病原性球菌及检验.doc

二、链球菌属（一）概念链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。（二）生物学特性1.形态与染色：革兰染色阳性。菌体呈圆形，直径为0.81.0m，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。2.培养特性：本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。最适温度为3537，最适pH为7.47.6，在5%C02环境下生长更好。在血琼脂平板上，经35 1824h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.10.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。3.生化反应：本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）4.分类（1）根据溶血能力分类：利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，1）甲型（）溶血性链球菌：又称草绿色链球菌。本菌为条件致病菌。2）乙型（）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，透明溶血环。该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。3）丙型（）链球菌：无溶血环。一般无致病性。（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类：即常用Lancefield血清分型法，将链球菌分为A、B、C、DT等18个群（其中和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。5.对理化因素的抵抗力：不强。（三）致病性A群链球菌：草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。B群链球菌常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集：不同疾病采集不同标本。2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：革兰染色，镜检。如符合链球菌的形态特征可初报。（2）直接检测抗原。（3）分离培养：血液标本，以无菌操作取两份血液各810ml，分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，有细菌生长，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。脓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰阳性，可初报。上述的培养物经351824h培养后，观察菌落特征和溶血情况。链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现-溶血或-溶血，也可不出现溶血。然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生-溶血，它们的菌落形态非常相似，应予以区别。猪链球菌在羊血平板上为溶血，在兔血平板上呈溶血。（4）鉴定：见生化反应。三、肺炎链球菌（一）概念肺炎链球菌属链球菌科，链球菌属。（二）生物学特性1.形态与染色：革兰阳性，呈矛头状，成双排列，球菌。有荚膜（在人或动物体内易形成），无鞭毛，无芽胞。2.培养特性：需氧或兼性厌氧。最适的温度为3537，最适的pH7.68.0。营养要求较高。在血琼脂平板上可形成脐状菌落，周围有草绿色溶血圈。在液体培养基中培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。3.生化反应：菊糖、胆汁溶解试验阳性、0ptochin敏感试验阳性。（与草绿色链球菌的鉴别。）（三）致病性致病物质：荚膜。所致疾病主要有大叶性肺炎、支气管炎。（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集2.试验方法及鉴定（1）直接涂片检查：经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。（2）分离培养：血液、脑脊液需增菌培养，经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，肺炎链球菌可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。无须增菌培养的脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置5%10%C02环境中，经35 1824h培养后观察茵落，并取可疑菌落作进一步鉴定。（3）鉴定试验1）胆汁溶解试验：阳性。2）菊糖发酵试验：阳性。3）动物试验：小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。4）荚膜肿胀试验：阳性。5）0ptochin敏感试验：阳性。6）快速乳胶凝集试验阳性。四、肠球菌属（一）概念肠球菌属是肠道的正常栖居菌。（二）生物学形状为革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。营养要求高，需氧及兼性厌氧，在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长（此点可与链球菌鉴别）。在血平板上主要表现为-和-溶血。触酶阴性，多数肠球菌能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）。与同科链球菌的显著区别在于肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和1045环境下生长，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。目前，肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，其所致感染中最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现溶血。（三）微生物学检查方法与原理合理采取相应标本，如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等，以直接涂片进行初步检查。分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验，可鉴定到属。如鉴定到种还需进行必要的生化试验。对具有临床意义的肠球菌应进行体外药敏试验，一般要测试对-内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨苄西林）、万古霉素和氨基糖甙类（如庆大霉素）的敏感性，耐万古霉素肠球菌（VRE）国外检出率较国内高。 （四）治疗原则治疗肠球菌感染一般采用-内酰胺类和氨基糖甙类联合治疗。五、奈瑟菌属奈瑟菌属为一大群革兰阴性双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳性。本属主要有9个种。其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。（一）脑膜炎奈瑟菌1.概念脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。2.生物学特性（1）形态与染色：为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，坦面相对，菌体直径0.61.5m，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。（2）培养特性：营养要求高，属苛养菌，必须在含有血清或含有多种氨基酸，无机盐等物质的培养基上生长良好。（3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别），触酶试验阳性，氧化酶试验阳性。（4）抗原及分型：主要有四种抗原：荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。根据群特异性荚膜多糖抗原不同，采用凝集反应和琼脂扩散试验可将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。目前，对人致病的主要是A群。偶见8群、C群及1916群引起散发病例。3.临床意义致病物质：菌毛，荚膜，内毒素。所致疾病：脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。主要表现发热，皮肤瘀斑，脑膜刺激症状。存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。4.微生物学检验 （1）标本采集：血液；瘀斑渗出液；脑脊液；鼻咽分泌物。因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色。若发现中性粒细胞内（或胞外）革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初报。2）分离培养：将标本葡萄糖肉汤增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%10%C02环境中，35培养1824h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径12mm的小菌落，经涂片证实为草兰阴性双球菌，并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。3）鉴定：细菌染色形态；氧化酶试验阳性；触酶试验阳性；分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气；荚膜多糖抗原直接凝集试验。5.治疗原则：青霉素G为首选，三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。（二）淋病奈瑟菌1.概念：淋病奈瑟菌简称淋球菌，是淋病的病原体，人类是其唯一的天然宿主和传染源。2.生物学特性（1）形态与染色：本菌的形态与脑膜炎奈瑟菌很相似。在脓汁标本中，此菌通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。无芽胞和鞭毛。（2）培养特性：营养要求较高，须在含有血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质的培养基上生长良好。国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。初次分离时，须置5%10%C02条件下才能生长。（3）生化反应：可发酵葡萄糖、产酸，但不酵解麦芽糖（常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别）。氧化酶和触酶试验均阳性。主要有三种抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。对外界抵抗力极低。3.微生物学检验（1）标本采集：脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，结膜分泌物，血液。（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：收集标本后立即涂片、革兰染色。镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌，可初报。2）分离培养：细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。所采集的标本应及时接种含有两种以上抗生素（万古霉素和多粘菌素等）的营养培养基（EPV）上。淋球菌对培养基的营养要求很高，且对冷、热、干燥和消毒剂抵抗力低，故采样后须立即接种于预温的选择性培养基和非选择性培养基中，如巧克力平板，置于含5%10%的二氧化碳环境中，35培养48h。取小而透明似水滴状、无色素易乳化菌进一步鉴定。3）鉴定：取可疑菌落进行涂片，革兰染色镜检，若见革兰阴性双球形，生化反应：氧化酶阳性，仅分解葡萄糖产酸；免疫学方法：荧光抗体染色法、协同凝集试验；核酸探针杂交法。氧化酶试验阳性，可初判，并进行相关的生化反应，如仅发酵葡萄糖而不发酵麦芽糖与蔗糖，以及30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。4.临床意义：淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。5.治疗原则：一般为三代头孢菌素，氟喹诺酮类、壮观霉素可作为替代药物。本章练习题：淋病奈瑟菌与脑膜炎奈瑟菌用哪项实验鉴别 A.葡萄糖发酵试验B.麦芽糖发酵试验C.氧化酶试验D.触酶试验E.革兰染色正确答案：BSPA是 A.肠杆菌科的细菌的抗原B.葡萄球菌细胞壁的蛋白成分C.沙门菌的表面抗原D.核蛋白抗原E.链球菌属表面抗原正确答案：B鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌可用A.外斐试验B.肥大试验C.乳糖发酵试验D.菊糖分解试验E.血浆凝固酶试验正确答案：D耐甲氧西林的表皮葡萄球菌为 A.MRSAB.MRSEC.MRSOD.MRNSE.SPA正确答案：BB群链球菌不引起下列哪种疾病 A.败血症B.肺炎C.脑膜炎D.咽喉炎E.风湿热正确答案：E淋病奈瑟菌的重要致病因素是A.菌毛B.杀白细胞素C.荚膜D.内毒素E.以上都是正确答案：A引起剥脱性皮炎的细菌是 A.肺炎球菌B.链球菌C.金黄色葡萄球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.肠球菌正确答案：C一位老年患者因外伤住院治疗，插导尿管一周后出现尿路感染。取尿液检查，革兰染色见阳性球菌，有的呈短链排列，分离培养营养要求较高，血培养生长较好，有甲型溶血；触酶阴性