雷公藤化学成分研究.d.doc

雷公藤化学成分研究严振1，田洋2 ，马跃平3，傅晓春1，张振学2，王金辉3（1广东食品药品职业学院，广东，广州510520；2沈阳化工学院化学工程学院，辽宁，沈阳 110142 ；3沈阳药科大学中药学院，辽宁，沈阳110016 ） 摘要目的：研究雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f .）根的化学成分。方法：利用各种色谱方法进行分离纯化，根据理化性质和谱学数据对分离得到的化合物进行结构研究。结果：从雷公藤根乙醇提取物中分离得到6个化合物，分别鉴定为5-豆甾烷-3,6-二酮(5-stigmast-3,6-dione,1)，6-羟基-豆甾-4-烯-3-酮(6-hydroxystigmast-4-en-3-one,2)，邻苯二甲酸二丁酯(phthalic acid dibutyl ester,3)，秦皮素(fraxetin,4)， -谷甾醇（-sitosterol,5），胡萝卜苷（daucosterol,6）。结论：化合物1、3、4为首次从卫矛科植物中分离得到；化合物2为首次从本属植物中分离得到。关键词 雷公藤；化学成分；结构鉴定 雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）系卫矛科雷公藤属植物。广泛分布于浙江、江西、安徽、湖南、广东、福建、台湾等地。其性苦、寒，有大毒，具有杀虫、消炎、活血通络、解毒的功效。现代临床广泛用于多种免疫系统异常而致的疾病，获得了良好的疗效。大量药理及临床已证明其提取物和某些成 分具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤和男性抗生育作用1。通过对雷公藤根的化学成分的研究，得到6个化合物并分别鉴定，为其药用资源的开发利用提供有益参考。1 材料与仪器 Bruker ARX-300和Bruker AV-600型核磁共振波谱仪（TMS内标，瑞士Bruker公司）；N2000型日立高效液相色谱仪；制备型色谱柱为YWC C18反相柱（5m,10 mm250 mm）；MP-S3型显微熔点测定仪（温度计未校正，日本Yanaco公司）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia 公司），柱色谱和薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂有限公司）；所用试剂为色谱纯和分析纯。雷公藤（市售）经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为Tripterygium wilfordii Hook. f .的根。2 提取与分离方法取雷公藤根20 kg，用体积分数为90%乙醇煮沸提取，合并滤液，减压浓缩后得浸膏900 g，将浸膏加适量水稀释，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚层和氯仿层提取物（71.5 g）进行硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮系统（100：11：1）梯度洗脱。得到的流份（Fr.3763）经重结晶处理后得化合物5；流份（Fr.8896）经重结晶处理后得到化合物1；流份（Fr.143169）经重结晶处理后得到化合物2；流份（Fr.213256）经硅胶吸附柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱后，所得到的流份用高效液相色谱分离，最后得到化合物3；流份（Fr.506554）经石油醚-丙酮反复洗脱，Sephadex LH-20柱色谱得到化合物6；乙酸乙酯萃取物（27.7g）经硅胶吸附柱柱色谱，以三氯甲烷-甲醇系统（200：11：1）梯度洗脱，得到的流份（Fr.2735）经重结晶处理后得到化合物4。 3 结果与讨论31 化合物1无色针状结晶（甲醇），与10%硫酸乙醇试剂显紫色；与Libermann-Burchard反应阳性，示为甾体或三萜类化合物。1H-NMR（300MHz，CDCl3）谱中，高场区给出6个典型的甲基质子信号：0.69 (3H，s，H-18)， 0.96 (3H，s，H-19)，0.93 (3H，d，J= 6.2 Hz, H-21)，0.84 (3H，d，J = 6.6 Hz，H-26)， 0.81 (3H，d，J= 6.8 Hz，H-27)， 0.85 (3H, t，J= 7.0 Hz，H-29)；13C-NMR（75MHz, CDCl3）谱中，给出29个碳信号（数据如表1），提示该化合物有可能是29C甾类化合物；13C-NMR谱中 209.2、211.7二个碳信号提示该化合物中有2个酮羰基信号。其数据与文献2中谱学数据基本一致，故鉴定其为5-豆甾烷-3,6-二酮（5-stigmast-3,6-dione），为卫矛科植物中首次分离得到。32 化合物2无色针状结晶（石油醚-乙酸乙酯），mp208210；与10%硫酸乙醇试剂显紫色；与Libermann-Burchard反应阳性，示为甾体或三萜类化合物。1H-NMR（300MHz，CDCl3）谱中，高场区给出6个典型的甲基质子信号： 0.74 (3H，s，H-18)，1.37(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J =6.4HZ，H-21)，0.84 (3H，d，J=6.6HZ，H-26)，0.82 (3H，d，J =6.6HZ，H-27)，0.85 (3H，t，J=7.0 HZ，H-29)；另外给出一个烯烃质子信号 5.82（1H，s）及一个与连氧碳相连碳的质子信号 4.35(1H，d，J =3 Hz)。13C-NMR（75MHz，CDCl3）谱中，给出29个碳信号（数据如表1），因此进一步推断该化合物为豆甾类化合物， 200.4、168.44、126.35示结构中具有不饱和碳信号； 73.30为6位连氧碳信号；此外低场区无其他碳信号，其数据与文献3中谱学数据基本一致，故鉴定其为6-羟基-豆甾-4-烯-3-酮（6 -hydroxystigmast-4-en-3-one），为本属植物中首次分离得到。Table 1 13C-NMR Chemical Shifts of Compounds 1 、2 No.Compound 1(CDCl3)Compound 2(CDCl3)No.Compound 1(CDCl3 )Compound 2(CDCl3)138.037.01628.029.0239.334.21756.556.03209.2200.51812.512.0436.9126.31911.919.8557.5168.42036.036.16211.3773.32118.618.7746.638.52233.733.8837.329.72326.126.0953.453.52445.745.71041.238.12529.029.71121.620.92619.819.81238.039.52719.019.01342.942.42823.023.11455.955.82912.012.01524.024.133 化合物3棕红色油状物（甲醇），ESI-MSM+H+ 279.1。1H-NMR（300MHz，CDCl3）谱中， 7.72（1H，m，H-4），7.54（1H，m，H-3），4.32（2H，m，H-5），1.70（2H，m，H-6），0.97（3H，m，H-7）；13C-NMR(75MHz， CDCl3)谱中，共给出8个碳信号， 167.6 (C-1)， 132.4 (C-2)， 130. 8 (C-3)，128.8 (C-4)， 65.5 (C-5)， 30.5 (C-6)，19.1 (C-7)，13.7 (C-8)；其数据与文献4中谱学数据基本一致，故鉴定其为邻苯二甲酸二丁酯（phthalic acid dibutyl ester），为卫矛科植物中首次分离得到。34 化合物4 黄色针状结晶（甲醇），与三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，示有酚羟基存在。1H-NMR（300MHz，Pyr-d5）谱中， ：7.67(1H，dd，J=9.32Hz，H-4)，6.29(1H，dd，J=9.32Hz，H-3)，6.68(1H，s，H-5)、3.78（3H，s，OCH3）；13C-NMR(75MHz，Pyr-d5)谱中， ：161.6(C-2)，146.6 (C-6)，145.0 (C-4)，141.6 (C-9)，140.8 (C-7)，135.9 (C-8)，112.2 (C-3)，110.9 (C-10)，100.49(C-5)，与文献5报道的秦皮素基本一致，故鉴定其为秦皮素(fraxetin) ，为卫矛科植物中首次分离得到。 35 化合物5白色针晶（石油醚），mp136137，与10%硫酸乙醇试剂显紫色；与Libermann-Burchard反应阳性，与已知标准品-谷甾醇共薄层，用三种不同溶剂系统展开，Rf值均一致，与-谷甾醇混合后的熔点不下降，故鉴定其为-谷甾醇(-sitosterol)。36 化合物6白色颗粒状结晶（甲醇-三氯甲烷），mp294296，Libermann-Burchard反应阳性，10%硫酸乙醇显紫色。与已知标准品胡萝卜苷共薄层，用三种不同的溶剂系统展开，Rf值均一致，与胡萝卜苷混合后的熔点不下降，故鉴定其为胡萝卜苷(daucosterol)。参考文献1 李卫东，王承华雷公藤根的化学成分研究 J .沈阳药科大学学报，2010,09(27):715-183.2 Chun-Chao Zhao,J ian-Hua Shao,Xian Li etal.Antimicrobial Constituents from Fruits of Ailanthus altissima Swingle.Arch Pharm Res 2005,28(10):1147-1151.3Xiao-Bai Sum,Pei-Hua Zang , Yang-Jun X u .Chemistry of Natural Compounds. 2007,43(5): 563-566.4 张蕴晖.邻苯二甲酸二丁酷研究进展J ，卫生研究，2003, 32(4):407-408.5 许旭东，胡晓茹，袁经权，等.草珊瑚中香豆素化学成分研究J .中国中药杂志，2006, 8（33）: 900-902.Studies on the Chemical Constituents of Tripterygium wilfordii Yan Zhen1, Tian Yang2，3, Ma Yueping3, Fu Xiaochun1, Zhang Zhenxue2, Wang J inhui3（1.Guang Dong Food and Drug Vocational College , Guangzhou 510520 , China ; 2. School of Chemical Engineering , Shenyang University Of Chemical Technology , Shenyang Liaoning 110142 , China ; 3. School Of Triditional Chinese Materica Medica , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang Liaoning 110016 , China） Abstract Objective：To study the chemical constituents of the Tripterygium wilfordii HOOK.f. . Methods：The constituents were isolated by chromatography methods such as silica gel , SephadexLH-20 and HPLC . Physico-chemical properties and spectroscopic analysis were employed for the structural identification. Results：Seven compounds were obtained and their structure were identified as 5-stigmast-3, 6-dione (1) , 6 -hydroxystigmast-4-en-3-one（2）, phthalic acid dibutyl ester（3）, fraxetin （4）, -sitosterol（5）, daucoste