免疫学实验报告1.docx

免疫学实验报告 姓名:买迪来木.坎代尔 学号:201020131222 班级:2010131实验一：多克隆抗体的制备和抗体效价的检测 一：实验原理有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好的抗体。质量好的抗体的标准：特异性强和效价高多克隆抗体的概念：在含有多种抗原决定簇的抗原刺激下，体内多个 B 细 胞克隆被激活并产生针对多种不同表位的单克隆抗体， 其混和物为多 克隆抗体。 机体内所产生多克隆免疫血清实质上是由多种抗体组成的 混合物，又称多克隆抗体。多克隆抗体产生的基本原理：初次反应的抗体持续时间较短，亲和力也较低，多无实际应用价值。 机体初次接触抗原后，激发体液免疫应答反应。在 Mø 和 Th 的作用下，B 细胞被激活,增生分化为浆细胞和记忆 B 细胞（Bm）。 浆细胞产生特异性抗体。由于初次反应时，只有少量对该抗原特异的 免疫活性细胞被诱导而增生分化为浆细胞。随着抗原的消耗，抑制 T 细胞（Tc）的激活和循环抗体的反馈抑制作用，浆细胞减少，抗体滴 度很快下降。 二次反应产生的抗体主要是高亲和力的 IgG。 机体再次受同一抗原刺激后，对该抗原特异性的 Bm 迅速增殖分化为 浆细胞，产生特异性抗体。Th 的记忆细胞也加快反应的进行，在抗原作用 12 天后，抗体滴度迅速上升。抗体合成率为初次反应的几 倍到几十倍。1.用于免疫的动物用于免疫的动物可以是哺乳类和禽类，可以是 羊、马 、兔 、鸡等，实验室常用兔、山羊和豚鼠。动物种类的选择标准：1.根据抗原的生物学特性和所需获得的抗血清数。 2.用于免疫的动物需适龄、健壮、无感染性疾病， 最好为雄性。 3.十分注意动物的饲养，消除动物个体差异及在免疫过程中死亡的影响。 4.如果用兔子，最好用纯种新西兰兔，一组三只，体重2-3kg为宜。2.免疫途径： 途径有很多种：静脉注射、腹腔内注射、肌肉内注射、皮内注射、皮下注射、淋巴结内注射等。 一般选择多点皮内或背部注射，每点注射0.1ml左右。3.佐剂： 由于不同个体对于同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性的物质，以刺激机体产生比较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。佐剂作用：刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。常用佐剂：福氏佐剂。4.制备方法流程：纯化的抗原与弗氏佐剂一起充分乳化注射动物体内 （剂量，次数，途经等均要适宜，每隔两周注射一次，注射三次） 测定效价 （如效价高， 则不必加强免疫） 1 周 后经动脉放血分离血清纯化抗血清备用。5.抗血清的采集与保存： 收集的血液应置于室温下一小时左右，凝固后，置于4摄氏度下，过夜析出血清，离心，10000rpm，10min。 在无菌条件下，析出血清，分装（0.05-0.2ml），贮于 -20摄氏度以下冰箱，或冻干后贮存于4摄氏度冰箱保存。二实验步骤1.器材：剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿（直径18cm）、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。2.试剂：生理盐水(或PBS)，弗氏完全佐剂（Freunds complete adjuvant, FCA） Sigma F-5881，弗氏不完全佐剂(Freunds incomplete adjuvant, FIA) Sigma F-5506，3.兔子的选择：兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。4.步骤：背部多点注射法：（1）在家兔脊柱两旁选几个点进行皮下注射制备好的抗原，每点注射0.1ml。 （2）间隔两周之后选择与上次不同的点注射 （3）再间隔两周两周，继续选择不同的点进行注射抗原。 (4)免疫一周之后，从兔子的耳动脉取血检测抗体效价，效价较高，则不用继续进行加强免疫，即可获得高效价的抗体。5.血清的分离：如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37烘箱2hr，转移到4沉淀过夜，第二