检测策略ppt课件

抗核抗体 ANA 实验室检测策略 抗核抗体检测策略 美国风湿学会 ACR 立场声明 HEp 2细胞包含大约100至150种自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原 8 10 大约35 SLE患者和IFT ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果 建议 IFT ANA仍然为ANA检测的金标准 医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时 必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性 实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法 ANA筛查 间接免疫荧光法 IFT 抗原谱完整 细胞核 细胞浆 检测ANA的金标准 具有很高的敏感性和特异性 基质组合 HEp 2细胞 灵长类肝 HEp 2细胞 灵长类肝 确认IIF的荧光模型 如 肌动蛋白 核糖体P蛋白 区分IIF的荧光模型 如 着丝点 核点 SS A B Sm RNP Ku 还可获得其它结果 如 ANCA 肌内膜 谷氨酰胺转移酶 确认IIF的荧光模型 HEp 2细胞 灵长类肝 区分IIF的荧光模型 HEp 2细胞 灵长类肝 区分IIF的荧光模型 HEp 2细胞 灵长类肝 区分IIF的荧光模型 HEp 2细胞 区分IIF的荧光模型 灵长类肝 Sm RNP SS A SS B Ku 区分IIF的荧光模型 灵长类肝 结果 pANCA ANA检测 分型实验 ELISA 单特异ELISA 适合大批量标本的检测 ENA谱 各种高纯抗原的组合欧蒙斑点法 欧蒙印迹法 ENA谱 各种高纯抗原的组合免疫印迹法 适合用于区分一些特殊抗体 如RNP 70K A C 适合检测针对目前还不能纯化的抗原的抗体 如Ku ELISA ENA谱 欧蒙斑点法 ENA谱 欧蒙印迹法 ENA谱 欧蒙推荐的ANA稀释方案 欧蒙ANA IIF稀释方案 欧蒙ANA间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为1 100 即该检测系统的正常参考范围为1 100 梯度稀释时的稀释因子为1 3 2 推荐每个标本至少平行做两个稀释度 1 100和1 1000 由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释因子不同 因而不同厂家的ANA滴度结果不能直接进行比较 欧蒙实验室ANAIIF的研究结果 起始稀释度1 100时 正常人血清中ANA95 以上为阴性 ANA阳性的抗体滴度明显低于风湿性疾病患者 多数风湿性疾病患者血清中ANA滴度大于1 100 但大于1 32000以上的抗体滴度也较少见 例数 抗体滴度 1 100 风湿性疾病患者 15000份正常人 1 10000 欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案 起始稀释度 1 1001 1 000 抗体滴度 1 1001 1 0001 3201 3 2001 10 000 报告结果 抗体浓度范围 原因1 高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖 抗表皮基底膜抗体 喉舌 1 10 1 100 推荐一个标本平行作两个稀释度1 100和1 1000 1 原因2 在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖 1 1000 1 1000 ANA核均质型和着丝点型 1 100 1 100 ANA核均质型和核仁型 推荐一个标本平行作两个稀释度1 100和1 1000 2 推荐一个标本平行作两个稀释度1 100和1 1000 3 两个滴度平行检测 1 100和1 1 000 通过一次实验 就可估计抗体的滴度 1 1 000 推荐一个标本平行作两个稀释度1 100和1 1000 4 ANA结果报告及注意事项 ANA结果报告 报告ANA结果时 应包括如下几个方面 定性结果 阴性或阳性 荧光模型 看到的所有模型均应报告 每种荧光模型的滴度 建议 如下一步的确认实验等 所用检测系统的参考范围 ANA结果报告举例 1 1000 核均质型 1 100核仁型 1 1000 1 100 结果报告 核均质型 1 100着丝点 1 1000 ANA检测的注意事项 1 ANA的滴度结果非常重要 所用检测系统的起始稀释度 正常参考范围 只是一个统计值 如果以此为临界值 部分正常人也可出现阳性 5 10 在年龄大于60岁的老年人中 阳性率更高 但滴度较低 ANA滴度越高 与自身免疫性疾病的相关性就越大 ANA检测的注意事项 2 ANA的荧光模型 荧光模型与相应靶抗原在细胞内的分布相关 可初步提供自身抗体针对的靶抗原信息 并可为下一步的确认实验提供指导作用 还可根据荧光模型结果判断确认实验结果的有效性 以排除非特异性反应 ANA检测的注意事项 3 ANA检测流行病学资料的积累 目前 IIF检测ANA时 有很多荧光模型相对应的靶抗原尚不清楚 尤其是这些荧光模型的临床意义不明确 但随着人们对自身免疫病及其相关自身抗体研究的深入 越来越多的以前认为没有临床意义的抗体成为新的研究焦点 对临床意义和靶抗原不明确的荧光模型也应向临床报告 以引起临床的重视 总结 间接免疫荧光法为检测ANA的标准