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兽用注射用青霉素钾钠快速鉴别法饲料中地克珠利测定征求意见稿pdfPDF ICS备案号DB34安徽省地方标准DB34/T xxx-2019饲料中地克珠利的测定高效液相色谱法Determination ofDiclazuril infeed Highperformance liquidchromatography method(征求意见稿)2019-XX-XX发布2019-XX-XX实施安徽省质量技术监督局发布DB34/TXXX2019II前言本标准按照GB/T1.1-xx给出的规则起草。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位安徽省兽药饲料监察所。 本标准起草人吴蕾等。 DB34/T XXX20191饲料中地克珠利含量测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中地克珠利含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中地克珠利含量测定。 本标准定量限为0.5mg/kg。 2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3原理试样加入适量乙腈提取，正己烷除脂净化，以甲醇-0.3%醋酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，波长280nm。 用高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)测定，外标法定量。 4试剂和材料4.1除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682中一级用水的规定。 4.2乙腈分析纯。 4.3醋酸分析纯。 4.4正己烷分析纯。 4.5甲醇色谱纯。 4.6N、N-二甲基甲酰胺分析纯。 4.7流动相0.3%醋酸水溶液-甲醇。 4.8地克珠利标准品纯度99.0。 4.9地克珠利标准溶液的制备4.9.1地克珠利标准溶液贮备液精确称取20mg地克珠利标准品(精确至0.01mg)于50mL容量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解，此溶液浓度为400g/mL，4保存，有效期3个月。 4.9.2地克珠利标准工作溶液分别吸取贮备液（4.9.1）1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于200mL容量瓶中，用乙腈定容，标准工作溶液系列浓度分别为2g/mL、4g/mL、10g/mL、20g/mL、40g/mL。 5仪器和设备5.1高效液相色谱仪(配二极管阵列检测器)。 5.2分析天平感量0.1mg、0.01mg。 5.3离心机3000r/min。 5.4超纯水仪。 5.5分析筛孔径0.42mm。 5.6粉碎机。 5.7微孔滤膜孔径0.45m尼龙滤膜。 5.8涡动仪。 DB34/TXXX201925.9水平摇床。 5.10旋转蒸发仪。 5.11鸡心瓶。 5.12移液器200ul、1000ul。 5.13一次性注射器1ml。 6试样的制备按GB/T14699.1规定采样，选取饲料样品500以上，四分法缩减至100，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7分析步骤7.1提取7.1.1称取试样2.0g，精确至0.01g，置于50mL离心管中，加入15ml乙腈，涡旋混合1min，300r/min振荡提取10min，10000r/min离心10min，转移上清液至另一离心管中，残渣用15ml乙腈重复提取一次，合并两次上清液至鸡心瓶中，50减压蒸发至干，残渣加入2ml乙腈、2ml正己烷，涡旋混合1min。 7.1.2将试样提取液（7.1.1）转移至离心管，10000r/min，离心5min，取下层液用0.45m尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。 7.2测定7.2.1高效液相色谱条件色谱柱C18型柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5m，或相当性能C18柱。 检测波长280nm。 流动相0.3%醋酸溶液+甲醇，梯度洗脱条件见表1。 流速1.0mL/min。 柱温25。 进样体积10L。 表1流动相梯度洗脱条件时间min0.3%醋酸溶液%甲醇%0307022307022.1010028010028.130703530707.2.2上机测定地克珠利标准工作溶液和试液（上机液）分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。 7.3结果的计算与表述7.3.1计算公式结果按式 (1)计算DB34/T XXX20193CV X=mf (1)式中X-试样中地克珠利含量，单位为毫克/每千克（mg/kg）；C-试液色谱峰对应的地克珠利浓度，单位为微克/每毫升（g/mL）；m-试样质量，单位为克（g）；V-定容体积，单位为毫升（mL）f-稀释倍数。 7.3.2结果表示平行测定结果用算术平均值表示，计算结果保留3位有效数字。 8精密度同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。 DB34/TXXX20194附录A（资料性附录）地克珠利标准图谱0.05.010.015.020.025.030.035.0-20.