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第十八章 药物制剂分析概论 09药本第十八章 药物制剂分析概论药物以制剂形式供临床使用，故药物制剂分析是药物分析的一个重要组成部分。第一节 药物制剂类型及其分析特点 药物制剂可分为多种类型。一方面，与原料药分析相比，药物制剂分析具有不同的特点；另一方面，相同原料药的不同制剂类型，其分析特点也不尽相同。一、药物制剂类型 各国药典均收载了多种类型的药物制剂。其中，片剂、胶囊剂、注射剂和半固体制剂等被ChP2010、EP7、USP32-NF27和JPl5共同收载。二、药物制剂分析的特点与原料药相比，由于药物制剂组成复杂（含有活性成分及辅料）、药物含量低、须进行剂型检查等原因，药物制剂分析通常比原料药分析困难。不同类型的药物制剂，其质量控制项目、质量指标、分析方法及样品预处理方法也常常不同。（简答）（一）药物制剂性状分析的特点 药物制剂的性状分析是药物制剂质量控制不可缺少的组成部分，能够在一定程度上从多方面体现药品的质量。在药品的使用环节，药物制剂的性状分析具有非常重要的意义。（二）药物制剂鉴别的特点 药物制剂的鉴别方法通常以相应原料药的鉴别方法为基础。由于药物制剂均采用经鉴别且符合规定的原料药为活性成分，药物制剂的鉴别有时被弱化。药物制剂的辅料常常干扰药物的鉴别，故药物制剂的鉴别须排除干扰后进行，或取消该鉴别试验，也可改用其他方法（多改为分离分析方法）。当药物制剂的辅料不干扰药物的鉴别时，可直接采用原料药的鉴别试验鉴别药物制剂。 示例18-4 ChP2010阿司匹林及其普通片的鉴别。阿司匹林的鉴别：取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。取本品约0.5g，加碳酸钠试液10ml，煮沸2分钟后，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集5图）一致。阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并发生醋酸的臭气。 阿司匹林片的鉴别：取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g），加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液l滴，即显紫堇色。在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 示例中，片剂的鉴别直接采用了原料药的鉴别试验，取消了原料药的鉴别试验和，增加了具有分离分析功能的HPLC鉴别试验。（三）药物制剂检查的特点 药物制剂检查包括杂质检查、剂型检查和安全性检查。1、杂质检查 药物制剂采用经检验且符合规定的原料药及辅料制备而成。由于合格原料药中的一些杂质（如砷盐）在制剂制备和贮藏过程中一般不会增加，故在制剂分析时常常不再重复检查。对于制剂过程带入的杂质，需进行检查，例如必要时检查薄膜包衣片剂的残留溶剂。通常，药物制剂的杂质检查主要包括以下两个方面：制剂制备和贮藏过程中可能产生的（原料药未控制的）杂质；制剂制备和贮藏过程中可能增加的（原料药已控制的）杂质。如阿司匹林片，虽然在原料药中已检查了游离的水杨酸，但由于阿司匹林极易水解生成水杨酸和醋酸，故片剂中仍需检查水杨酸，只是要求不同，原料中游离水杨酸的限度为0.1，而片剂中允许为0.3。2、剂型检查及安全性检查为了保证药物制剂的稳定性、均一性、有效性和安全性，ChP2010在附录“制剂通则”收载的剂型项下规定了不同剂型的常规检查项目，主要包括剂型检查与安全性检查。此外，药物制剂各品种项下规定的其他剂型检查与安全性检查等也收载于附录中。 示例l8-5 ChP2010葡萄糖及其注射液的检查。 葡萄糖的检查项目：酸度、溶液的澄清度与颜色、乙醇溶液的澄清度、氯化物、硫酸盐、亚硫酸盐与可溶性淀粉、干燥失重、炽灼残渣、蛋白质、钡盐、钙盐、铁盐、重金属、砷盐和微生物限度。 葡萄糖注射液的检查项目：pH、5-羟甲基糠醛、重金属、无菌、细菌内毒素、其他（注射剂项下有关的各项规定）。 示例中，葡萄糖主要进行杂质检查；由于易滋生微生物，还进行了微生物限度安全性检查。葡萄糖注射液进行了杂质检查、剂型检查和安全性检查。关于葡萄糖注射液的杂质检查，pH是注射液常见的检查项目；5-羟甲基糠醛是注射液制各过程中由葡萄糖在高温等条件下脱水生成的杂质；重金属在注射液生产过程中可能增加，须在葡萄糖已检查且符合规定后再次检查。（四）药物制剂含量测定的特点 药物制剂的含量测定方法多与相应原料药的含量测定方法不同。药物制剂的辅料常常干扰药物的含量测定，故药物制剂的含量测定须采用过滤、提取、色谱分离等方法排除干扰后再进行，或改用选择性更强的分析方法（如HPLC法）。小剂量制剂的含量测定可采用浓缩等方法提高供试品溶液的浓度后再测定，或改用灵敏度更高的分析方法。缓释制剂的含量测定多在采用超声等方法促使药物完全释放后进行。当药物制剂的辅料不干扰药物的含量测定时，可直接采用相应原料药的含量测定方法测定药物制剂的含量。 示例18-6 ChP2010硫酸沙丁胺醇及其制剂的含量测定。 硫酸沙丁胺醇的含量测定：非水溶液滴定法测定。 硫酸沙丁胺醇胶囊的含量测定：用流动相振摇使硫酸沙丁胺醇溶解，滤过，HPLC法测定。 硫酸沙丁胺醇缓释胶囊含量测定：用0.1mol/L盐酸溶液超声溶解硫酸沙丁胺醇，滤过，HPLC法测定。 示例中，原料药与其制剂的含量测定方法不同；不同制剂的含量测定方法虽然相同，但所采用的预处理方法不同。 示例18-7 ChP2010硫酸阿托品及其制剂的含量测定。 硫酸阿托品的含量测定：采用非水溶液滴定法。 硫酸阿托品片（0.3mg/片）的含量测定：采用酸性染料比色法。 示例中，原料药与其制剂的含量测定方法不同；硫酸阿托品片是小剂量制剂，故采用高灵敏度的酸性染料比色法测定含量。第二节 片剂分析 片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂。片剂以口服普通片为主，另有含片、咀嚼片、阴道泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。本节主要介绍口服普通片的分析。一、性状ChP2010附录“制剂通则”片剂项下规定，片剂外观应完整光洁，色泽均匀。此外，片剂还应符合正文各品种项下的性状描述。二、鉴别试验 鉴别片剂时，各国药典一般采用过滤、离心、提取等操作排除辅料干扰，再依据药物的性质，参考相应原料药的鉴别方法，从化学法、光谱法、色谱法及其他方法中选用24种不同原理的分析方法，组成一组鉴别试验。参见示例18-3 ChP2010甲苯磺丁脲及其片剂的鉴别和示例18-4 ChP2010阿司匹林及其普通片的鉴别。三、剂型检查 ChP2010附录“制剂通则”片剂项下规定，除另有规定外，口服普通片应进行两项常规检查：【重量差异】和【崩解时限】。当主药与片剂辅料难以混合均匀时，应以含量均匀度检查替代重量差异检查；当片剂中的主药水溶性差时，应以溶出度测定替代崩解时限检查。（一）重量差异与含量均匀度 重量差异（uniformity of mass，weight variation或mass variation）系指按规定称量方法称量片剂时，每片的重量与平均片重之问的差异。 含量均匀度（uniformity of content或content uniformity）系指小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂的每片（个）含量符合标示量的程度。 重量差异与含量均匀度统称为剂量单位均匀度（uniformity of dosage units），系指多个剂量单位中所含药物量的均匀程度。片剂生产过程中，由于颗粒的流动性及均匀度较差、生产设备的性能较低等原因，可能使片剂的重量产生差异。当主药与片剂辅料混合均匀时（按重量计），重量差异检查是片剂剂量单位均匀度检查的简便方法。 但是，当主药与片剂辅料难以混合均匀时，片重差异不能准确反映片剂中主药含量的均匀程度，应以含量均匀度检查替代重量差异检查。ChP2010规定：标示量不大于25mg或主药含量不大于25（g/g）的片剂应检查含量均匀度。 凡规定检查含量均匀度的片剂，不再检查重量差异。1、ChP2010重量差异检查法：取供试品20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与平均片重相比较（凡无含量测定的片剂，每片重量应与标示片重比较），按表18-3中的规定，超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度l倍。 薄膜衣片应在包薄膜衣后检查重量差异并符合规定。糖衣片的片心应检查重量差异并符合规定，包糖衣后不再检查重量差异。2、ChP2010含量均匀度检查法：除另有规定外，取供试品10片（个），照各品种项下规定的方法，分别测定每片（个）以标示量为100的相对含量x，求其均值牙和标准差S以及标示量与均值之差的绝对值A。 含量均匀度的限度应符合各品种项下的规定。 示例18-8 ChP2010硫酸阿托品片（0.3mg/片）的含量均匀度检查法：取本品1片，置具塞试管中，精密加水6.0ml，密塞，充分振摇30分钟使硫酸阿托品溶解，离心，取上清液作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定含量，应符合含量均匀度检查法的规定。 示例中，由于硫酸阿托品片的标示量为0.3m/片，小于25mg/片，故需进行含量均匀度检查。 （二）崩解时限与溶出度 崩解时限（disintegration）系指口服固体制剂应在规定时间内，于规定条件下全部崩解溶散或成碎粒，除不溶性包衣材料或破碎的胶囊壳外，全部通过筛网。如有少量不能通过筛网，应已软化或轻质上漂且无硬心。 溶出度（dissolution）系指在规定条件下药物从片剂等制剂中溶出的速率和程度。 口服片剂在胃肠道中的崩解是药物溶解、被机体吸收、发挥药理作用的前提。口服片剂生产过程中，受压缩力、可溶性成分与润湿剂、物料的压缩成型性与黏合剂、崩解剂等的影响，如果在一定时间内片剂不能在体内崩解，便不能发挥其应有的作用。因此，崩解时限是口服片剂的常规检查项目。 但是，崩解不意味着药片的完全溶解，甚至也不意味着片中药物的完全溶解。对于难溶药物的片剂，崩解后药物的溶出直接影响药物的吸收。与崩解时限相比，溶出度与片剂的药理作用之间具有更高的相关性，故难溶药物应以溶出度测定替代崩解时限检查。 凡规定检查溶出度的制剂，不再检查崩解时限。1、ChP2010片剂崩解时限检查法：将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，浸入1000ml烧杯中，并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25mm，烧杯内盛有温度为371的水，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下15mm处。除另有规定外，取供试品6片，分别置上述吊篮的玻璃管中，启动崩解仪进行检查，各片均应在15分钟内全部崩解。如有l片不能完全崩解，应另取6片复试，均应符合规定。表18-4为ChP2010和EP7收载的片剂崩解时限检查。注：如因片剂黏附于挡板而未完全崩解，结果无效；应除去挡板，另取6片复试。2、ChP2010溶出度测定法（1）第一法（篮法）：测定前，应对仪器装置进行调试，使转篮底部距溶出杯内底部25mm士2mm。分别量取经脱气处理的溶出介质，置各溶出杯内，实际量取的体积与规定体积的差异应不超过士1，待溶出介质温度恒定在37士0.5后，取供试品6片，分别投入6个干燥的转篮内，将转篮降入溶出杯中，注意供试品表面应无气泡，按各品种项下规定的转速启动仪器，计时；至规定的取样时间（实际取样时间与规定时间的差异不超过士2），吸取溶出液适量（取样位置应在转篮顶端至液面的中点，距溶出杯内壁不小于10mm处；须多次取样时，所量取溶出液的体积之和应在溶出液的1之内，如超过总体积的1时，应及时补充相同体积的温度为37士0.5的溶出介质，或在计算时加以校正），立即用适当的微孔滤膜滤过，自取样至滤过应在30秒钟内完成。取澄清滤液，照该品种项下规定的方法测定，计算每片的溶出量。（2）第二法（桨法）：除将转篮换成搅拌桨外（当各品种项下规定需要使用沉降篮或其他沉降装置肘，可将片剂等先装入规定的沉降篮内），其他装置和要求与第一法相同。（3）第三法（小杯法）：使用250ml溶出杯及相应搅拌桨，适用于测定药物含量较低的片剂溶出度。 示例18-9 ChP2010苯巴比妥片的溶出度测定法：取本品，照溶出度测定法（第二法），以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取溶液滤过，精密量取续滤液适量，加硼酸氯化钾缓冲液（pH 9.6）定量稀释制成每lml中约含5ug的溶液，摇匀；另取苯巴比妥对照品，精密称定，加上述缓冲液溶解并定量稀释制成每lml中含5ug的溶液。取上述两种溶液，照紫外-可见分光光度法，在240nm的波长处分别测定吸光度，计算每片的溶出量。限度为标示量的75，应符合规定。 示例中，苯巴比妥在水中极微溶解，故需要检查溶出度。3、ChP2010释放度测定法（1）第一法（用于缓释制剂或控释制剂） 照溶出度测定法项下进行，但至少采用三个时间取样，在规定取样时间点，吸取溶液适量，及时补充相同体积的温度为37士0.5的溶出介质，滤过，自取样至滤过应在30秒内完成。照各品种项下规定的方法测定，计算每片的释放量。 与溶出度测定法相比，释放度测定法至少在三个时间点取样，并须及时补充与所取溶出液体积相同的溶出介质。通常，第一取样时间点为0.52小时，此点的释放量（一般应为30）可作为判断制剂突释的依据；第二取样时间点为累积释放量为50的时间，该释放时间在一定程度上可表征制剂的释药特性；最后的取样时间点为累积释放量为75以上的时间，该点可表征制剂释药的完全程度。（2）第二法（用于肠溶制剂）方法l：酸中释放量。除另有规定外，量取0.1mol/L盐酸溶液750ml，注入每个溶出杯，依法进行释放操作，2小时后在规定取样点吸取溶液适量，依法测定，计算每片的酸中释放量。缓冲液中释放量。上述酸液中加入温度为37士0.5的0.2mol/L磷酸钠溶液250ml（必要时用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8），继续运转45分钟，或按各品种项下规定的时间，在规定取样点吸取溶液适量，依法测定，计算每片的缓冲液中释放量。方法2：酸中释放量。除另有规定外，量取0.1mol/L盐酸溶液900ml，注入每个溶出杯中，照方法l酸中释放量项下进行测定。缓冲液中释放量。弃去上述各溶出杯中酸液，立即加入温度为37士0.5的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）（取0.1mol/L盐酸溶液和0.2mol/L磷酸钠溶液，按3:l混合均匀，必要时用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8）900ml，或将每片转移入另一盛有温度为37士0.5的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）900ml的溶出杯中，照方法1缓冲液中释放量项下进行测定。（3）第三法（用于透皮贴剂）略。四、含量测定 片剂在制剂过程中常加入稀释剂、润湿剂与黏合剂、崩解剂、润滑剂等辅料。这些辅料常干扰片剂的含量测定，需通过预处理排除干扰。现以糖类稀释剂和硬脂酸镁润滑剂的干扰排除为例，讨论片剂的含量测定。（一）糖类的干扰及其排除淀粉、糊精、蔗糖、乳糖等是片剂常用的稀释剂。 其中乳糖本身有还原性，淀粉、糊精、蔗糖虽然本身无明显的还原性，但它们水解后可产生葡萄糖，具有还原性。因此糖类可能干扰氧化还原滴定，特别是使用具有较强氧化性的滴定剂，如高锰酸钾法、溴酸钾法等。 在选择含糖类附加剂片剂的含量测定方法时，应避免使用氧化性强的滴定剂。 同时应用阴性对照品做对照试验，若阴性对照品要消耗滴定剂，说明附加剂对测定有干扰，应换用其他的方法测定。较弱的氧化剂的氧化势稍低，只能氧化药物，对糖不起作用。常把强氧化剂高锰酸钾改成硫酸铈。例如：硫酸亚铁原料的测定，中国药典采用高锰酸钾滴定法，但在测定硫酸亚铁片时，高锰酸钾在酸性条件下，电对的条件电位为+l.51V，该电位可使葡萄糖氧化成葡萄糖酸，有干扰。故中国药典对其片剂改用硫酸铈滴定法。此法是基于在0.5mol/L硫酸溶液中Ce4+eCe3电对的条件电位为1.44V，可氧化Fe2+ 成为 Fe3+ ，而不能氧化葡萄糖为葡萄糖酸。（二）硬脂酸镁硬脂酸镁是片剂常用的润滑剂，是以硬脂酸镁和棕榈酸镁为主要成分的混合物。当采用配位滴定法和非水滴定法测定时，它有干扰。在配位滴定法中，Mg2+也能与EDTA-2Na作用，消耗EDTA-2Na，使含量偏高。在非水溶液滴定法中，硬脂酸镁为碱土金属的盐类，在冰醋酸中具碱性，消耗高氯酸液，也使含量偏高。若主药含量大，硬脂酸镁的含量小，则对测定结果影响不大，可不考虑其干扰，直接进行测定；但主药含量少而硬脂酸镁含量大时，硬脂酸镁的存在可使测定结果偏高。干扰的排除方法：1、经有机溶剂提取后测定：利用硬脂酸镁在有机溶剂中不溶解，药物在有机溶剂中有一定的溶解度来排除。2、添加掩敝剂排除干扰：在络合量法中。常常采用掩蔽的方法消除干扰。例如，一些生物碱盐类的片剂，在酸性溶液中与KCdI3生成BKCdI3沉淀。加入过量标准溶液，滤除沉淀后，剩余的Cd2+以EDTA-2Na液滴定。如有硬脂酸镁则有干扰，需加氰化钠（注意该试剂剧毒！）掩蔽。反应如下：Cd2+ + 4CN- Cd(CN)42- 很稳定溶液中游离的Mg2+用EDTA-2Na滴定后，以甲醛为解蔽剂，使Cd2+析出，再进行滴定。Cd(CN)42- + 4HCHO + 4H2O 4HO-CH2CN + Cd2+ + 4OH-硬脂酸镁干扰的消除，也可采用草酸或酒石酸等有机酸直接掩蔽。掩蔽机理，系有机酸与硬脂酸镁作用，生成在冰醋酸和醋酐中难溶的酒石酸镁沉淀。同时产生的硬脂酸，对测定结果无干扰。 示例18-11 ChP2010硫酸奎宁及其片剂的含量测定。 硫酸奎宁的含量测定：取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸lOml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg的(C20H24N202)2H2S04。 硫酸奎宁片的含量测定：取本品20片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于硫酸奎宁0.3g)，置分液漏斗中，加氯化钠0.5g与0.1mol/L氢氧化钠溶液lOml，混匀，精密加三氯甲烷50ml，振摇10分钟，静置，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液25ml，加醋酐5ml与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显玫瑰红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于19.57mg的(C20H24N202)2H2S042H20。 示例中，硫酸奎宁直接采用非水溶液滴定法测定含量；但是，硫酸奎宁片的辅料干扰非水溶液滴定法，可在氢氧化钠碱性条件下，加氯化钠盐析，采用三氯甲烷提取，得到奎宁三氯甲烷溶液，再用非水溶液滴定法测定含量。 示例18-12 ChP2010盐酸氯丙嗪及其片剂的含量测定。 盐酸氯丙嗪的含量测定：采用非水溶液滴定法(参见第11章)。 盐酸氯丙嗪(糖衣)片的含量测定：采用紫外-可见分光光度法(采用过滤法排除片剂中不溶性辅料对吸光度测量的影响，参见第11章)。 示例中，由于盐酸氯丙嗪(糖衣)片中的硬脂酸镁干扰原料药采用的非水滴定法，采用紫外-可见分光光度法测定含量。硬脂酸镁无紫外吸收，故不干扰测定。第三节 注射剂分析 注射剂系指药物与适宜的溶剂(或分散介质)及附加剂制成的供注入体内的溶液、乳状液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂。注射剂可分为注射液(包括溶液型、乳状液型或混悬型注射液)、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。本节主要介绍溶液型注射液的分析。一、性状 ChP2010附录“制剂通则”注射液项下规定，溶液型注射液应澄明；混悬型注射液若有可见沉淀，振摇时应容易分散均匀；乳状液型注射液应稳定，不得有相分离现象。此外，注射液还应符合正文各品种项下的性状描述。二、鉴别试验 鉴别溶液型注射液时，辅料一般不干扰药物的鉴别，可依据药物的性质，参考相应原料药的鉴别方法，从化学法、光谱法、色谱法及其他方法中选用24种不同原理的分析方法，组成一组鉴别试验。若辅料干扰药物的鉴别，可排除干扰后，再进行鉴别。 示例18-13 ChP2010盐酸氯丙嗪及其注射液的鉴别。 盐酸氯丙嗪的鉴别试验：氧化显色反应(参见第11章)。紫外-可见分光光度法(参见第1l章)。红外分光光度法(参见第11章)。氯化物的鉴别反应。 盐酸氯丙嗪注射液的鉴别：取本品适量(约相当于盐酸氯丙嗪lOmg)，照盐酸氯丙嗪项下的鉴别项试验，显相同的反应。取含量测定项下的溶液，照盐酸氯丙嗪项下的鉴别项试验，显相同的结果。 示例中，由于盐酸氯丙嗪注射液中的溶剂和附加剂对盐酸氯丙嗪的鉴别试验和无干扰，故直接选取这两个试验作为其鉴别试验。三、剂型检查及安全性检查 ChP2010附录“制剂通则”注射剂项下规定，除另有规定外，注射液应进行以下常规检查：【装量】、【渗透压摩尔浓度】、【可见异物】、【不溶性微粒】、【无菌】和【细菌内毒素】或【热原】。(一)装量 注射液的注射用量由注射操作者在临用前从注射剂包装中量取。为保证注射液的注射用量至少能够与标示量相同，需对注射液及注射用浓溶液的装量(extractable volume ofparenteral preparations)进行检查。 ChP2010检查法：标示装量不大于2ml者取供试品5支，2ml以上至50ml者(标示装量为50ml以上的注射液及注射用浓溶液照最低装量检查法检查)取供试品3支；开启时注意避免损失，将内容物分别用相应体积的干燥注射器及注射针头抽尽，然后注入经标化的量入式量筒内(量筒的大小应使待测体积至少占其额定体积的40)，在室温下检视，每支的装量均不得少于其标示量。测定油溶液或混悬液的装量时，应先加温摇匀，再用干燥注射器及注射针头抽尽后，同前法操作，放冷，检视。(二)渗透压摩尔浓度 生物膜(如人体的细胞膜或毛细血管壁)多具有半透膜的性质。溶剂通过半透膜由低浓度溶液向高浓度溶液扩散的现象称为渗透。阻止渗透所需施加的压力称为渗透压。渗透压在溶质扩散或生物膜的液体转运中起着极其重要的作用。溶液的渗透压是溶液的依数性之一，依赖于溶液中粒子的数量，反映溶液中各种溶质对溶液渗透压贡献的总和，通常以渗透压摩尔浓度(osmolality)表示，以每千克溶剂中溶质的毫渗透压摩尔为单位。 凡处方中添加了渗透压调节剂的制剂，均应控制其渗透压摩尔浓度。ChP2010规定，除另有规定外，静脉输液及椎管注射用注射液按各品种项下的规定，照渗透压摩尔浓度测定法检查，应符合规定。EP7、USP32-NF27和JPl5均收载了渗透压摩尔浓度测定法。 渗透压摩尔浓度通常采用测量溶液的冰点下降来间接测定。(三)可见异物 ChP2010规定，可见异物(foreign insoluble matter)系指存在于注射剂、眼用液体制剂中，在规定条件下目视可以观测到的不溶性物质，其粒径或长度通常大于50um。注射液中如有不溶性微粒或可见异物，使用后可引起静脉炎、过敏反应等，甚至可堵塞毛细血管，须严格控制。JPl5也收载了该项检查。 可见异物检查法包括灯检法和光散射法。一般常用灯检法。灯检法不适用的品种，如用深色透明容器包装或液体色泽较深(一般深于各标准比色液7号)的品种，可用光散射法。1、ChP2010第一法(灯检法)：应在暗室中进行。2、ChP2010第二法(光散射法)：当一束单色激光照射溶液时，溶液中存在的不溶性物质使入射光发生散射，散射的能量与不溶性物质的大小有关。本方法通过测量溶液中不溶性物质引起的光散射能量，并与规定的阈值比较，以检查可见异物。光散射可见异物检测仪由旋瓶装置、激光光源、图像采集器、数据处理系统和终端显示系统组成，并配有自动上瓶和下瓶装置。检测供试品前须用标准粒子校准仪器。(四)不溶性微粒 可见异物的检查通过目视一般只能检出粒径或长度大于50um的不溶性物质，更小的微粒则难以检出。静脉用注射剂直接进入静脉，且用量大，应严格控制不溶性微粒(sub-visible particles或insoluble particulate matter)。 ChP2010检查法：本法系在可见异物检查符合规定后，用以检查静脉用注射剂(溶液型注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液)及供静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒的大小及数量。不溶性微粒检查法包括光阻法和显微计数法。当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法测定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。光阻法不适用于黏度过高和易析出结晶的制剂，也不适用于进入传感器时容易产生气泡的注射剂。对于黏度过高、采用两种方法都无法直接测定的注射液，可用适宜的溶剂经适当稀释后测定。(五)无菌 与口服制剂相比，注射剂直接给药进入血液循环，故应严格控制其微生物污染。 无菌检查法(sterility)系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在B级洁净区的A级单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，且防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。ChP2010无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。两种方法均由阳性对照、阴性对照和供试品检查三部分组成。(六)细菌内毒素与热原细菌内霉素(bacterial endotoxins)是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，具有致热作用。细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示，1EU与1个内毒素国际单位(IU)相当。 热原(pyrogens)是药品中存在的能引起体温升高的物质，主要来源于细菌内毒素。当污染热原的注射液进入人体后，能引起寒战、发热，严重时甚至可能出现休克、死亡。ChP2010规定，除另有规定外，静脉用注射剂按各品种项下的规定，照细菌内毒素检查法或热原检查法检查，应符合规定。1、ChP2010的细菌内毒素检查法本法系利用鲎试剂检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。本法包括凝胶法和光度测定法。虽然两法均可用于供试品检查，但仲裁时，除另有规定外，使用凝胶法。2、ChP2010的热原检查法(“家兔法”) 热原检查法系将一定剂量的供试品静脉注入(符合要求且已按规定准备好的)家兔体内，在规定时间观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原是否符合规定。与供试品接触的试验用器皿应无菌、无热原。去除热原通常采用干热灭菌法，也可采用其他适宜方法。 ChP2010检查法：取适用的家兔3只，测定其正常体温后15分钟内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度()。如3只家兔中有1只体温升高0.6或高于0.6，或3只家兔体温升高的总和达1-3或高于1.3，应另取5只家兔复试，检查方法同上。四、含量测定 注射莉在制剂过程中常加入溶剂和附加剂。溶剂主要包括注射用水、注射用油、其他注射用非水溶剂。附加剂主要包括渗透压调节剂、pH调节剂、增溶剂、乳化剂、助悬剂、抗氧剂、抑菌剂、麻醉剂等。在测定注射剂的含量时，这些溶剂和附加剂若不产生干扰，可采用原料药的含量测定方法；否则，需通过预处理排除干扰后，再测定。现以溶剂和抗氧剂的干扰排除为例，讨论注射剂的含量测定。 。(一)溶剂水的干扰及其排除 用非水溶液滴定法测定注射液的含量时，溶剂水干扰非水溶液滴定。对于碱性药物或其盐类，可通过碱化、有机溶剂提取游离药物，排除水的干扰；挥干有机溶剂后，用非水溶液滴定法测定药物的含量。JPl5采用此法测定盐酸氯丙嗪注射液的含量(参见第11章)。(二)溶剂油的干扰及其排除 脂溶性药物的注射液(如丙酸睾酮注射液)常以植物油为溶剂。注射用植物油主要为大豆油，其他植物油(如麻油、茶油、花生油、玉米油、橄榄油)精制后也可供注射用。溶剂油影响以水为溶剂的分析方法(如容量法、反相高效液相色谱法)和其他分析方法，排除干扰的方法通常有以下几种。1、有机溶剂稀释法：对于药物含量较高的注射剂，若测定其含量所需的供试品溶液浓度较低，可用有机溶剂(如甲醇)稀释供试品，降低溶剂油的干扰后，再测定。2、萃取法：可采用适当的溶剂(如甲醇)提取药物，排除溶剂油的干扰后，再测定。3、柱色谱法：可选用适宜的固定相和流动相，通过柱色谱分离，排除溶剂油的干扰后，再测定。(三)抗氧剂的干扰及其排除 还原性药物的注射剂，常需加入抗氧剂以增加注射剂的稳定性。注射剂常用的抗氧剂包括亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、维生素C等。由于这些抗氧剂均具有较药物强的还原性，当采用氧化还原滴定法测定药物含量时，抗氧剂便产生干扰。排除干扰的方法通常有以下几种。1、加掩蔽剂：当注射剂中的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠时，如果采用氧化还原滴定法测定注射剂中的主药含量，抗氧剂消耗滴定剂使测定结果偏高。此时，可加入掩蔽剂丙酮或甲醛，与亚硫酸氢钠等发生亲核加成反应，以消除抗氧剂的干扰。但须注意甲醛的还原性，若采用氧化性较强的滴定液，不宜以甲醛为掩蔽剂。 示例18-17 ChP2010维生素C注射液的含量测定：精密量取本品适量(约相当于维生素C 0.2g)，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液lml，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每lml碘滴定液(O.05mol/L)相当于8.806mg的C6H806。 示例中，维生素C具有还原性，易被氧化变质。在制备维生素C注射液时，添加还原性更强的亚硫酸氢钠作为抗氧剂。若直接采用碘量法测定注射液中维生素C的含量，由于亚硫酸氢钠具有更强的还原性，将优先消耗碘滴定液，使测定结果偏高，故加入丙酮作掩蔽剂，消除了亚硫酸氢钠的干扰。2、加酸分解：当注射剂中的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠时，可加入强酸使这些抗氧剂分解，所产生的二氧化硫气体经加热可全部逸出。 示例18-18 ChP2010磺胺嘧啶钠注射液的含量测定：虽然本品中添加了抗氧剂亚硫酸氢钠，但当采用亚硝酸钠滴定法测定其含量时，不需另行处理，抗氧剂不干扰测定。因为亚硝酸钠滴定法须在盐酸酸性条件下滴定，亚硫酸氢钠在此酸性条件下被分解。3、加弱氧化剂氧化：当注射剂中的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠时，可利用主药与抗氧剂的还原性差异，加入弱氧化剂，选择性氧化抗氧剂(不氧化被测药物，亦不消耗滴定液)，以排除干扰。常用的氧化剂为过氧化氢和硝酸。第四节 复方制剂分析 复方制剂是含有2种或2种以上药物的制剂。 复方制剂的分析比一般的制剂的分析更加复杂。它不仅要考虑制剂中赋形剂的干扰，而且要考虑药物各成分之间的相互干扰。为了准确地测定各复方制剂中各药物的含量，我们可以根据情况采取两种方法来对待不同的样品。一种是直接分别测定样品中的各成分的含量。它一般是针对样品各成分的理化性质差别较大，在分析时相互不发生干扰的情况。另一种是分离后再进行测定。它一般是针对样品各成分性质比较接近，分析时相互干扰较大的情况。 色谱法(如高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法)不但具有分离和分析的功能，在一定条件还能实现多组分的同时测定，是目前复方制剂分析应用最多的方法。利用分光光度法时，如果在测定波长和参比波长处，干扰组分的吸光度相等而可消除，并且待测组分的吸光度差异较大时，计算分光光度法也可用于复方制剂中多组分的含量测定。此外，化学计量学的应用也能辅助实现复方制剂分析中相互干扰的多组分的同时测定。 复方制剂的剂型检查，按各剂型检查项下的要求进行，且仅检查复方制剂中符合剂型检查要求的组分。例如，当复方制剂中只有一种组分的标示量低于25mg/片时，仅对该组分进行含量均匀度检查，对其他组分仍进行重(装)量差异检查。(一)示例18-19 ChP2010复方磺胺甲噁唑片的分析。 处方：磺胺甲噁唑400g，甲氧苄啶80g，辅料适量，制成1000片。 本品每片含磺胺甲噁唑应为0.3600.440g，含甲氧苄啶应为72.088.0mg。 两种药物的结构式如下：1、性状本品为白色片。2、鉴别(1)取本品的细粉适量(约相当于甲氧苄啶50mg)，加稀硫酸10ml，微热溶解后，放冷，滤过，滤液加碘试液0.5ml，即生成棕褐色沉淀。(2)取本品的细粉适量(约相当于磺胺甲噁唑0.2g)，加甲醇10ml，振摇，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取磺胺甲噁唑对照品0.2g与甲氧苄啶对照品40mg，加甲醇10ml溶解，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-二甲基甲酰胺(20:2:1)为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液所显两种成分的主斑点的位置和颜色应分别与对照品溶液的两个主斑点相同。(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液两主峰的保留时间应与对照品溶液相应的两主峰的保留时间一致。(4)取本品的细粉适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg)，显芳香第一胺类的鉴别反应。 以上(2)、(3)两项可选做一项。 示例中，复方磺胺甲噁唑片的鉴别包括SMZ和TMP两种成分的鉴别。鉴别试验(4)和(1)直接采用SMZ和TMP的原料药鉴别试验，分别鉴别复方磺胺甲噁唑片中的SMZ和TMP；试验(2)和(3)均在分离后同时鉴别复方磺胺甲噁唑片中的SMZ和TMP，故可选做一项。3、检查(1)溶出度：取本品，照溶出度测定法，含量测定项下的方法，依法测定，计算每片中磺胺甲噁唑和甲氧苄啶的溶出量。限度均为标示量的70，应符合规定。(2)其他：应符合片剂项下有关的各项规定。 示例中，由于磺胺甲噁唑和甲氧苄啶在水中均几乎不溶，故需检查复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑和甲氧苄啶的溶出度。4、含量测定（1）照高效液相色谱法测定。 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-三乙胺(200:799:1)(用氢氧化钠试液或冰醋酸调节pH至5.9)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按甲氧苄啶峰计算不低于4000，磺胺甲噁唑峰与甲氧苄啶峰的分离度应符合要求。 测定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑44mg)，置100ml量瓶中，加O.1mol/L盐酸溶液适量，超声处理使两主成分溶解，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图(图18-1)；另取磺胺甲噁唑对照品和甲氧苄啶对照品各适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每lml中含磺胺甲噁唑0.44mg与甲氧苄啶89ug的溶液，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 含量测定结果的计算公式为：式中，AS和AR分别为供试品溶液和对照品溶液中测定组分的峰面积；CR为对照品溶液中测定组分的浓度(mg/m1)；W为称样量(g)；为平均片重(g/片)。 示例中，仅考虑主药时，由于SMZ分子结构中有芳伯胺基，可采用亚硝酸钠滴定法测定其含量，TMP不干扰测定；TMP分子结构中有氮杂原子，具有碱性，可采用非水溶液滴定法测定其含量，但SMZ也具有弱碱性，干扰测定，故不宜直接采用容量分析法测定复方磺胺哪唑片的含量。尽管可以考虑采用提取后容量分析法，但该法烦琐费时、误差较大。示例采用具有分离分析功能的高效液相色谱法，同时测定复方磺胺甲噁唑片中SMZ和TMP的含量，专属性强、准确度高、方便快捷。（2）紫外分光光度法：由于SMZ和TMP分子结构中均具有共轭体系，可吸收紫外光，但它们的紫外吸收光谱彼此重叠(图18-2)，不能直接用于定量分析。可采用双波长分光光度法从中扣除共存组分的吸光度，不经分离，实现两个药物含量的直接同时测定，但测定结果受仪器性能等因素的影响，重复性较差。现简要介绍如下。双波长分光光度法消除干扰吸收的基本原理：双波长分光光度法双波长分光光度法是在两个不同的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度，以两波长处吸光度的差值(A)作为定量的依据来测定含量的方法。应用双波长分光光度法可以不经分离直接测定多组分样品的含量。波长的选择是本法的关键，一般选择测定组分的最大吸收波长作为测定波长(2)，此处干扰组分有吸收，为消除干扰组分的干扰，需另选择一参比波长(1)，使干扰组分在此二波长处的吸光度相等。分别测定样品在此二波长处的吸光度，以此二波长处吸光度的差值(A)作为定量的依据，该差值与待测物浓度成正比，而与干扰物浓度无关，可消除干扰组分的干扰。双波长分光光度法的原理可推导如下：设样品在2和1处的吸光度分别为A2和A1，测定组分在2和1处的吸光度分别为A12；和A11，干扰组分在2和1处的吸光度分别为A22和A21。因为由于在一定条件下，E为一常数，因此可以用对照品比较法测定药物的含量。双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ） 及甲氧苄氨嘧啶（TMP）的含量：测定复方磺胺甲噁唑片中的SMZ时，因为SMZ在257nm的波长处有最大吸收（见图18-2），TMP在此波长处吸收较小，并在304nm波长附近有一等吸收点，故选择257nm为测定波长（入2），在304nm波长附近选择等吸收波长作为参比波长（入1）。测定TMP时，由TMP紫外吸收图谱（图18-2）可知，在239nm 波长处TMP有较大吸收，而此波长是SMZ的最小吸收，且在295nm波长附近有一等吸收点，故选择239nm作为TMP 的测定波长，在295nm波长附近选择等吸收波长作为参比波长。因仪器的不同，参比波长也不相同，对测定影响较大，所以采用对照品溶液来确定。例如：请根据复方新诺明中磺胺甲基异恶唑含量测定的检验记录，计算其含量：药典规定，本品每片中含磺胺甲基异恶唑应为0.3600.440g。取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺甲基异恶唑50 mg与甲氧苄氨嘧啶10 mg），置100ml量瓶中，加乙醇适量，振摇15分钟使磺胺甲基异恶唑与甲氧苄氨嘧啶溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取在105干燥至恒重的磺胺甲基异恶唑对照品50 mg与甲氧苄氨嘧啶对照品10 mg，分别置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液（1）与对照品溶液（2）。精密量取供试品溶液与对照品溶液（1）、（2）各2ml，分别置100ml量瓶中，各加0.4%氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm为测定波长（2），在304nm波长附近（每间隔0.5nm）选择等吸收点波长为参比波长（1）。再在2与1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（A ），计算，即得。实验数据如下：平均片重：0.5002g，片粉重：0.0621g，SMZ对照品：50.0mg ，标示量：0.4g。（nm） 对照品吸收度 供试品吸收度 257 0.647 0.658304 0.032 0.058解：（2分）式中，A样 ：供试品的吸光度； A对：对照品的吸光度； C对：对照品的浓度； V：供试品初始溶解体积，ml； W：供试品的重量； ：平均片重。（2分）答：复方新诺明中磺胺甲基异恶唑含量为0.393g。（1分）由于供试品和对照品是在完全平行的条件下操作的，所以稀释的倍数可以不考虑。TMP含量的计算方法与SMZ相同。（二）例如：复方氢氧化铝片的处方为：处方中的两个主药氢氧化铝和三硅酸镁均系无机金属盐类药物， 故可采用配位滴定法进行测定。但必须控制不同的测定条件分别加以测定。1、测定方法（1）氧化铝的测定：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于14片），加盐酸2ml与水50ml，煮沸，放冷，滤过，残渣用水洗涤；合并滤液与洗液，滴加氨试液至恰析出沉淀，再滴加稀盐酸使沉淀恰溶解，加醋酸-醋酸铵缓冲液（pH6.0）10ml，精密加乙二胺四醋酸三钠滴定液（0.05mol/L）25ml，煮沸lO分钟，放冷，加二甲酚橙指示液lml，用锌滴定液（0.05molL）滴定，至溶液由黄色转变为红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的乙二胺四醋酸二钠液（0.05mol/L）相当于2.549mgAl2O3。（2）氧化镁的测定：精密称取上述细粉适量（约相当于l片），加盐酸5ml与水50ml，加热煮沸，加甲基红指示液1滴，滴加氨试液使溶液由红色变为黄色，再继续煮沸 5分钟，趁热滤过，滤渣用2氯化铵溶液30ml洗涤，合并滤液与洗液，放冷，加氨试液10ml与三乙醇胺溶液 （12）5ml，再加铬黑T 指示剂少量，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05molL）滴定，至溶液显纯蓝色。每lml 的乙二胺四醋酸二钠液（0.05molL）相当于2.015mgMgO 。2、讨论