《微生物》课程实习报告 102255005014.doc

动物科学学院课程实习报告报告题目 菌种的冷冻干燥保藏法 课程名称 水产微生物学 实习地点 动物科学学院水产病害实验室 实习时间 2012.12.2412.28 专业年级 水产养殖2010级 学生姓名 许剑峰 学 号 102255005014 指导老师 林旋 讲师 同组成员：吴超、张艺端、张行、许剑峰、钟春清、林晶、陈冬安一、实习目的和要求 1、目的 通过实习使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。通过实习，掌握培养基的配制、分装及灭菌方法；掌握微生物的接种技术；掌握微生物的冷冻干燥保藏方法。 2、要求 （1）注重微生物学基础实验技能的掌握与提高，克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向； （2）课程实习前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤； （3）在实验中要有严紧的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象； （4）树立密切合作的风气，包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密切配合。二、实习内容 1、培养基的配制和灭菌。 2、微生物（金葡菌）的接种。 3、菌种的（金葡菌）的冷冻干燥保藏方法。 4、日程安排： 第一天 实习课程的讲授；实习工具、仪器和设备的准备（包括培养基的配制、倒平板、金葡菌的活化、保护剂的配制）。 第二天 金葡菌由固体培养基转接至液体培养基；准备第三天的实验器具。 第三天 菌种冻干前的预处理。 第四天 菌种的冻干操作。 第五天 冻干机关机，菌种保藏。三、主要材料和仪器设备 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液枪、培养皿、玻璃棒、烧杯、试管架、剪刀、酒精灯、硅胶塞、线绳、报纸、乳胶管、电炉、高压灭菌锅、干燥箱、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、金葡菌斜面培养物、接种环、冻干机、西林瓶、离心机、生化培养箱等。四、操作方法 1. 制备培养基 2. 配制保护剂：鲜牛奶3000r/min离心30min，弃去上层脂肪，加9倍体积生理盐水，分装，121(或116)高压灭菌20min后备用。保护剂的作用可能是在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分(细胞膜)的构型，防止细胞膜因为冻结而破坏。保护剂还可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。3. 包2根离心管、4根大枪头、2个西林瓶、1根8ml生理盐水、1根保护剂，121灭菌20min。4. 把菌种从平板培养物接种至平板培养基（菌种的活化）：（1）把接种环放在酒精灯上消毒，消毒时应使接种环完全烧红；（2）待接种环冷却后，用接种环从平板上沾取少许菌苔；（3）然后用接种环在平板培养基上画线；（4）把平板培养基拿去37培养24h5. 把菌种从平板培养物接种至液体培养基（液体接种法）：（1）用接种环从平板上沾取少许菌苔；（2）在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次；（3）将液体肉汤培养基150r/min摇床37培养24h。接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。 6. 把灭菌物品烘干备用 7. 拿出液体培养基：取出5ml菌液放入无菌离心管4000r/min离心20min，倾去上清液，再用5ml无菌生理盐水将菌泥重新悬浮，再次4000r/min离心20min，倾去上清液，用5ml灭菌保护剂将菌泥重新悬浮，之后就可以分装入西林瓶，每瓶1ml(液面高度35mm)。8. 预冻：分装好的菌种管放80预冻2h，同时开启冻干机的制冷机，也可在冻干机的冷阱中预冻菌种。 9. 冻干：当冻干机冷阱温度达到40时，将预冻好的西林瓶放进压盖干燥架中，把假盖板放在冷阱上，再将干燥架放在冷阱上方，罩上压盖有机玻璃罩，罩下端要与“O”型密封圈完全接触。顺时针拧紧真空阀，按“真空计”键，显示真空度为100110103，再按“真空泵”键，真空泵工作（真空泵的盖子要打开），15Pa以下为正常，冻干开始。 10. 压盖：24h后，视感物料已完全干燥，按顺时针方向转动有机玻璃罩上方手柄，使罩中压盖架丝杠转动下移，将瓶盖压入瓶中，实现在真空中压盖。 11. 关机：按逆时针方向打开真空阀充气，按“真空泵”键，真空泵停止运转。取下有机玻璃罩，拿出西林瓶保存。5、 注意事项1. 需灭菌的物品应严格灭菌，避免污染杂菌；2. 接种时应该要等接种环完全冷却后再接种；3. 冻干时，西林瓶的盖子一定要放好，即使西林瓶中的空气可以出来形成真空，又能在压盖的时候可以把盖子盖好。六、实习结果上图中盖子已经掉了的和西林瓶中还是液体的都是实验失败的，盖子即没掉瓶子中的菌种又是粉末状的为实验成功的。盖子掉了的：是因为抽气时，气流流动使瓶子掉下来。瓶子中还是液体的：是因为盖子盖的太紧，瓶中的空气抽不出来，水分也没抽出，导致瓶子中的菌种未变成粉末状。七、实习总结或体会通过这个实习，掌握了培养基的配制、分装及灭菌方法；掌握了微