（原）微生物涂抹法菌落总数检测作业指导.doc

微生物涂抹法菌落总数检测作业指导范围：适用于设备、成品面包装容器、塑料薄膜等的微生物检测、菌落总数的测定。1 实验试剂及器材1.1 实验试剂1.1.1 灭菌生理盐水 称取25.5g NaCl溶于3000mL蒸馏水，经121灭菌15min后，PH值应为7.00.1。1.1.2 营养琼脂培养基（平板计数琼脂）：按GB 4789.28中4.7规定1.1.3 75乙醇1.2 实验仪器1.2.1 培养箱：3611.2.2 冰箱：041.2.3 恒温水浴：4611.2.4 天平1.2.5 移液管：1mL，5mL，10mL；吸耳球1.2.6 广口瓶或三角瓶1.2.7 培养皿1.2.8 灭菌镊子1.2.9 称量纸1.2.10 硫酸纸、牛皮纸、线1.2.11 灭菌棉球1.2.12 放大镜2 实验步骤2.1 样品采集以无菌镊子取沾有少量灭菌生理盐水的无菌棉球，以无菌操作方式于无菌操作台内反复擦拭包装膜内表面，接触面积视卫生状况约100200cm2，然后将擦拭后的棉球迅速装入盛有99mL（9mL）灭菌生理盐水的瓶中，摇匀待用。2.2 检样稀释及培养2.2.1 以无菌操作，用1mL灭菌吸管吸取1:100(1:10)稀释液1mL，沿管壁注入9mL灭菌生理盐水的试管内，（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1:1000的稀释液。2.2.2 另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支1mL灭菌吸管。2.2.3 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。2.2.4 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基（可放置于461水浴或培养箱保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。2.2.5 待琼脂凝后，翻转平板，置361温箱内培养482h。2.3 菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板菌落总数。2.4 菌落计数报告2.4.1 样品检测结果表示以“个/m2”报告。2.4.2 平板菌落数的选择 一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若仅有一条链可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。2.4.3 菌落数的报告菌落总数的100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。3 微生物涂抹法菌落总数检测流程图样品采集（