100g）；c 样液的浓度，单位为微克每毫升（g/ mL）；计算结果保留三位有效数字。（六） 注释1. 色氨酸的化学名称为L-2-氨基-3(-吲哚)丙酸，分子式为C11H12N2O2。它为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。在水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。色氨酸是一种必需氨基酸，它的作用主要有两个，即防止烟酸缺乏症和增加血清素水平。在所有氨基酸中，色氨酸被认为是特定食品中含量最少的。虽然稀少，色氨酸是非常必要的，因为它会由肝脏转换成维生素B3（烟酸和烟酰胺），这有助于防止烟酸缺乏症。色氨酸的作用还包括负责神经传递素的生产。色氨酸作为一种血清素的初期形式，这种神经传递素负责控制睡眠模式，食欲和情绪。2. 文中试剂如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。参考文