血红素中铁离子含量两种测定方法的评价.doc

血红素中铁离子含量两种测定方法的评价StraitPharmaceutica1Journa1Vo117No.420053.1细菌内毒素的分子结构是脂多糖,由于它对温度的稳定性,可以在较低温度下,仍保持其生物活性(见表1)但必须在较高温度(250C)才能破坏其生物活性.由此可见,在制药工业中,用加热法除热原过程中温度的控制是非常重要的.3.2通过分级温度烘烤和家兔致热实验及鲎试剂试验法结果证明细菌内毒素脂多糖分子发生降解,经100C和180C降解产物仍具活性,但经1801h降解产物活性明显减弱,在250C经30min烘烤后降解产物全部失去活性.参考文献C13夏振明,刘瑞华.高致热活性细菌内毒索(脂多糖)的制备与初步分析J.福建医药杂志,1980,(2):29.C2国家药典委员会编.中华人民共和国药典CS.2000年版,北京:化学工业出版社,2000.二部:附录85.血红素中铁离子含量两种测定方法的评价林媛,袁曦(福建医科大学附属第一医院药剂科福州350005)摘要:目的评价分光光度法和硝化络合分光光度法测定血红素中铁离子含量.方法将血红素溶于氢氧化钠液,在(3852)rim波长处测定吸收度;将血红素用硝酸硝化后,游离出铁离子,与邻菲罗啉络合成橙红色络舍物,在(5l02rim)波长处测定吸收度结果用配对资料t检验进行含量测定结果数据处理,结果表明,血红素中铁离子含量的两种测定方法结果P%0.05.结论两种测定方法结果有显着性差异,因此,在测定血红素制荆时不宜采用硝化络舍分光光度法.关键词:血红素;铁离子;分光光度法;硝化络舍分光光度法中圈分类号:R927.4文献标识码:A文章编号:10063765(2005)04006303血红素作为抗贫血药已倍受人们重视,并已有不同制剂出现,本文探讨用两种方法测定血红素中铁离子含量,结果表明,用分光光度法测定含量,其操作简便,结果准确,可为各种血红素制剂中铁离子的含量测定提供科学依据.1仪器与试药1.1仪器TU一1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用);pHs一25型数量pH计(上海分析仪器厂);AB204一S电子天平(梅特勒一托利多);1012型电热鼓风干燥箱(上海第二五金厂).1.2试药血红素标准品(Sigma化学公司批号:H3505);氯化血红素标准品(Sigma化学公司批号:H225o);硫酸高铁铵FeNH(SO)Ho(上海试四赫维化工有限公司批号010101);浓硝酸(无锡市灵达化工试剂厂AR批号200007);1,1O一邻菲罗啉(上海三爱思试剂有限公司AR批号20020221);盐酸羟胺(广东西陇化工厂AR批号20020930);无水乙酸钠(上海文镱化学试剂有限公司AR批号20020401).2方法与结果作者简介:林嫒,女(1978.2-).毕业于中国药科大学.职称:药师.从事药学专业.联系电话:059l一832326332.1试剂的配制2.1.1铁标准贮备液的配制:精密称取硫酸高铁铵FeNH(SO)Ho0.4305g,置200ml烧杯中,加三蒸水150mI使溶解,再加入2.5mI的浓硫酸摇匀,移入500mI量瓶中,用三蒸水稀释定容,摇匀备用.2.1.2血红素标准液的配制:精密称取经105C干燥至恒重的血红素对照品20mg,以0.1mol?I氢氧化钠为溶剂,配成5.4g?mI的溶液.2.1.3铁标准供试液的配制:精密量取铁标准贮备液10.0mI于100mI量瓶中,用三蒸水稀释定容.摇匀备用.2.2测定波长的选择2.2.1精密称取经105C干燥至恒重的血红素对照品20rag,以0.1mol?L氢氧化钠液为溶剂,配成5.4tLg?mI的溶液,在3O0400nm波长之间扫描吸收光谱.结果表明,本品在(3852)nm波长处有最大吸收.2.2.2精密量取8.0mL的铁标准供试液,置于50mI量瓶中,精密加入1O%盐酸羟胺1.0mL,醋酸一醋酸钠缓冲液(pH4.6)5.0mL,0.1邻菲罗啉3.0mL,用三蒸水稀释定容.以不加铁标准液为空?63?海峡药学2005年第17卷第4期白,用分光光度计在400600nm波长之间扫描吸收光谱.结果表明,本品在(510i2)nm波长处有最大吸收.2.3标准曲线的制备2.3一精密称取经105干燥至恒重的血红素对照品18mg,置于100mI量瓶中,加0.1mol?I氢氧化钠液适量,使完全溶解后,稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取上述溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mI,置于100mI量瓶中,用0.1mol?L氢氧化钠稀释至刻度,摇匀,以溶剂为空白,用分光光度计在(3852)nm波长处测定吸收度.经线性回归,得回归方程:A一0.087C+0.028,r一0.9996(n一5).结果表明,本品在1.859.25g?mL-1范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系.2.3.2精密量取2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0,14.0mL的铁标准供试液,分别置于50mI量瓶中,精密加人10Z盐酸羟胺1.0mI醋酸一醋酸钠缓冲液(pH4.6)5.0mL,0.1邻菲罗啉3.0mI,用三蒸水稀释至刻度,摇匀,以不加铁标准供试液为空白,用分光光度计在(5102)nm波长处测定吸收度.经线性回归,得回归方程A=:=0.2285C+0.00187,r一0.9994(n一7).结果表明,本品在0.42.8g?mI-!范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系.2.4稳定性试验2.4.1放置时间对供试液的影响:分别将以上两种方法中的供试液于0,0.5,1.0,3.0,6.0,12h测定其吸收度,结果表明,吸光度均不变,提示两种方法中的供试品至少在12h内稳定.2.4.2温度对供试液的影响分别将以上两种方法中的供试液在2O32C之问测定吸收度,结果表明,吸光度均不变,提示两种方法中的供试品均对温度稳定.2.5回收率试验2.5.1精密称取经105干燥至恒重的血红素对照品80mg,置于50mL烧杯中,加0.Imol?L氢氧化钠液适量,使完全溶解后,移人100mI量瓶中,加0.1mol?L-1氢氧化钠稀释至刻度,摇匀,再精密吸取上述溶液5mL,置于100mL容量瓶中,用0.Imol?L-1氢氧化钠稀释至刻度,摇匀,以溶剂为空白,用分光光度计在(3852)nm波长处测定吸收度.结果代人回归方程计算,结果(见表1)2.5.2精密称取硫酸高铁铵约0.43g,共5份,分别?64置150mI烧杯中,加三蒸水使溶,再加人2.5mI的浓硫酸摇匀,移人500mI量瓶中,用三蒸水稀释至刻度,摇匀.精密吸取稀释液10mI,置于100mI容量瓶中,用三蒸水稀释至刻度,摇匀.再精密吸取上述溶液10mI,置于50mI容量瓶中,精密加人1O盐酸羟胺1.0mL,醋酸一醋酸钠缓冲液(pH4.6)5.0mI,0.1邻菲罗啉3.0mI,用三蒸水稀释至刻度,摇匀.以不加铁标准液为空白,用分光光度计在(5102)nm波长处测定吸收度.结果代人回归方程计算,结果(见表1).表l不同测定方法回收率试验结果比较(n一5)编号(分光光度法硝化络合分光光度法79.38O.978.679.979.3O.43l9O.43l20.4381O.4262O.426l98.8899.2699.6299.Ol99.3798.6798.3898.8597.8999.052.6样品的含量测定2.6.1精密称取经105干燥至恒重的氯化血红素对照品约18mg,共5份,分别置于50mI烧杯中,加0.Itool?I-1氢氧化钠液适量,使之完全溶解后,移人100mI量瓶中,加0.1mol?I氢氧化钠液稀释至刻度,摇匀,再精密吸取上述溶液2.5mI.置于100mL量瓶中,用0.Itool?L-1氢氧化钠液稀释至刻度,摇匀,以溶剂为空白,用分光光度计在(3852)nm波长处测定吸收度,并计算标示量百分含量,结果(见表2).2.6.2精密称取氯化血红素对照品约50mg,共5份,分别置50mI烧杯中,缓慢加人10mI浓硝酸,使之硝化,将溶液挥发至约5mI,此时溶液呈淡黄色,冷却,滴加约2O滴的浓盐酸,用12mol?I-1氢氧化钠液调节pH值至1.5,分别移人50mI量瓶中,用三蒸水涤荡烧杯数次,合并涤荡液于量瓶中,再加三蒸水稀释至刻度,摇匀.精密吸取上述溶液1.0mI,置于50mL容量瓶中,精密加人1O盐酸羟胺1.0mI,醋酸一醋酸钠缓冲液(pH4.6)5.0mI,0.1%邻菲罗啉3.0mI,用三蒸水稀释至刻度,摇匀.以不加铁标准液为空白,用分光光度计在(5102)nm波长处测定吸收度.并计算标示量百分含量,结果(见73242259787835O.33433Ol8O94444488787.OOOOOStraitPharmaceuticalJournalVol17No.42005表2).裹2样品的含测定结果(n一5)z.s忿光度法含量95.8998.0898.0298.0897.5297.520.417O,鬟誓光光度96.2096.3095.5196.3495.8196.03o.312.6.3数据处理将以上两种方法的含量测定结果进行配对资料t检验,得出结果P<O.05,提示两种方法的含量测定结果有显着性差异.3讨论3.1两种方法测定血红素中铁离子含量,经统计分析(P<0.05),表明两种方法的含量测定结果有显着性差异,分光光度法较硝化络合分光光度法更加准确,可靠,对血红素类制剂的含量测定应采用分光光度法.3.2在两种测定方法操作中,我们发现硝化络合分光光度法首先有操作步骤多及操作误差大的情况发生;其次,如果硝化反应不完全,也会影响测定结果的准确性.参考文献1毕殿洲主编.药剂学(M3.第四版.北京:人民出版社.2000,3l1.23国家药典委员会编.中国药典2005版s.北京:化学工业出版社,二部,2005,附录l7.(33瞿彩莉主编.化学试剂标准大会l995版(s.北京:化学工业出版社,l995,480.4余琳,张凌.邻菲罗啉光度法测定5种中药中的微量铁J.江西中医学院.1994,6(2):42.高效液相色谱法测定金果饮中橙皮苷的含量徐坚,罗瑞雪(浙江省台州市药品检验所台州318000)摘要:目的建立高效液相色谱法测定全果饮中橙皮苷的含量.方法采用高效液相方法.色谱柱为AgilentzoxbaxCls(15cmx4.6ram?3.5m),流动相为乙腈一0.2%磷酸溶液(20:80),检测波长为284nm,流速为1.Oral?rain_.,进样体积5L,柱温:25.结果橙皮苷在o.35btg7.0g范围内呈良好的线性关系,回归方程为Yl689.6x+5.4482(r=O.9992)回收率为99o,结论本方法简单,快速,准确.能消除干扰,可用于测定全果饮中橙皮苷的含量.关键词:柽皮苷;高效液相;胆酸;止咳中圈分类号R927.4文献标识码:A文章编号:l0063765(2OO5)04006502金果饮为中药复方制剂,由地黄,玄参,麦冬,陈皮,蝉蜕,薄荷油,南沙参,胖大海等组成,卫生部药品标准中成药成方制剂第五册标准只有鉴别检查项,没有含量测定项,不能有效地控制药品的内在质量,为了健全药品标准,现采用HPIC法对其主要药味陈皮中的橙皮苷的含量为实验对象进行测定.1仪器与试药1.1仪器waterAlliance2695+2996+Empower工作站.1.2试药橙皮苷对照品(Hesperidin,批号O721200010供含量测定,中检所提供),金果饮由本所抽样所得(由杭州华东医药集团康润制药有限公司生产,批号030717.030808040109).作者简介;徐坚,男.1987年毕业于浙江医科大学药学系.职称:主管药师,从事药品检验联系电话:o5768552715乙腈为色谱纯,