生活饮用水国家标准微 虫ppt课件.ppt

生活饮用水卫生标准微生物学指标及检验方法修订 浙江省疾病预防控制中心微生物检验所 水是人体的重要组成成分由于水是良好的溶剂且具有较高的比热 因此是人体维持正常生理活动的必要因素充足的符合卫生要求的饮用水也是保持生活环境卫生及良好的个人卫生的必要条件水中所含的各种有益和有害的物质带入体内 对人体健康产生重要影响 我国饮用水中微生物污染 饮用水微生物污染是我国最大的健康危害问题之一 特别是在贫困地区 介水传染病仍是危害健康的重要疾病 饮用水微生物污染是我国供水工作中的首要卫生问题 经饮用水传播的传染病主要包括伤寒和副伤寒 细菌性痢疾 霍乱 传染性肝炎 贾第尔原虫病 隐孢子虫病等 特点 1 经粪 口途径传播 2 饮用水被致病微生物污染后常引起该病爆发 3 病原体在外界环境中有较强的抵抗力 在水中可生存一段时间 研究证明 在煮沸过的水中 宋内氏菌可存活2 3个月 福氏菌存活1 2个月 志贺氏菌只存活1 2周 原虫在外界环境中可存活更长时间 77 84天 10 温度升高可使其失活 对常规氯消毒有较强的抵抗力 4 加强饮用水净化和消毒可有效控制此类传染病经水传播流行 饮用水中微生物污染 水中病源微生物 种类多数量少生物学性状多样性检验鉴定方法复杂为评价水卫生状况 需借助指示微生物判断样品污染程度 间接指示致病微生物有无存在的可能 现行饮用水水质标准 我国现行饮用水水质标准是1985年颁布实施的GB5749 85 标准检验法为GB5750 85 该标准与国外的饮用水标准相比 主要差别在于微生物学指标项目少 缺少有机物和消毒副产物指标 微生物学指标只有菌落总数和总大肠菌群两项 不能确切的评价水质卫生状况 修订前后的比较 修订前 微生物学指标为 细菌总数 总大肠菌群修订后 微生物学指标为 菌落总数 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌 贾第鞭毛虫和隐孢子虫同时在资料性附录中增加肠球菌指标 修订内容 1 菌落总数GB5750 85本项指标为 细菌总数 本标准中改为 菌落总数 培养时间由24h改为48h 2 总大肠菌群GB5750 85本项指标为 3个 L 修订为每100mL水样中不得检出 检测方法 1 调整多管发酵法的检测方法 2 增加总大肠菌群酶底物检测方法 3 增加耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌指标及检测方法4 增加贾第鞭毛虫和隐孢子虫指标和检测方法5 在资料性附录中增加肠球菌指标 在资料性附录中增加肠球菌指 GB5749 20062006对微生物指标的要求 水质常规检验项目及限值1 菌落总数 CFU mL 1002 总大肠菌群 MPN 100mL或CFU 100mL 不得检出3 耐热大肠菌群 MPN 100mL或CFU 100mL 不得检出4 大肠埃希氏菌 MPN 100mL或CFU 100mL 不得检出水质非常规检验项目及限值1 贾第鞭毛虫 个 10L 12 隐孢子虫 个 10L 1农村小型集中式供水和分散式供水水质要求菌落总数 CFU mL 500资料性附录肠球菌 CFU 100mL 0产气荚膜梭菌 CFU 100mL 0 一 菌落总数 GB5750 85本项指标为 细菌总数 本标准中改为 菌落总数 培养时间由24h改为48h 水样中的细菌在经过本检验方法检验时 可以以单个细菌 成对 成串或成团的形式形成菌落 在计数时是以菌落的形式进行报告的 所以将 细菌总数 改为 菌落总数 更为合适 水样中的细菌包括很多属和很多种 其生长周期不完全相同 生活饮用水中的细菌由于消毒剂的影响在培养时也需要一定的恢复时间 所以将培养时间由24h改为48h 二 总大肠菌群 GB5750 8585本项指标为 3个 L 修订为每100mL水样中不得检出 检测方法 1多管发酵法2滤膜法3酶底物法 1调整多管发酵法检测步骤 调整GB5750 85的总大肠菌群多管发酵法 使之与 生活饮用水卫生规范 2001 相符合 1 多管发酵法 定义 总大肠菌群指一群在37 培养24h能发酵乳糖 产酸产气 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌 培养基 1 乳糖蛋白胨培养液2 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液3 伊红美蓝培养基设备 显微镜 15管法检测步骤 初发酵 3 5支管 24h显色培养 染色镜检 阳性管接种 24h复发酵 阳性接种 24h 2 滤膜法 定义 是指用孔径为0 45uM的微孔滤膜过滤水样 将滤膜贴在选择性品红亚硫酸钠培养基上37 培养24h 能形成紫红或红色有金属光泽的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌 培养基1 品红亚硫酸钠培养基2 乳糖蛋白胨培养液设备 显微镜 过滤设备 检测步骤 过滤水样 过滤设备显色培养 染色镜检 24h复发酵 阳性接种 24 2 增加总大肠菌群酶底物检测方法酶底物法采用大肠菌群能产生 半乳糖苷酶 D galactosidase 分解ONPG即邻硝基酚 B D半乳糖苷 Ortho nitrophenyl D galactopyranoside 使培养液呈黄色 来判断水样中是否含有大肠菌群 大肠埃希氏菌产生 葡萄糖醛酸酶 glucuronidase 分解MUG即四甲基伞形酮 B D 葡萄糖苷 4 methyl umbelliferyl D glucuronide 使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理 来判断水样中是否含有大肠埃希氏菌 检测步骤 加样 干粉培养基加入到100mL水样中压膜 专用压膜机分装培养 361 培养24h结果判读 24h培养后颜色变成黄色判断为阳性反应 培养24h后判读 为可疑阳性 可延长培养到28h判读 超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果 酶底物法的主要特点 1 主要优点 可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测时间较短 只需18h 24h 最长需要28h操作方便 对试验条件和人员要求低无需确认试验2 主要缺点 检测成本较高 酶底物法作为一种比较成熟的方法 已为许多组织 国家和地区推荐使用 世界卫生组织 美国EPA等推荐酶底物法与膜过滤法和多管发酵法一样作为一种水质卫生学评价的标准检测方法 3 总大肠菌群酶底物法验证试验2005年1月 2005年8月 由中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所组织北京市疾病预防控制中心 黑龙江省疾病预防控制中心和河北省疾病预防控制中心进行了大肠菌群酶底物法与多管发酵法 滤膜法的比对实验 以及大肠埃希氏菌检测方法的比较 1 适用性试验 2 加标试验 对大肠埃希氏菌32件加标水样进行大肠菌群酶底物法与多管发酵法比对实验 试验结果表明多管发酵法与酶底物法检测结果没有统计学意义上的差别 3 水样检测 验证试验结论 实验结果表明 酶底物法与多管发酵法和膜过滤法一样适用于饮用水及地表水中大肠菌群检测 三 增加耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌指标及检测方法 总大肠菌群 耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌比较 1 耐热大肠菌群 在 生活饮用水卫生规范 2001 中称为粪大肠菌群 其定义为 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开 在44 5 仍能生长的大肠菌群 世界卫生组织早在 饮用水安全指南 第二版中就建议将粪大肠菌群改为耐热大肠菌群 本次修订将粪大肠菌群改为耐热大肠菌群 限值 每100mL水样中不得检出 2 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌是作为粪便污染最合适的指示菌 WHO 饮用水安全指南 第三版 耐热大肠菌群主要由大肠埃希氏菌组成现有的方法可方便快速的检测大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌定义 大肠菌群检测试验为阳性 能产生 葡萄糖醛酸酶分解MUG 菌落能够在366nm紫外光下产生蓝色荧光的细菌 限值 每100mL水样中不得检出 大肠埃希氏菌检测步骤 3 大肠埃希氏菌验证试验 1 加标试验 大肠埃希氏菌加标水样比对试验结果 2 水样检测 大肠埃希氏菌水样比对试验结果 验证试验结论 实验结果表明 酶底物法与多管发酵法和膜过滤法一样适用于饮用水及地表水中大肠埃希氏菌检测 四 贾第鞭毛虫和隐孢子虫指标和检测方法 贾第鞭毛虫和隐孢子虫是一类寄生于人和动物体内的肠道原虫 可致人兽共患病 患此病的人和动物从粪便中排出大量卵囊污染环境 在地面水和防护差的地下水及处理不良的自来水中都可检出卵囊 随着社会发展 优质供水势在必行 对一些潜在的危险因素加以限制很有必要 在此基础上 本标准中增加贾第鞭毛虫和隐孢子虫指标和检测方法 Giardia贾第鞭毛虫 特点 单一细胞原生动物 大小约10 15 m 含4对鞭毛和双核 人 动物共染 寄生人体内为Giardialamblia 传染源 被孢囊污染的水和食物 往往一人带孢囊全家感染 传播 贾第鞭毛虫流行遍布全世界 以热带和亚热带为最多 也是我国人体常见的寄生原虫 贾第鞭毛虫的感染和危害 贾第鞭毛虫病是最常见的肠道原虫感染 在不同温度和纬度地区均能发现该病发达国家感染率为 发展中国家感染率可高达 急慢性腹泄 肠吸收紊乱 胃绞痛 恶心及延缓儿童的生长发育 下列人群易发生严重感染 有较严重的危害 岁以内婴儿 免疫功能受损害者 如爱滋病患者 旅游者旅游者中发病率较高 故有称 旅游者腹泄 传播途径 饮用水在对人致病的肠道原虫的传播上起了重要作用 食物 接触传播 在公共场所及在家里的接触和性接触 娱乐用水 TotkovaA对学校室内游泳池水及设备进行寄生虫学检查 在游泳池中发现贾第鞭毛虫及蠕虫 英国GraySF进行病例对照调查研究贾第鞭毛虫病病因 发现游泳是引起贾第鞭毛虫病的危险因素 旅游特别是在发展中国家旅游也被认为是有意义的危险因素 动物宿主 贾第虫在自然界广泛存在 包括两栖动物 鸟类 哺乳动物在内的40 多种动物均可成为贾第虫的宿主 调查研究表明 人排出的包囊可使狗 海狸 麝鼠 沙土鼠及大鼠等动物感染 因为一些习惯于生活在水中的动物可被来源于人的贾第鞭毛虫包囊感染 因此这些动物即使不是主要宿主也可作为贾第鞭毛虫病的传播媒介 对消毒的抵抗力 应考虑pH 浑浊度 温度等诸多因素 并保持足够的消毒剂浓度及接触时间 对臭氧较敏感 从人和动物中分离的贾第鞭毛虫中发现了细菌 病毒样颗粒和支原体样的生物 提示这些明显的共生生物可经贾第鞭毛虫包囊传播 此外 在贾第鞭毛虫中发现一种双股RNA病毒 兰氏贾第鞭毛虫对此病毒易感 这些有关生物对贾第鞭毛虫的毒性及致病性有何影响尚不清楚 Cryptosporidium隐孢子虫 特点 单一细胞原生动物 约3 7 m 有微小隐孢子虫 鼠隐孢子虫和贝氏隐孢子虫三种 主要寄生于人 牛等体内者为微小隐孢子虫 C parvum 感染 主要寄生在被感染的动物体肠道内 易感人群 免疫缺陷者 如爱滋患者 儿童 老人 医务人员等传播方式 以粪 口 手 口途径为主 污染的水源和空气均可传播 Cryptosporidium隐孢子虫感染后的症状 水样腹泻脱水胃绞痛恶心发热呕吐 两虫感染特点 无特殊临床症状无疫苗 抗生素治疗几乎无效水源性感染是最常见的 因为孢子和卵囊对传统的氯消毒有抗性 检测背景 美国分别于1996和2002年将贾第鞭毛虫和隐孢子虫列入国家必报传染病名单 WHO 饮用水水质准则 第三版 欧盟 饮用水水质指令 98 83 EC美国环保暑 国家饮用水水质标准 2006英国水质准则 1999 其他 检测方法 采样 淘洗 浓缩分离染色镜检 采样 原水20L处理水100L 过滤Envirochek方法Filta