动物细胞工程31769ppt课件

动物细胞融合与单克隆抗体 温故而知新 植物细胞杂交 马铃薯番茄 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 植物细胞的融合 杂种细胞AB 人工诱导 传说中的天马能否利用细胞工程技术得以实现呢 一 动物细胞融合 也称细胞杂交 1 概念 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 2 结果 形成杂交细胞 其特点是具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 4 原理 细胞膜的流动性 5 诱导细胞融合的方法 物理法 离心 振动 电激 化学法 聚乙二醇 PEG 生物法 灭活的病毒 3 实质 核融合 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合 形成杂种细胞 细胞膜具有一定的流动性 生物法 灭活的病毒 失去感染能力 保留抗原结构 6 过程 动物细胞A动物细胞B 诱导 融合 膜融合 质融合 多核体 有丝分裂 核融合 2个完整的杂交细胞AB 注意 动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起 让它们随机融合后 再从中筛选杂交细胞 7 意义 突破了有性杂交方法的局限 使远缘杂交 种间 属间 科间 动植物之间 成为可能 注意 不能获得新物种 8 应用 成为研究细胞遗传 细胞免疫 肿瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术为制造单克隆抗体开辟了新途径 最重要的用途 制备单克隆抗体 9 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 克服远缘杂交不亲和障碍获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性细胞的全能性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理 离心 振荡 电激 化学 聚乙二醇 生物 灭活的病毒 制备单克隆抗体等 物理 化学方法 同左 诱导成杂种植株 形成杂交细胞 缺点 产量低 纯度低 特异性差 二 单克隆抗体 1 常规抗体制备 人的相应的抗体目的基因 2 基因工程制备 细菌细胞 导入 抗体 培养液中提取 向动物体内反复注射抗原 使动物产生抗体 然后从血清中分离所需抗体 体液免疫过程 缺点 操作复杂 二 单克隆抗体 3 细胞工程制备单克隆抗体 一个B淋巴细胞 只分泌一种特异性抗体 杂交瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞 癌细胞 能无限增殖 融合 由单个细胞经过多次无性繁殖 克隆 形成基因型相同的细胞群 这一细胞群所产生的化学性质单一 特异性强的抗体称为单克隆抗体 单克隆抗体 概念 设计方案 创始人 米尔斯坦 杂交细胞 注入小鼠体内 从脾脏细胞中分离B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 筛选出杂交瘤细胞 B瘤 筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞 从培养液中提取 从小鼠腹水中提取 人工诱导融合 克隆化培养 特定的选择培养基 单克隆抗体的制备过程 特定的抗原 羊的红细胞 方法 融合的具有同种核的细胞 融合的杂种细胞 未融合的亲本细胞 BB 瘤瘤 B瘤 B 瘤 抗体检测 特点 单克隆抗体的特点和应用 与常规抗体相比 单克隆抗体特异性强 灵敏度高 产量高 优越性十分明显 应用 特点 所用技术 动物细胞融合 动物细胞培养 课堂小结 两个过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个 一 一个诱导细胞融合的新方法 灭活的病毒 一个新细胞 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强 灵敏度高的优势 感谢大家 单克隆抗体的基本概念抗体是由B淋巴细胞分化形成的浆细胞合成 分泌的 每一个B淋巴细胞在成熟的过程中通过随机重排只产生识别一个抗原的抗原受体基因 动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系 重排后具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体 当机体受抗原刺激时 抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞 被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞 浆细胞 和记忆B细胞 大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液 体液中 如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养 就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群 即单克隆 单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体 称为单克隆抗体 克隆化培养 有限稀释法将杂交瘤细胞稀释 用多孔细胞培养板培养 使每孔细胞不超过一个 通过培养让其增殖 然后检测各孔上清液中细胞分泌物中的抗体 那些上清液可与特定抗原结合的培养孔