端粒在皮肤光老化中的作用改善皮肤光老化的临床与基础ppt课件

端粒在皮肤光老化中的作用 改善皮肤光老化的临床与基础 1 研究背景 光老化 在内源性老化的基础上加之环境因素 主要为紫外线辐射 的损害而发生的外源性老化 临床上表现为提前出现更加严重的老化表现 PH 端粒与光老化 空白组1UVA组8 MOP UVA组 空白组UVA8 MOP UVA8 MOP UVA 照光三个月的小鼠皮肤 光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用 照光7d后各组细胞超微结构 8 MOP UVA组细胞出现了明显的细胞衰老改变 胞浆中可见较多空泡 细胞核中可见较多絮状物 核仁不清晰 局部出现核膜内褶 核内染色质凝集且分布不均 线粒体肿胀 粗面内质网扩张 脱颗粒 可见较多次级溶酶体 8000 8 MOP UVA组15000 8000 UVA组15000 8000 8 MOP组15000 8000 对照组15000 端粒结构特点 光损伤易感性 光老化中紫外线引起的基因的氧化应激损伤 大部分情况下发生在鸟嘌呤残基 端粒的重复序列TTAGGG二分之一是鸟嘌呤残基且3 末端也富含鸟嘌呤 TTAGGG 结构 2 端粒与光老化 NB UVB和PUVA 临床上光疗法 治银屑病 白癜风 的主要副作用之一是皮肤易出现光老化外观 光老化模型 已联合利用8 MOP UVA建立小鼠皮肤光老化模型 在此基础上利用人皮肤成纤维细胞经相同处理建立体外光老化模型 内源性老化中的端粒缩短机制1 是否参与紫外线辐射引起的光老化 2 光老化进程中光损伤是如何加快端粒缩短的 研究内容 实验流程 对照组 8 MOP组or 8 MOP UVA UVA组 MTT法检测细胞活性绘制细胞生长抑制曲线 流式细胞术检测细胞周期分布 透射电镜观察细胞超微结构 细胞化学酶法检测 半乳糖苷酶 处理后24h 48h 72h 7d 分光光度法检测细胞内氧化应激损伤水平 MDA SOD及T AOC 免疫荧光检测细胞内氧化光产物8 oxo dG Real TimePCR检测端粒的相对长度 T S WesternBlot检测细胞老化相关蛋白P53 P21WAF 1及P16INK 4a 药物组 1 各组细胞照光处理后各时间段细胞半乳糖苷酶阳性率 对照组8 MOP组 UVA组8 MOP UVA组 照光后24h 48h 72h及7d后8 MOP UVA联合处理组SA Gal阳性细胞比例较对照组均明显增高 P 0 01 且随时间积累而逐渐增高 r 0 988 结论 8 MOP UVA联合作用可使皮肤FB出现光老化生物学特性改变 SA Gal 电镜 2 照光后2h各组细胞光产物8 oxo dG8 羟基脱氧鸟嘌呤 对照组 UVA组 8 MOP UVA组8 oxo dG阳性细胞核比例明显高于对照组 P0 05 3 Real TimePCR检测各组细胞端粒相对长度比较 8 MOP UVA联合处理组端粒相对长度明显短于对照组 2 57 0 05vs6 63 0 12 P0 05 4 WB检测各组细胞老化相关蛋白表达水平 各组老化相关蛋白表达水平比较 8 MOP UVA联合处理组P53 P21WAF 1及P16INK 4a蛋白表达水平明显高于对照组 P值均 0 01 而UVA辐射组相关蛋白水平也有明显增高 P值均 0 05 8 MOP UVA联合处理组及UVA照射组两组间经t检验比较 前者相应蛋白表达水平均高于后者 P值均 0 05 讨论 在UVA照射下 外源性光敏剂8 MOP使细胞的基因氧化应激损伤显著加重 产生大量氧化光产物8 oxo dG oxodeoxyguanosine8 MOP UVA联合作用后 细胞端粒结构上由于较多氧化光产物的产生 使其端粒缩加速 提前到达临界长度 8 MOP UVA联合作用后由于端粒缩短加速 提前激活P53老化检查点 并依次激活下游信号蛋白 细胞周期激酶抑制剂P21WAF 1及P16INK 4a蛋白 相应蛋白表达水平明显增高 综上所述 8 MOP UVA联合作用可导致基因的氧化应激损伤 端粒受损严重 缩短加速 并激活老化相关蛋白表达 3 药物 端粒 光老化 细胞周期生物钟 1 GS Rg1有效降低老化特征酶 半乳糖苷酶表达 各组细胞照光后相应时间点SA Gal及8 oxo dG表达水平 GS Rg1各浓度干预组基因氧化产物8 oxo dG及SA Gal阳性率均明显低于光老化模型组 P 0 05 且与药物剂量负相关 r值依次为0 968 0 943 3 GS Rg1显著减缓端粒缩短 各组细胞于照光后第7日端粒长度比较 GS Rg1各浓度干预组端粒相对长度 2 57 0 05 明显长于8 MOP UVA联合处理组 6 63 0 12 P0 05 4 GS Rg1显著降低老化相关蛋白的表达水平 Actin P53 P21WAF 1 P16INK 4a 照光后第7日老化相关蛋白表达水平 GS Rg1各浓度干预组老化相关蛋白P53 P21WAF 1及P16INK 4a的表达水平明显低于8 MOP UVA组 P值均 0 01 且各浓度组之间蛋白表达水平与GS Rg1药物浓度有明显的负相关 r1 0 981 r2 0 916 r3 0 914 GS Rg1预处理的人真皮成纤维细胞显示出较强的氧化应激耐受性 细胞内基因氧化产物8 oxo dG产生明显减少 GS Rg1预处理的细胞端粒结构中相应碱基损伤较光老化模型组明显减弱 端粒结构稳定性加强 端粒缩短减缓 GS Rg1预处理的细胞由于端粒缩短减缓 其对老化检查点的激活受抑制 老化相关蛋白表达水平明显降低 综上所述 GS Rg1预处理可阻止基因损伤后对细胞老化P53检查点的激活 抑制其后细胞周期激酶抑制剂P21WAF 1及P16INK 4a的表达 减弱两者对细胞周期激酶CDK的抑制作用 使得CDK得以和核因子Rb蛋白结合 Rb蛋白磷酸后促进细胞生长周期相关基因进行转录 使得细胞恢复分裂活性 讨论 1 黄芩苷对UVA辐射后 半乳糖苷酶阳性细胞比率的影响 黄芩苷对端粒缩短及光老化的影响 2 黄芩苷对UVA辐射后细胞端粒长度的影响 3 黄芩苷对UVA辐射后细胞p53 p16和c mycmRNA水平的影响 p53 p16 c myc 4 黄芩苷对UVA辐射后细胞p16和c myc蛋白水平的影响 结论 人参皂苷 Rg1可有效缓解细胞内氧化应激损伤 减少基因中光产物形成 减轻端粒损伤从而抑制端粒缩短 阻止端粒临界长度激活P53老化检查点 阻止细胞周期受抑的信号转导 降低老化相关蛋白表达水平 从而发挥显著的抗光老化作用黄芩苷可有效保护人成纤维细胞免于氧化损伤和延缓光老化进程 其抗光老化机制包括延缓端粒缩短 调节老化相关基因包括p66 p53 p16 c myc MMP 1和TIMP 1表达有关 但黄芩苷对细胞端粒酶活性没有影响 光疗临床改善光老化 Traditonal激光磨削 临床图片 点阵激光 临床图片 强脉冲激光治疗光老化及保健嫩肤 临床图片 空白2UVA IPL组8 MOP UVA IPL IPL对小鼠光老化皮肤的改善作用 空白组1UVA组8 MOP UVA组 LuoD CaoY WuD XuY ChenB XueZ ImpactofintensepulselightirradiationonBALB cmouseskin invivostudyoncollagens matrixmetalloproteinasesandvascularendothelialgrowthfactor LasersMedSci 2007Dec15 空白