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文档简介

mt DNA的分离及纯化 按戴建华等报道的方法，就具体情况稍加改进，步骤如下（除特别说明，均在 4下完成）： 1.1 取新鲜肝组织，放在缓冲液A（0.25M 蔗糖，0.01M TrisHcl，0.001M Na2-EDTA，pH8.0）中漂洗23次，尽可能去除表面血污、结缔组织及脂肪组织后剪碎。按组织重缓冲液 A=1510加入缓冲液A，用玻璃匀浆器冰浴匀浆。 1.2 1000 gmin-1离心15min；取上清液；15000 gmin-1离心20min，弃上清，沉淀用缓冲液 B（0.25M 蔗糖，0.05M TrisHcl，0.007M Mg Cl2，p H7.5）洗涤，按 0.5m Lg-1肝的比例加入缓冲液 B 悬浮沉淀后加入DNase I 至终浓度为 100 gm L-1，30下作用30min。 1.3 冰浴冷却，加入2倍体积的DNase I反应终止液（0.25M蔗糖，0.1M Na2-EDTA，pH8.0）。15000gmin-1离心20min。沉淀用DNase I反应终止液洗涤一次，重复离心。1.4 按0.5 m Lg-1肝加入缓冲液C（0.1M Nacl，0.05M TrisHcl， 0.01M Na2-EDTA，p H8.5）悬浮沉淀，加入SDS至终浓度为1%1.5%，吸打混匀后 37保温 15min。 1.5 用等体积的苯酚，苯酚/氯仿（1:1），氯仿/异戊醇（24:1）各抽提一次。取水相，加 0.2 倍体积 1M Na Ac和2倍体积的预冷无水乙醇，混匀后放在 4冰箱中过夜。 1.6 15000gmin-1离心30min后去上清；沉淀用70%乙醇洗涤2次，干燥，TE（0.01M TrisHcl，0.001M Na2-EDTA，pH8.0）溶解。 1.7 加入预处理的
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