PCR难题详细解析.doc

PCR难题详细解析1.“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示，其中第种DNA分子有几个()图1图2A2 B4C6D8解析：选DPCR技术扩增时，由两种引物决定所扩增的片段的特定序列，上一次循环的产物为下一次循环的模板。第一次循环形成和，第二次循环形成四个DNA，以此类推4次循环后共形成16个DNA，其中各一个，各三个，共8个。方法：可画出前2次循环的产物的示意图，再找规律。2、为研究基因A与四膜虫的耐药性是否有关，科研人员提取耐药个体的DNA，用图2所示的引物组合，分别扩增A基因的A1片段、A3片段。据图分析，用引物、组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是下图中的_。将大量N基因片段与扩增得到的A1片段、 A3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是_。回收的PCR扩增产物通过基因工程方法转入耐药四膜虫细胞中，并用加入_的培养液筛选，获得A基因_的四膜虫，这种四膜虫在高浓度DDT处理下生长速率明显下降，表明A基因是耐药基因。2、答案d（解析：引物会成为子代DNA的一部分）A1-N-A3 (解析：引物可同时和A1片段、N基因片段结合双向扩增。引物III可同时和A3片段、N基因片段结合双向扩增。巴龙霉素 被敲除3(2016天津高考)人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。如图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成总cDNA，然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_(填写字母，单选)。A人血细胞启动子B水稻胚乳细胞启动子C大肠杆菌启动子 D农杆菌启动子3答案：(1)总RNA(或mRNA)(2)B解析：(1)要想合成总cDNA，需要采集人的血液获得总RNA。由于DNA的复制只能从脱氧核苷酸单链的5端向3端延伸，因而引物均应结合在DNA单链的3端，而DNA的两条链反向平行，由此可以确定引物在另一条脱氧核苷酸单链的位置和方向。(2)若要从水稻胚乳细胞内获得目的产物，需要控制该目的基因只在水稻胚乳细胞内表达。由题干中的信息“启动子通常具有物种及组织特异性”可知，此处需要选择水稻胚乳细胞启动子。4、请回答PCR技术方面的有关问题：利用 PCR 技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链 DNA 片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物 A 的 DNA 片段所占的比例为_。在第_轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA 片段。答案：三解析：依据图解特点，第四轮循环产物中可以得到16个DNA分子，其中有15个含引物A的单链，以及一个不含引物A的模板链。方法：可画出前2次循环的产物的示意图，再找规律。从图解原DNA与