2.1微生物的实验室培养.ppt

微生物包括五类 病毒细菌放线菌真菌原生动物 特点 结构都相当简单 个体多数十分微小 通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到 有的甚至没有细胞结构 且体内一般不含有叶绿素 不能进行光合作用 微生物包括细菌 病毒 霉菌 酵母菌等 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 一 微生物 是由一个核酸分子 DNA或RNA 与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体 病毒 virus SARS病毒 禽流感病毒 细菌的外形与大小 单细胞不分枝的原核微生物 细菌细胞微小而透明 通常用适当染料染色后显微镜观察 图1 1常见的三种细菌典型形态 葡萄球菌 大肠杆菌 霍乱弧菌 细菌 bacteria 放线菌 Actinomycete 结构 单细胞原核分支状的菌丝 基内菌丝 气生菌丝 链霉素 土霉素 四环素 氯霉素 红霉素 庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素 其中2 3是由放线菌产生的 应用 真菌 Fungus 是一种真核生物 通常又分为三类 即酵母菌 霉菌和蕈菌 大型真菌 是动物界中最低等的一类真核单细胞动物 个体由单个细胞组成 原生动物 protozoan 草履虫 大变形虫 想一想 在制作果酒 果醋 腐乳等时可用优良菌种直接接种 以提高产品的质量 那么 这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢 微生物的实验室培养条件 1 合适的营养和环境条件 2 确保其他微生物无法混入 研究和应用微生物的前提 防止杂菌入侵 获得纯净的培养物 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基 分析营养构成 一 培养基 思考 微生物 吃 什么 1 基本成分 碳源 氮源 水 无机盐 碳源 无机碳源 有机碳源 CO2 CO32 HCO3 牛肉膏 蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 氮源 无机氮源 有机氮源 NH4 NO3 牛肉膏 蛋白胨 酵母膏 尿素等 注 含CHON的有机物是异养型微生物的碳源 氮源 能源 一 培养基 微生物生存的环境和营养物质 1 基本成分 碳源 氮源 水 无机盐 2 特殊营养 维生素 碱基等 牛肉膏 酵母膏 蛋白胨中含有 3 pH 氧气的需求 4 种类 固体培养基 液体培养基 有无凝固剂琼脂 分离鉴定 工业生产 物理性质 固体培养基 菌落 单个或少数菌体 2 特征 大小 形状 光泽度 颜色 透明度等 3 功能 1 定义 三 菌落 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 液体培养基 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基 5 配制原则 目的明确 营养全面 浓度适宜 比例恰当 适宜的pH值 有机碳源 异养型 根据微生物的种类 培养目的选择原料 自养型 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱 真菌偏酸 CO2碳源 C 二 无菌技术 1 什么是无菌技术 无菌技术泛指在培养微生物的操作中 所有防止杂菌污染的方法 注意事项 对实验操作的空间 操作者的衣着和手 进行清洁和消毒 将用于微生物培养的器皿 接种用具和培养基等进行灭菌 为避免周围环境中微生物的污染 实验操作应在酒精灯火焰附近进行 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 思考 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外 还有什么目的 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染 耐高温需保持干燥的物品 160 170 1 2小时 接种环 接种针等金属用具 70 75 30min80 15min 100 5 6min 较为温和理化方法 杀死部分有害菌体 不包括芽孢 孢子 强烈的理化方法 杀死所有微生物 包括芽孢 孢子 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精 氯气 石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基 100KPa 121 15 30min 消毒与灭菌 芽孢的壁很厚 对干旱 低温 高温等恶劣的环境有很强的抵抗力 芽孢又小又轻 可以随风飘散 当环境适宜 如温度 水分适宜 的时候 芽孢又可以萌发 形成一个细菌 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 如果需要 请选择合适的方法 思考 判断下列各项是否需要消毒或灭菌 如需要 选择合适方法 1 豆浆 2 游泳池 3 超净工作台 4 玻棒 试管 吸管 锥形瓶 5 培养细菌用的培养皿 6 无菌水 7 牛肉膏蛋白胨培养基 8 接种环 接种针 9 实验操作者的双手 接种环 接种针 四 大肠杆菌的纯化培养 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1 计算 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2 称量 3 溶化 牛肉膏黏稠 用称量纸称取 牛肉膏 蛋白胨易吸潮 要快 加盖 牛肉膏 称量纸 少量水加热溶解 取纸 蛋白胨 NaCl 琼脂 补水定容 4 调pH 分装 封口 5 灭菌 6 倒平板 培养基 培养皿 分散成单个细胞 形成单个菌落 倒平板 约50 防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 二 大肠杆菌的纯化培养 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌 平板划线法 菌种 划3个平板 1个不划线 1 接种 接种环 防止划破培养基 重复实验 空白对照 问题讨论 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次残留的菌种 保证使下一次划线时 菌种直接来源于上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌落 及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 6支试管 分别加入9ml无菌水 101 102 103 104 105 106 稀释涂布平板法 a 梯度稀释菌液 菌液 微量移液器 稀释涂布平板法 a 梯度稀释菌液 b 涂布平板 不超过0 1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 平板划线法 稀释涂布平板法 2 培养 将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37 恒温箱中培养12h 24h后 观察并记