车间消毒剂消毒效果验证方案.doc

车间消毒剂消毒效果验证方案目 录1.概述.12.验证目的.13.验证原理.14.验证范围.15.执行程序.16.职责.27.验证内容.28.验证参照物质.29.残留量测定.310.取样方法.211.可接受标准.512.程序与记录.613.检验结果汇总.814.验证结论及评价.1315.验证报告批准.141.概述洁净区用消毒剂对地面、墙面及设备外壁进行消毒，旨在控制微生物污染水平，防止微生物在药品生产环境中污染的必要手段。此验证通过科学的方法采集足够的数据，以证明消毒剂消毒效果的可靠性，并作为使用该消毒剂的依据。本公司车间洁净区为十万级。按照质量管理制度对车间洁净区进行消毒管理。采用75%乙醇和0.1%新洁尔灭每月交替使用，此次验证旨在确认消毒剂按照规定的消毒程序消毒后，能否在达到消毒效果，并在有效期内符合工艺要求。将所得结果与可接受限度比较，若符合可接受标准，则可证实消毒剂选择的有效性及可靠性。2. 验证目的确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到清洁、防止污染的目的，并在消毒有效期内能确保达到生产工艺所需要的效果。3. 验证原理对确定的消毒剂各品种进行连续三次消毒前后取样，并在消毒剂消毒有效期快结束的12小时内取样，采用规定的取样方法和检验方法微生物检验，所得结果若符合可接受标准，则可证实消毒剂品种的选择、消毒的程序及有效期规定的有效性及可靠性。4. 验证范围 4.1适用于洁净区三十万级地面、墙面、操作台及设备外壁。5执行程序文件编码文件名称存放部门生产车间洁净区的清洁规程车间、QA部消毒液配制和使用管理规程车间、QA部洁净区消毒、灭菌规程车间、QA部微生物限度检查标准操作程序车间、QA部三十万级洁净区环境卫生管理规程质检部、QA部6职责姓名职务职责负责验证方案的批准实施、验证报告的批准负责验证方案、验证报告的审核并组织实施负责验证方案、验证报告的审核并组织实施，负责验证过程中本车间人员的安排负责验证方案、验证报告的审核并组织实施，负责验证过程中本部门人员的安排负责验证方案、验证报告的起草，并负责验证过程中现场的监控及取样负责按制订的清洁SOP进行清洗负责样品的检测7验证内容 确认洁净区墙面、地面、操作台以及设备外壁按照规定的消毒程序消毒后，检测结果与可接受标准比较，能否在达到消毒效果，并在规定的有效期内符合工艺要求。8验证参照物质以微生物的残留作为参照。9残留量测定：样品经过处理后，按照微生物限度检查标准操作规程进行检测 。10.取样方法10.1取样程序：选择房间的墙面、地面、设备外壁以及操作台最难清洁的地方作为取样点。为对比消毒前后效果，在消毒前后分别取样。取样程序如下：a. 确定需要擦拭的表面的面积（5cm5cm）b. 用经过灭菌处理的生理盐水润湿经过灭菌处理的棉签，并将其靠在溶剂瓶上挤压，以除去多余的溶剂；c. 将棉签按在取样表面上，用力使其稍弯曲，按图A，平稳而缓慢地擦拭取样表面。在向前移动的同时将其从一边移到另一边。擦拭过程应覆盖整个表面。翻转棉签，按图B，让棉签的另一面也进行擦拭。但与前次擦拭移动方向垂直，见下图A Bd. 擦拭完毕后，将棉签放入试管中，并加盖密封。e. 向试管中加入10ml灭菌后的生理盐水，振摇10分钟。f. 空白样品的制备：按以上第二步湿润棉签，将棉签直接放入试管并加盖密封。g. 取样完成后，在试管上注明有关取样信息并编号。10.2 所有样品送检验室进行检测。11. 检测方法11.1 细菌总数检测：将采样管在混匀器上震荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已融化的4548的营养琼脂15ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36温箱培养48h，计数菌落。采样结果计算方法：细菌总数（cfu/cm2）=平板上菌落数*稀释倍数/采样面积（cm2）11.2 致病菌的检测：11.2.1 金黄色葡萄球菌检测：（1） 增菌、分离去采样液1ml，接种于5mlSCDLP液培养基中，于36增菌24h。取1环上述增菌液，在平板上划线分离，36培养24h。（2） 观察菌落特征：在血琼脂平板上菌落形态为金黄色、圆形凸起、表面光滑、周围有溶血圈。（3） 镜检：挑取典型菌落做图片染色镜检，镜下为革兰阳性、成葡萄状排列的球菌。（4） 生化反应：取可疑菌落作触媒、葡萄糖发酵、血浆凝固酶、甘露醇发酵、新生霉素敏感试验，均为阳性者即为金黄色葡萄球菌。1） 甘露醇发酵试验：取上述可疑菌落接种于甘露醇培养基，于36培养24h。发酵甘露醇产酸者为阳性。2） 血浆凝固试验：a、玻片法：洁净玻片一端一滴灭菌生理盐水，另一端滴一滴血浆，用接种环挑取菌落分别与生理盐水和血浆混匀，5m内观察有无固体颗粒状物，若血浆出现凝块，生理盐水均匀混浊为阳性。b、试管法：吸取1:4新鲜0.5ml，放在灭菌小试管中，再加入等量待检菌24h肉汤培养物，混匀后放入36孵箱中，同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌肉汤培养物作对照，每30s观察一次，6h内出现凝块者为阳性。11.2.2 乙型溶血性链球菌检测（1） 增菌、分离：取样品1ml，接种于1%葡萄糖肉汤，37增菌24h。取1环增菌液在血平板上划线分离，36培养24h。（2） 观察菌落特征：菌落形态为灰白色、半透明、针尖状突起、表面光滑、边缘整齐、周围有溶血圈。（3） 镜检：挑取典型菌落作涂片染色镜检。镜下为革兰阳性、呈链状排列的球菌。（4） 生化反应：取可疑菌落作如下生化试验，如触酶阴性、链激酶试验阳性、对杆菌肽敏感者，即为乙型溶血性链球菌。链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2ml（0.02g草酸钾加5ml人血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清），加入0.8ml灭菌生理盐水混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml和0.25%氯化钙0.25ml，混匀，放入36水浴中，酶2min观察一次（一般10min内科凝固），待血浆凝固后继续观察并记录溶化的时间，如2h内不溶化，移入孵箱观察24h的结果，如全部溶化为阳性；24h仍不溶解者为阴性。杆菌肽酶敏感试验：将被检菌浓菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取含菌0.04单位杆菌肽纸片在平板表面上。同时以已知阳性