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宁夏大学研究生学位论文开题报告学位论文选题名称气相色谱-质谱联用对中宁红枣表面残留农药的检测研究学科专业、研究方向研究生学号研究生姓名指导教师姓名攻读学位级别论文起止年限申请开题日期一、选题依据及研究内容：1、 选题意义：红枣为鼠李科枣属植物的成熟果实枣，经晾、晒或烘烤干制而成果皮红至紫红色，又名大枣、干枣、美枣、华枣等，红枣果味美，营养丰富，是深受群众喜爱的营养保健品之一1。枣树起源于中国，在中国已有四千多年的种植历史，自古以来就被列为“五果”（桃、李、梅、杏、枣）之一，含有抑制癌细胞，甚至可使癌细胞向正常细胞转化的物质。现代科学研究证明，红枣不仅具有丰富的营养价值，同时还具有良好的药理作用2，主要表现在抗过敏；降压；保肝护肝；增强体力；镇静、催眠；降低胆固醇；预防亚硝酸盐类的物质引起的肿瘤等方面。还可以抑制癌细胞的增值。因此发展红枣产业有着潜在的实用价值。在我国各项优惠政策的支持和鼓励下，红枣产业发展势头强劲，栽培面积逐年扩大，产量逐年提高，呈现出良好的发展势头。但随着栽植面积逐渐扩大，病虫害的发生也日趋严重。主要病虫害有：食叶害虫、危害枝干的害虫、姓果害虫、揭斑病等3-5。因此，果农们为了减少病虫害的损失，增加产量，釆取了一系列措施防治病虫的危害。如人工防治、农业防治、生物防治等措施。但是这些方法只能在一定程度上减少病虫害的发生，并且劳动量较大。而主要的防治措施是化学方法，即喷洒农药。红枣的种植从枣树发芽开花坐果到枣子成熟过程中都会受到食叶害虫、危害枝干的害虫、蛀果害虫以及病原菌的侵害。果农们在不同时期都会对枣树进行农药喷洒，如在枣树发芽、长叶期间为了减少食叶害虫的危害大量喷洒批虫啉、辛硫磷和苦生素3号等农药进行害虫防治。枣树要子开花坐果时期，果农为了增加坐果率，喷洒保丰灵等农药，并结合一些诸如批虫啉、啦螨灵等防虫农药以减少害虫的危害，增加坐果率。在此期间，一般每隔10天左右喷洒一次。率子坐果后会受到病原菌和炷果幼虫的入侵，潜伏在事子内部，为了减少麥褐斑病和桃小食心虫的危害，果农会大量喷洒百菌清和毒死蜱、啦虫啉等农药。9月下旬，红枣基本成熟，但为了防治冬褐斑病和从麥树上落下的食叶害虫、枝干害虫及蛀果害虫的虫卵落到地面过冬，常常喷洒百菌清、毒死蜱和辛硫磷等农药。综上所述，红枣在成熟过程中会出现各种病虫害，果农为了减少病虫的发生，常常喷洒大量农药用于防治。如果这些农药大量残留，消费者食用后会出现头晕、恶心、上吐下湾、甚至死亡等现象，农药污染对人体健康形成严重威胁6-7。而上述残留农药大多都是有机磷类农药，此类农药对人体毒副作用强，因此寻求一种简便，廉价，快速，高效的检测有机磷的方法是目前大家所关注的。目前使用较多的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶抑制法等方法8，这些方法操作复杂、耗时、费用昂贵并且药品和样品存在严重浪费。而气相色谱-质谱联用法集色谱法高分利能力和质谱法的结构鉴定能力于一体，灵敏度高，检测效果好，因此选择此方法具有实际应用意义。2、 国内外研究现状目前，我国对红枣产业的投资是大幅提高，尤其是对红枣表面农药残留问题越来越重视。而农药残留问题主要原因9是由于目前我国农药市场无序，假冒伪劣农药多；延误病虫害的防治，增加了防治病虫害的难度，使得使用者无法准确地控制施药剂量、浓度等。种植过程中不合理和滥用农药，使得大量用药直接附着在果实上；果实从环境中被动吸收一些高残留农药。主要是由有机磷和有机氯农药长期存在于红枣生长环境中，从而对消费者造成了危害。而今我国采取此类农药的检测方法10有气相色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用、超临介流体色谱技术、毛细管电泳法以及气象色谱质谱联用等等。（1）气相色谱法气相色谱法(GC)是检测有机磷农药的国家标准方法，具有定性、定量、准确和灵敏度高等特点；其工作原理是以气体作为流动相，待测物在气相中快速传递，使待测组分汽化后与固定相相互作用，气相和固相之间分配系数不一样，经过多次分配后不同组分之间在流动相流出时间有所差异，从而达到分离的目的。金雁等11采用气相色谱法快速检测果蔬中的12中有机磷农药残留，结果表明12种有机磷农药在0.5-10ug/ml浓度范围内的线性相关系数高达0.999以上。何佩雯等12阐述了气相色谱技术在中药材农药残留检测中的应用，极大的说明了气相色谱技术在农药检测的重要性。（2）高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法主要用于检测沸点髙、分子量大的高聚物以及气相所难以检测的热稳定性差得有机物其工作原理基本和气相色谱方法差不多。由于该方法只要求样品能制成溶液，而不需要汽化，因此80%以上的有机农药都可以用液相色谱检测13。目前用于农药残留检测的检测器有：紫外吸收检测器(UVD)、二极管陈列检测器(DAD)、突光检测器(FLD)以及质谱检测器。毛应明等14釆用高效液相色谱法检测紫菜中辛硫磷残留量，先用乙腈提取紫菜样品内的辛硫磷残留量釆，再经石油醚脱脂和柱层析净化，将净化液进行高效液相色谱分析，该方法的加标回收率为89%-98%；相对标准偏差为3.3%4.6%。（3）液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)液相色谱-质谱联用技术联合了液相色谱仪和质谱仪，能实现气相-质谱联用所解决不了的热稳定性差的物质检测，对样品检测更具有优势。陈晓红等15釆用HPLC-MS测定蔬菜中氨基甲酸醋类农药残留，通过选择性离子监测(SIM)及电喷雾电离技术进行测定；该方法的线性范围为50.0-1500ug/L，定量检测下限4.8-8.6ug/kg，方法回收率为78.5%-108.4%，标准偏差为4.6%-7.9%。（4）毛细管电泳分析法毛细管电泳技术(CE)又称高效毛细管电泳，通过通电使正负两极形成高压电场，然后以高压电场为驱动力，驱动样品中各组分在毛细管通道内移动，依据是样品中各组分之间淌度和分配系数的不同而进行分离的一类新型液相分离技术。黄宝美等16应用毛细管电泳法测定青菜中敌百虫的残留量，样品经二氯甲烧提取，活性炭脱叶绿素后，毛细管电泳检测，其最低检测限为210-6molPL，敌百虫浓度在5 10-52 l0-6 VolPL之间，呈现良好的线性关系：R=0.9914。（5）气相色谱-质谱法气相色谱法虽然实现待测组分的分离，能够利用已知标样的保留时间和峰高/峰面积进行定性和定量，但是在农产品中农药残留的实际分析过程中，由于基质和很多未规定检测的农药种类的干扰，很容易出现“假阳性”而影响判定结果，而且国内外对农产品中农药残留种类和限量指标的耍求也越来越高，单纯靠气相色谱法很难满足检测需要。而气相色谱-质谱联用仪既可以对未知化合物定性，又可以对痕量组分定量并且前处理要求相对较低，具有灵敏度高、使用范围广等特点。宁夏红枣产业的发展也是我国红枣业发展的重要组成部分，宁夏的红枣主要分布在灵武市、中宁县和同心县。“十一五”期间，自治区将灵武长枣列入全区四大林业优势产业，重点扶持、发展。同时将中宁大枣和同心圆枣列为被推广的三个优良红枣品种之一17。宁夏红枣的发展有着悠久的历史，种植面积不断扩大，土地资源山川兼备，为发展红枣产业提供了广阔的空间；经过多年的探索试验，中宁县红枣栽培综合配套技术日趋成熟， 成片种植、间作、庭院和地梗栽培四种模式尽显其效，为红枣产业快速发展提供了技术保障。红枣既可与瓜、草、粮、药等农作物间作套种，又可在山地上栽植，还可在田边、地角、院中发展， 且不与枸杞、粮油等争田地、夺劳力、抢农时， 因此， 枣树既是一个投入小、产出高、见效快的经济树种，又是一个防风固沙、涵养水源、保持水土的生态树种，其综合效益十分。但随宁夏红枣产业的迅速发展，各种病虫害发生亦呈逐年加重趋势。通过对宁夏红枣害虫的调查研究，目前危害较大的害虫主要有桑褶翅尺蠖、枣瘿蚊、桃小食心虫等，此类害虫已经对我区红枣的产量和质量造成一定影响。而且随人工栽培面积增大、外地枣苗引入以及引起环境改变等，各种病虫害发生还会逐年加重，甚至会出现某些种类暴发成灾现象，对我区红枣产业发展无疑是一个潜在的威胁。果农在生产中多采用化学方法进行病虫害防治，通过在红枣生长过程中喷洒农药（批虫啉、辛硫磷和苦生素3号等）来进行防治，这样做虽暂时控制了病虫害的发生，但是枣园内有益的生物也被杀死，很容易造成害虫的大暴发以及次要害虫上升为主要害虫。且化学防治易导致红枣产品农药残留超标，将会大大影响我区在国内外市场的开发和枣农的经济收入。有机磷和氨基甲酸酯类农药是产量大、应用广泛的杀虫剂，尽管国家出台了有关有机磷、氨基甲酸酯类农药禁用、限用规定，但在红枣监测中，仍然发现使用并造成农药残留超标情况，有必要针对这两类农药研究红枣表面农药残留检测方法，以适应农药残留检测中快速定性、定量的要求。红枣中多种有机磷、氨基甲酸酯类农药残留的分析方法是当前绿色食品枸杞认证、无公害食品枸杞认证和市场准入亟待解决的问题之一。目前还没有很好的办法来快速高效地检测红枣中农药残留的含量，只是利用一些传统的方法而已（气相色谱、液相色谱等）。因此目前寻求一种简便、高效、快速、灵敏的检测方法是迫在眉睫。从而使我区红枣的食用达到国家卫生标准。二、 课题研究的内容及实施方案：1、本课题研究内容本课题拟以宁夏中宁圆枣为研究对象，利用气象色谱质谱联用的方法，筛选出适宜红枣中敌敌畏、久效磷、马拉硫磷、对硫磷、克百威多残留的检测方法。开展中宁圆枣表面农药残留的检测研究。并寻求一组适合中宁圆枣表面农药残留检测的最佳检测条件，从而达到理想的效果，力求操作简便，快速高效。为此，本文主要研究内容如下：（1） 利用GC-MS检测中宁圆枣表面残留农药的种类（2） 利用GC-MS检测中宁圆枣表面残留农药的浓度（3） 利用GC-MS检测中宁圆枣表面残留农药的定量分析（4） 确定GC-MS检测中宁圆枣表面残留农药的最佳条件3、 实施方案（1）样品的制备先将红枣于冰箱中冷藏12小时后，取出去核后研碎，置于密封样品瓶中。（2）样品溶液的制备称取约20g 红枣试样于具塞锥形瓶中，精确到0. 01g，根据颜色深浅，加1.0g 1.6g 活性炭脱色，加140. 0mL 二氯甲烷，再加入20. 0g 无水硫酸钠，于振荡器上振荡提取1h，过滤，量取滤液35. 0mL，用旋转蒸发仪浓缩至近干，用正己烷：丙酮( 1：1) 定容至10. 0mL。待测。（3）标准混合液的配制配制含有敌敌畏、久效磷、马拉硫磷、对硫磷、克百威多农药浓度均为0.1g/L的混合样10.0mL。(4) 量取1uL 混合标准溶液注入色谱仪中，得到标准样品色谱图。然后量取1uL样品溶液注入色谱仪中，以标准样品色谱图保留时间定性，以试样峰面积与标准比较定量。从而得到红枣样品中残留的农药种类和含量。三、课题研究生有无困难及准备如何解决四、工作量及工作进度安排（包括文献阅读、方案设计与实现、计算与实验、论文书写等）起止日期课 题 阶 段 工 作 进 度五、主要参考文献（要求10篇以上，其中至少2篇国外资料）序号参 考 文 献 名 称1234567891011121314151617周禹函，毕金峰，陈芹芹等.中国红枣加工及产业发展现状J.食品与机械.2013.4：214-215.袁亚宏, 高振鹏, 史亚歌.我国红枣的产业化开发J. 西北农林科技大学学报.2002.9:96.雍文,喻菊芳,魏卫东等.灵武长枣的主要害虫及综合防治技术J.中国果树,2005,1:47-49李占文,王东菊,孙慧芳等.灵武长枣幼树主要害虫发生规律及防控技术J.中国果树,2010, 6: 57-60.李占文.灵武长枣主要病虫害危险性分析J.中国果树,2007,1:49-50.井乐刚.食品中残留农药检测技术的新进展J.食品科学.2002.3:148.李润岩，原现瑞，李 挥等.顶空固相微萃取- 气质联用快速测定草莓中5 种有机磷农药J.2009.14:191-192.李辛，董 全.有机磷农药残留检测技术的研究进展J.中国食品与营养.2010.4:13-14.伊雄海，陆贻通. 我国中药材化学农药残留污染现状与防治方法J.上海交通大学学报.2004.4：424-425.王兆守，刘丽花，邵宗泽等. 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