微生物实验报告.doc

金黄色葡萄球菌的分离,提纯和鉴定实验一 金黄色葡萄球菌的分离培养一实验目的；1 掌握Baird-Parker培养基的配制方法2 掌握利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌的检验方法二实验内容1原理；Baird-Parker培养基在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现明显的沉淀环。利用选择性培养基进行常见致病菌的分离是致病菌检测中的重要部分。2 仪器与试剂 250ml三角瓶 灭菌锅 量筒 牛奶 Baird-Parker氏培养基、亚碲酸盐卵黄增菌液、7.5%氯化钠肉汤3操作步骤3.1 培养基配制Baird-Parker琼脂培养板：称取58克干粉，加热溶解于950ml蒸馏水中,分装每瓶95ml，121高压灭菌15分钟,冷至50左右,于每95 ml加入常温解冻的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 ml，摇匀后倾入无菌平皿。 7.5%氯化钠肉汤（蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠75g蒸馏水1000mlph7.4）将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225 mL，121 高压灭菌15 min。3.2 增菌及分离培养3.2.1 样品处理：吸取25 mL样品（过期牛奶）至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。3.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36 1 培养18 h24 h。Baird-Parker平板36 1 培养18 h24 h或45 h48 h3.2.2 将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板，于36 1 培养 18 h24 h 。3.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2 mm3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。3.3 观察菌落形态 菌落特征:在Baird-Parker平板上:菌落灰色至黑色,边缘色淡,周围有一浑 浊带,该带外围有一透明圈。非典型者无浑浊带和透明圈。在血平板上:菌落金黄色,周围有透明的溶血圈。非典型者为白色。菌体形态：革兰氏染色阳性球菌,葡萄穗状排列,无芽胞,无荚膜。4、结果判定 根据菌落形态，鉴别检样中细菌种类三、实验结果 实验二 金黄色葡萄球菌的染色镜检一实验目的; 掌握细菌革兰氏染色方法；在显微镜下观察金黄色葡萄球菌的形态。二实验内容1原理;革兰氏阳性菌经结晶紫染色乙醇脱色后，仍为紫色，而革兰氏阴性菌被复染为其他颜色。2仪器与试剂；结晶紫染色液（结晶紫1g 95%乙醇20ml 1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。）革兰氏碘液(碘1g碘化钾2g 蒸馏水300ml先加少许水混匀在加蒸馏水至300ml)；沙黄复染液（沙黄0.25g 95%乙醇10ml蒸馏水90ml）（或番红复染液）3操作步骤;3.1挑取B-P平板上的金黄色葡萄球菌单菌落于5ml 5%氯化钠肉汤中37培养6-8h。3.2取金黄色葡萄球菌涂片在火焰上固定，并用大肠杆菌作阴性对照，滴加结晶紫染液染1min，水洗。3.3滴加革兰氏碘液