大肠埃希菌的检测.doc

幻灯片1大肠埃希菌的检测Error! Reference source not found.幻灯片7甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基l 胨10.0g 硫酸锰0.5mgl 硫酸锌0.5mg 硫酸镁0.1gl 氯化钠5.0g 氯化钙50.0mgl 磷酸二氢钾0.9g 磷酸氢二钠6.2gl 亚硫酸钠40.0mg 去氧胆酸钠1.0gl MUG75mg 水1000mLl 除MUG外，取上述成分，混合。微温溶解，调节PH7.2-7.4，加入MUG，溶解，每管分装5mL，灭菌。幻灯片8实验步骤：l 取供试供试液1mL，直接或处理后接种在制好的100mL胆盐乳糖培养基中,在37恒温箱中培养1824 h，进行增菌培养。l 取上述培养物0.2mL,接种至含5mL MUG培养基的试管内培养，于5小时，24小时在366nm紫外灯光下观察，同时用未接种的MUG培养基做本底对照。l 若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性，不呈现荧光，则为MUG阴性。幻灯片9l 观察后，沿着培养管的管壁加入数滴靛基质试液，叶面呈玫瑰红色，为靛基质阳性，呈试剂本色，为靛基质阴性。l 本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。l 靛基质实验原理l 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。l幻灯片10伊红美蓝培养基（EMB培养基）l 蛋白胨水琼脂培养基100ml，20%乳糖溶液2ml，2%伊红水溶液2ml，0.5%美蓝水溶液1ml，将已灭菌的蛋白胨水琼脂培养基（pH7.6）加热溶化，冷却至60左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115灭菌20min。幻灯片11结果分析：l 1.MUG、靛基质结果判断l MUG培养结果：在366nm紫外线下观察l 靛基质结果：液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试液本色，为靛基质阴性l MUG阳性、靛基质阳性，判检出大肠杆菌； l MUG阴性、靛基质阴性，判未检出大肠杆菌；l MUG阳性、靛基质阴性或MUG阴性、靛基质阳性，需进一步做以下检查l幻灯片12l 2。EMB培养结果判断l EMB培养18-24h后，检查有无疑似大肠埃希菌菌落（大肠埃希菌落形态特征见表），若无，判供试品未检出大肠埃希菌；若有，进一步做以下试验大肠埃希菌落形态特征l培养基菌落形态EMB呈紫黑色、浅紫色、篮紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，微突起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。幻灯片13l 检验依据： 2010年版中国药典二部附录J 微生物限度检查法检验标准规定：口服制剂细菌数1g不得超过1000个；1ml不得超过100个。霉菌及酵母菌数1g不得超过100个。控制菌1g（1ml）不得检出大肠埃希菌。幻灯片14注意事项l 1实训过程要严格无菌操作。l 2供试液稀释及注入培养皿时应摇匀再取，供试液从制备至加入培养基不得超过1h.l 3配制MUG培养基时，务必调pH，否则pH偏高，MUG分解，本身则显荧光。l 4.培养时间：供试品培养液接种于MUG培