2014年高考生物一轮复习课件：选修1 生物技术实践.ppt

选修1生物技术实践第一讲传统发酵技术的应用第二讲微生物的培养与应用第三讲植物的组织培养技术第四讲酶的研究与应用第五讲DNA和蛋白质技术第六讲植物有效成分的提取 目录 一 果酒和果醋的制作1 制作原理 酵母菌 有氧呼吸 酒精发酵 醋酸 乙酸 2 制作流程挑选葡萄 榨汁 酒精发酵 冲洗 醋酸发酵 果酒 果醋 3 判断正误 1 在果酒自然发酵中 需人工添加酵母菌种 2 红葡萄酒中的红色是红葡萄皮中的色素进入发酵液产生的 3 变酸的酒的表面的菌膜是酵母菌大量繁殖形成的 4 在葡萄酒制作中 采摘的葡萄应反复冲洗 且要先除枝梗再冲洗 二 腐乳的制作1 原理 1 菌种 主要是 2 作用特点 蛋白质脂肪 毛霉 小分子肽和氨基酸 甘油和脂肪酸 2 影响条件 1 卤汤配制 卤汤是由酒及各种配制而成的 加酒既微生物的生长 又能使腐乳具有独特的香味 香辛料不但能调制腐乳的风味 还具有作用 2 材料用量 控制盐的用量 盐的浓度过低 不足以微生物生长 可能导致豆腐 盐的浓度过高 会影响腐乳的口味 酒的含量一般控制在左右 香辛料 抑制 防腐杀菌 抑制 腐败变质 12 三 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量1 泡菜制作 判断正误 1 泡菜制作的菌种主要是醋酸菌 2 泡菜制作的前期通氧 后期应严格厌氧 3 配制盐水时 盐与水的质量比为4 1 2 亚硝酸盐含量的测定 1 亚硝酸盐 对氨基苯磺酸 反应物 反应物 N 1 萘基乙二胺盐酸盐 色染料 2 亚硝酸盐溶液的浓度高 颜色越深 溶液浓度低 颜色 3 用显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行 并估算泡菜中亚硝酸盐的含量 玫瑰红 越浅 对比 知识体系构建 酵母菌 毛霉等 乳酸菌 无氧呼吸 醋酸菌 无氧呼吸 果酒和果醋的制作 1 2012 江苏卷T21AC 在果酒发酵过程中发酵液密度会逐渐减小 果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长 2 2012 江苏卷T21B 条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸 3 2010 江苏卷T7AC改编 在果酒和果醋制作过程中 果酒的制作过程是在缺氧条件下 而果醋整个制作过程一直处于有氧条件下 4 2010 北京卷T1AD 在家庭中用鲜葡萄制作果酒时 让发酵装置接受光照并放在45 处 5 2010 北京卷T1B 在家庭中用鲜葡萄制作果酒时 给发酵装置适时排气 1 果酒和果醋的制作步骤的比较 制果酒 制果醋 相同过程 选材和材料处理 选择新鲜的葡萄 先用清水冲洗葡萄1 2遍除去污物后 再去枝梗 制作发酵液 防止杂菌污染 发酵 将葡萄汁注入发酵瓶 注意液体量不要超过发酵瓶总体积的2 3 制果酒 制果醋 不同过程 将温度严格控制在18 时间控制在10 12d左右 发酵旺盛期的CO2产量非常大 要及时排气 防止发酵瓶爆裂 检测指标 7 10d以后 可以开始进行取样检验工作 例如 可以嗅味和品尝 用重铬酸钾检验酒精含量 进行酵母菌的镜检 测定pH等工作 将温度严格控制在30 并注意适时通过充气口充气 检测指标 果醋的制作是否成功可以通过观察菌膜的形成 嗅味和品尝初步鉴定 再通过检测和比较醋酸发酵前后的pH进一步鉴定 还可以在显微镜下观察发酵液中是否有醋酸菌 并统计其数量作进一步鉴定 2 注意事项 1 材料的选择与处理 选择新鲜的葡萄 榨汁前先冲洗后除去枝梗 以避免去除枝梗时引起葡萄破损 增加被杂菌污染的机会 2 防止发酵液被污染 需要从发酵制作的过程进行全面的考虑 因为操作的每一步都可能混入杂菌 为避免杂菌污染 榨汁机要洗净并晾干 发酵装置要洗净并用体积分数为70 的酒精消毒 封闭充气口 若用简易的发酵装置 每隔一定时间排气时只需拧松瓶盖 不要完全揭开瓶盖等 3 控制好发酵时间与温度 果醋制作时适时充气 高考地位 近三年来课标高考试题中 对本考点的考查较突出 考查形式既有选择题 也有非选择题 命题角度 1 选择题一般考查果酒 果醋的制作原理发酵的条件及操作流程中的注意事项 如典例1 2 非选择题一般通过对发酵装置的设计或解读考查制作果酒和果醋的基本原理和方法 发酵的条件 如典例2 典例1 2013 潍坊模拟 下列关于果酒和果醋制作的叙述 正确的是 A 在制作果酒和果醋实验中 一直保持厌氧环境B 温度对酵母菌酒精发酵的影响很大 而对醋酸菌的发酵影响不大C 当氧气 糖源充足时 醋酸杆菌能将果汁中的糖发酵为醋酸D 由于酵母菌的繁殖能力很强 不需对所用装置进行消毒处理 解析 酒精发酵用酵母菌 醋酸发酵用醋酸菌 温度是酵母菌和醋酸菌生长和发酵的重要条件 酒精发酵时一般将温度控制在18 25 醋酸发酵时将温度严格控制在30 35 发酵过程应注意防止杂菌污染 对所用装置进行消毒处理 答案 C 典例2 2010 海南高考 葡萄发酵可产生葡萄酒 请利用相关的知识回答问题 1 利用葡萄制作葡萄酒的过程中 发挥作用的微生物是 2 该微生物通过无氧呼吸可分解 产生的终产物是 和 3 甲 乙 丙三位同学将葡萄榨成汁后分别装入相应的发酵瓶中 在温度等适宜的条件下进行发酵 如上图所示 发酵过程中 每隔一段时间均需排气一次 据图分析 甲和丙同学的操作有误 其中甲同学的错误是 导致发酵中出现的主要异常现象是 丙同学的错误是 导致发酵中出现的主要异常现象是 上述发酵过程结束后 甲 乙 丙同学实际得到的发酵产品依次是 4 在上述制作葡萄酒的过程中 假设乙同学的某一步骤操作错误导致发酵瓶瓶塞被冲开 该操作错误是 解析 1 利用葡萄制作葡萄酒的过程中 发挥作用的微生物是酵母菌 2 酵母菌能够利用葡萄糖进行无氧呼吸产生酒精和CO2 3 甲同学错在未夹住发酵瓶的充气管 使酵母菌呼吸产生的乙醇被氧化成醋酸 发酵液变酸 从充气管流出 丙同学错在瓶中发酵液过多 淹没了排气管在瓶内的管口 导致发酵液从排气管流出 甲中乙醇被氧化成乙酸 乙和丙中都能产生乙醇 所以甲 乙 丙同学实际得到的发酵产品依次是果醋 果酒 果酒 乙同学由于未及时排气 导致发酵瓶中气压过大而冲开瓶塞 答案 1 酵母菌 2 葡萄糖乙醇CO2 3 未夹住发酵瓶的充气管发酵液从充气管流出 发酵液变酸瓶中发酵液过多 淹没了排气管在瓶内的管口排气时发酵液从排气管流出葡萄醋 或果醋 葡萄酒 或果酒 葡萄酒 或果酒 4 未及时排气 1 2012 江苏卷T21D 将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时 底层和近瓶口处需加大用盐量 2 2011 江苏卷T3AC 与果醋 果酒制作相比 腐乳的制作所需要的适宜温度最高 所用菌种为乳酸菌 腐乳的制作 3 2010 江苏卷T19B 将豆腐分别置于10 20 30 的环境中 观察并比较毛霉生长的情况 则在10 环境中毛霉生长最好 4 2008 江苏卷T17AC 在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与 加盐和加酒都能抑制微生物的生长 5 2008 江苏卷T17B 含水量大于85 的豆腐利于保持湿度 适宜制作腐乳 1 腐乳的制作流程 2 影响腐乳品质的条件 1 盐 长满毛霉的豆腐块 毛坯 与盐的质量分数比为5 1 盐的浓度过高 影响腐乳口味 浓度过低 不足以抑制微生物生长 导致腐乳腐败变质 装瓶时要分层加盐 随层数的增加而增加盐量 在瓶口表面铺盐厚些 以防止杂菌从瓶口进入 2 酒 卤汤中酒的含量控制在12 左右 酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系 酒精含量越高 对蛋白酶的抑制作用越大 使腐乳成熟期延长 酒精含量过低 不足以抑制微生物生长 导致豆腐腐败 难以成块 3 香辛料 既可调制腐乳的风味 又具有防腐杀菌的作用 4 含水量 以70 为宜 若过高则影响毛霉的有氧呼吸 且腐乳不易成形 若过低 则不利于毛霉的代谢和生长 5 发酵温度 前期的发酵温度控制在15 18 利于毛霉的生长 6 发酵时间 前期发酵和后期发酵的作用不同 所需时间应控制好 太长或太短都会影响腐乳的品质 高考地位 近几年的高考试题中 对本考点多有涉及 如2012年江苏卷第21题 2012海南卷第30题 2011年江苏卷第3题等 但在综合卷中却少有涉及 命题角度 以选择题的形式考查了腐乳制作的原理 操作过程中条件的控制及注意事项 如典例3 典例3 下列关于腐乳制作的叙述 错误的是 A 毛霉可利用其体内的酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸B 卤汤中酒的含量越高 杂菌繁殖越快 豆腐越易腐败C 用盐腌制腐乳的过程中 要控制盐的用量 盐的浓度过高会影响口味 过低则不足以抑制杂菌的生长 导致豆腐腐败D 其制作过程可以表示为 让豆腐上长出毛霉 加盐腌制 加卤汤装瓶 密封腌制 解析 豆类中含量最多的有机物是蛋白质 毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸 卤汤中酒的含量过高 会使腐乳成熟的时间延长 含量过低 蛋白酶的活性高 加快蛋白质的水解 使杂菌繁殖加快 可能导致豆腐腐败 答案 B 1 2009 浙江自选模块T17 2 泡菜发酵过程中 会产生多种酸 其中主要是乳酸 还有少量的亚硝酸 2 2013 淮安调研 对亚硝酸盐的定量测定可以用比色法 3 2013 淮安调研 亚硝酸盐不会危害人体健康 并且还具有防腐作用 所以在食品中应多加些以延长食品的保质期 4 2013 嵊州模拟 泡菜坛内有时会形成一层白膜 这是由于产膜酵母菌繁殖的结果 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 1 泡菜腌制过程中 乳酸菌 乳酸和亚硝酸盐的变化 发酵时期 乳酸菌 乳酸 亚硝酸盐 发酵初期 少 有O2时乳酸菌活动受抑制 少 增加 硝酸盐还原菌的作用 发酵中期 最多 乳酸抑制其它菌活动 积累 增多 pH下降 下降 硝酸盐还原菌受抑制 部分亚硝酸盐被分解 发酵后期 减少 乳酸继续积累 pH继续下降 抑制其活动 继续增多 pH继续下降 下降至相对稳定 硝酸盐还原菌被完全抑制 乳酸菌 乳酸 亚硝酸盐的含量随时间变化的曲线如下 2 注意事项 1 蔬菜应新鲜 放置时间长 蔬菜中的硝酸盐易被还原成亚硝酸盐 2 泡菜坛的选择 火候好 无裂纹 无砂眼 坛沿深 盖子吻合好的泡菜坛 3 腌制的条件 时间 温度 食盐的用量要适宜 4 清水和食盐的质量比为4 1 盐水要煮沸后冷却 5 泡菜坛盖边沿水糟内要注满水 以保证乳酸菌发酵所需的无氧环境 并注意在发酵过程中经常补水 6 每次取样用具要洗净 取样后迅速封坛 防止泡菜被污染 高考地位 近几年高考对泡菜的制作考查频率不高 仅在2009年浙江卷第17题中有所涉及 命题角度 结合生产 生活实际的相关背景 考查与亚硝酸盐的测定相关知识 如典例4 典例4 2009 浙江自选模块 下面是有关食醋和泡菜制作的实验 请回答 1 食醋可用大米为原料经三步发酵来制作 第一步 大米经蒸熟 冷却后加入淀粉酶 将原料中的淀粉分解成 填中间产物 然后进一步分解成葡萄糖 这一过程可用 填淀粉指示剂 来检测 因为该试剂遇淀粉呈蓝色 遇上述中间产物呈红色 第二步 用 菌将葡萄糖转化成乙醇 这一发酵过程中 玻璃发酵瓶不应完全密闭的主要原因是 第三步 用 菌将乙醇转化成乙酸 这一过程 氧气 2 泡菜发酵过程中 会产生多种酸 其中主要是 还有少量的亚硝酸 对亚硝酸盐的定量测定可以用 法 因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与N 1 萘基乙二胺偶联成 色化合物 进行样品测定时 还要取等量水进行同样的测定 目的是 解析 大米的主要成分是淀粉 在淀粉酶催化作用下 分解成糊精 主要含麦芽糖等 这一过程可用碘液 或KI I2溶液 来检测反应的情况 酵母菌将葡萄糖转化成乙醇的过程中产生CO2 随反应的进行发酵瓶中CO2逐渐增多 瓶内压力升高 可能引起爆裂 所以不能完全密闭 醋酸菌是好氧型细菌 在将乙醇转化成乙酸的过程中需要消耗氧气 泡菜发酵过程离不开乳酸菌 能产生乳酸和少量的亚硝酸 亚硝酸盐总量达到0 3 0 5g时就会引起人中毒 必须对泡菜中亚硝酸盐含量进行测定 其测定方法可用比色法 为提高可信度 准确度应设对照实验 答案 1 糊精 碘液 或KI I2溶液 酵母 发酵过程中会产生大量CO2 使瓶内压力升高 可能引起爆裂 醋酸 需要消耗 2 乳酸 比色 玫瑰红 作为对照 高考随堂体验 1 2010 江苏高考 下图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程 下列叙述正确的是 A 过程 和 都只能发生在缺氧条件下B 过程 和 都发生在酵母细胞的线粒体中C 过程 和 都需要氧气的参与D 过程 所需的最适温度基本相同解析 过程 为呼吸作用的第一阶段发生在细胞质基质中 在有氧和无氧条件下都可进行 过程 在无氧条件下进行 过程 在酵母细胞的线粒体中进行 需要氧气参与 过程 需要氧气参与最后生成醋酸 过程 即果醋制作过程的最适温度是30 35 果酒的制作过程 过程 的最适温度为18 25 答案 C 2 2012 海南高考 回答下列关于腐乳制作的问题 1 腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品 多种微生物参与了该发酵过程 其中起主要作用的微生物是 其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为 和 其产生的 能将豆腐中的脂肪水解为 和 2 发酵完成后需加盐腌制 加盐还可以抑制 生长 3 腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤汤 卤汤具有一定的防腐作用外 还能使腐乳具有独特的 解析 1 发酵过程中起作用的微生物有多种 如青霉 酵母菌 曲霉 毛霉等 其中起主要作用的是毛霉 毛霉产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解成多肽和氨基酸 产生的脂肪酶能够将豆腐中的脂肪水解为甘油和脂肪酸 2 发酵过程中加盐腌制 不仅可以调制风味 而且能够抑制杂菌等其他微生物 3 腐乳制作后期加入卤汤 卤汤不仅可以防腐 还可以使腐乳具有独特的风味 或香味 答案 1 毛霉多肽氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸 2 微生物 3 风味 3 2011 浙江自选模块 杨梅是浙江省的特色水果之一 为对其进行深加工 某厂进行了杨梅酒和杨梅醋的研制 基本工艺流程如下 1 在制备杨梅酒过程中 为了提高杨梅的出汁率 在压榨前可加入一定浓度的纤维素酶和 酶 甲罐顶上弯管中加水的主要目的是 发酵一定时间后 观察到发酵罐内液面不再有 说明发酵基本完毕 2 在制备杨梅醋过程中 乙罐内先填充经 处理的木材刨花 然后加入含 菌的培养液 使该菌 在刨花上 再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵 杨梅醋的pH可通过控制杨梅酒的 来调节 3 若甲罐中的杨梅酒全部流经乙罐制成杨梅醋 则乙罐中CO2的产生量是 A 甲罐的两倍B 与甲罐的相等C 甲罐的一半D 几乎为零 4 在杨梅酒和杨梅醋发酵的整个过程中 某物质浓度随时间变化的示意图如下 该物质是 解析 1 用纤维素酶和果胶酶水解细胞壁可提高出汁率 甲罐顶上弯管中加水可使甲罐与外界隔绝 防止空气及空气中的杂菌进入罐内 不利于酒精发酵 发酵罐内不再有气泡 CO2 冒出 说明原料耗尽 发酵完毕 2 木材刨花先经灭菌防止杂菌污染 然后加入醋酸菌 使该菌附着在木材刨花上 杨梅醋的pH取决于其产量 可通过控制杨梅酒 原料 的供应速率加以调控 3 乙罐中醋酸菌利用酒精产生乙酸的反应式为 C2H5OH O2酶CH3COOH H2O 该反应无CO2生成 4 甲 罐中先经酒精发酵产生酒精 酒精的含量不断上升 随后酒精进入乙罐作为原料生成醋酸 因而酒精含量又下降 答案 1 果胶防止空气进入气泡冒出 2 灭菌醋酸附着流速 3 D 4 酒精 课时达标检测 见 限时集训 四十二 一 微生物的分离与培养1 培养基 判断正误 1 培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型 2 培养基中一般都含有水 碳源 氮源和无机盐四种成分 3 在配制培养基时 除满足营养需求外 还应考虑pH 氧气及特殊营养物质的需求 2 无菌技术 连线 3 纯化大肠杆菌 1 制备固体培养基的流程 计算 溶化 灭菌 2 微生物的接种方法 平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面操作 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面 稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的 然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 称量 倒平板 连续划线 梯度稀释 二 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 判断正误 1 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 2 筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源 3 统计样品中的活菌一般用平板划线法 4 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 若指示剂变蓝 则说明筛选到分解尿素的细菌 三 分解纤维素的微生物的分离1 纤维素酶 1 组成 一种 它至少包括三种组分 即 2 作用 纤维素葡萄糖2 筛选方法 1 方法 刚果红染色法 即通过是否产生来筛选纤维素分解菌 2 培养基 以为唯一碳源的选择培养基 复合酶 CX酶和葡萄糖苷酶 C1酶 纤维二糖 透明圈 纤维素 3 实验流程土壤取样 富含的环境 选择培养 用培养 以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释 涂布平板 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 产生的菌落周围出现透明圈 纤维素 选择培养基 纤维素酶 知识体系构建 碳源 氮源 水 无机盐 生长因子 PH 氧气等 平板划线法 稀释涂布平板法 分解尿素的细菌 选择培养基 酒精等化学药物 高压蒸汽灭菌 显微镜直接计数 微生物的实验室培养 1 2011 重庆卷 T2A 在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌 2 2011 重庆卷 T2BC 在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长 向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长 3 2010 山东卷 T34 2 对新配制的培养基灭菌时所用的设备是高压蒸汽灭菌锅 实验前需对超净工作台进行消毒处理 4 2009 安徽卷 T6A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高温 高压灭菌后倒平板 5 2009 宁夏卷 T40 2 在微生物培养操作过程中 为防止杂菌污染 需对培养基和培养皿进行灭菌 操作者的双手需要进行清洗和消毒 1 微生物的实验室培养 1 培养基 概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 分类和应用 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂 如琼脂 观察微生物的运动 分类 鉴定 固体培养基 微生物分离 鉴定 活菌计数 保藏种 划分标准 培养基种类 特点 用途 化学成分 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确 用化学成分已知的化学物质配成 分类 鉴定 划分标准 培养基种类 特点 用途 用途 选择培养基 培养基中加入某种化学物质 以抑制不需要的微生物的生长 促进所需要的微生物的生长 培养 分离出特定微生物 如培养酵母菌和霉菌 可在培养基中加入青霉素 培养金黄色葡萄球菌 可在培养基中加入高浓度食盐 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点 在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物 如可用伊红 美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌 若有 菌落呈深紫色 并带有金属光泽 培养基中的营养要素 各种培养基一般都含有水 碳源 氮源 无机盐 此外还要满足不同微生物生长对pH 特殊营养物质以及氧气的需求 营养要素 来源 功能 碳源 无机碳源 CO2 NaHCO3 CaCO3等含碳无机物 构成细胞中的物质和一些代谢产物 既是碳源又是能源 有机碳源 糖类 脂质 蛋白质 有机酸 石油 花生粉饼等 营养要素 来源 功能 氮源 无机氮源 NH3 铵盐 硝酸盐 N2等 将无机氮合成含氮的代谢产物 有机氮源 牛肉膏 蛋白胨 核酸 尿素 氨基酸 合成蛋白质 核酸及含氮的代谢产物 生长因子 维生素 氨基酸 碱基 酶和核酸的组成成分 参与代谢过程中的酶促反应 制备 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 关键一点 1 微生物最常用的碳源是糖类 尤其是葡萄糖 最常利用的氮源是铵盐 硝酸盐 2 对异养微生物来说 含C H O N的有机化合物既是碳源 又是氮源 能源 3 有些培养基不需要添加特殊营养物质 生物自己能合成 如大肠杆菌能合成某些维生素 作为特殊营养物质 2 微生物培养的无菌技术 消毒和灭菌的区别 使用方法 结果 常用的方法 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 不包括芽孢和孢子 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂消毒法 紫外线消毒法等 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物 包括芽孢和孢子 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 三种常用灭菌方法的比较 灭菌方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间 灼烧灭菌 接种环 接种针或其他金属工具 酒精灯火焰的充分燃烧层 直至烧红 干热灭菌 玻璃器皿 吸管 培养皿 和金属用具等 干热灭菌箱内 160 170 1h 2h 高压蒸汽灭菌 培养基等 高压蒸汽灭菌锅内100kPa 121 15min 30min 2 微生物的纯化培养及菌种的保藏 1 原理 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞 使其长成单个的菌落 即一个纯化的细菌菌落 2 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 注意事项 1 接种环的灼烧 第一次划线前 杀死接种环上的微生物 避免污染培养物 每次划线前 杀死残留菌种 保证每次划线菌种来自上次划线末端 划线结束后 杀死残留菌种 避免污染环境和感染操作者 1 稀释操作时 每支试管及其中的9mL水 移液管等均需灭菌 操作时 试管口和移液管应在离火焰 处 2 灼烧接种环之后 要冷却后再进行操作 以免温度太高杀死菌种 2 涂布平板时 涂布器用体积分数为70 酒精消毒 取出时 让多余酒精在烧杯中滴尽 然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 3 划线时最后一区域不要与第一区域相连 4 划线用力要大小适当 防止用力过大将培养基划破 不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中 以免引燃其中的酒精 酒精灯与培养皿距离要合适 移液管管头不要接触任何物体 目的 在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体 菌落 培养 平板冷凝后倒置培养 使培养基表面的水分更好地挥发 防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 高考地位 微生物的分离 纯化和培养是微生物工程应用的基础 是近几年高考的重点和热点 命题角度 1 以非选择题的形式呈现 以环境污染为背景考查培养基及微生物的培养条件等 如典例1 2 以选择题的形式考查微生物的培养基的种类及消毒灭菌等基础知识 如典例2 典例1 某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验 实验包括制备培养基 灭菌 接种 培养及菌落观察与计数 请回答与此实验相关的问题 1 培养基中含有的蛋白胨 淀粉分别为细菌培养提供了 和 除此之外 培养基还必须含有的基本成分是 和 2 对培养基进行灭菌 应该采用的方法是 3 为了尽快观察到细菌培养的实验结果 应将接种了湖水样品的平板置于 中培养 培养的温度设定在37 要使该实验所得结果可靠 还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验 4 培养20小时后 观察到平板上有形态和颜色不同的菌落 这说明湖水样品中有 种细菌 一般说来 菌落总数越多 湖水遭受细菌污染的程度越 5 如果提高培养基中NaCl的浓度 可以用于筛选耐 细菌 这种培养基被称为 解析 培养基是供微生物生长 繁殖 代谢的混合养料 从营养角度分析 培养基中一般含有微生物所必需的碳源 氮源 无机盐以及水分等 另外 培养基还应具有适宜的pH 一定的缓冲能力 一定的氧化还原电位及合适的渗透压等 培养基在使用前要进行彻底的灭菌 多采用高压蒸汽灭菌 通过观察培养基上菌落的多少 可确定湖水细菌污染的程度 含高浓度NaCl的培养基可筛选出耐盐的细菌 这种培养基称为选择培养基 答案 1 氮源 碳源不作要求 碳源无机盐水 2 高压蒸汽灭菌 3 恒温培养箱无菌水 4 多高 5 盐 或NaCl 选择培养基 典例2 用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌A B C D 解析 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基 故 正确 平板划线法采用接种针进行操作 而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作 故 错误 纯化时 要进行无菌操作 需要在火焰旁接种 避免空气中的微生物混入培养基 故 正确 平板划线法一般用于分离而不是计数 故 错误 答案 C 1 2010 山东卷T34 3 测定培养液中微生物数量 可选用显微镜直接计数法 2 2013 太原五中月考 要从土壤中分离获取纤维素分解菌 应选用纤维素为唯一碳源的选择培养基 3 2013 许昌二次调研 在纤维素分解菌培养过程中 对培养基和接种环常采用的灭菌方法分别是高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌 微生物的分离与计数 4 2011 山东卷T34 4 改编 透明圈是刚果红与纤维素形成的复合物 可根据是否出现透明圈来判断有无纤维素分解菌 5 2009 安徽卷 T6D 在 检测土壤中细菌总数 的实验中 确定对照组无菌后 选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 6 2009 宁夏卷 T40 3 若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数 要想使所得估计值更接近实际值 除应严格操作 多次重复外 还应保证待测样品稀释的比例合适 1 筛选菌株的原理微生物的选择培养 在选择培养基的配方中 把尿素作为培养基中的唯一氮源 只有能够利用尿素的微生物才能够生长 把纤维素作为培养基中的唯一碳源 只有能够利用纤维素的微生物才能够生长 在无氮源的培养基上 只有自生固氮菌才能够生长 2 统计菌落数目的方法 1 显微镜直接计数法 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量 缺点 不能区分死菌与活菌 2 间接计数法 活菌计数法 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 操作 a 设置重复组 增强实验的说服力与准确性 b 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 计算公式 每克样品中的菌株数 C V M 其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积 mL M代表稀释倍数 注意 统计的菌落往往比活菌的实际数目低 这是因为当两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的只是一个菌落 3 实验中的注意事项 1 设立重复组 统计某一稀释度下平板上的菌落数时 要至少涂布3个平板作重复组 增强实验结果的说服力与准确性 2 对照原则 判断培养基中是否有杂菌污染 需将未接种的培养基同时进行培养 判断选择培养基是否具有筛选作用 需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养 观察两种培养基上菌落数目 进行对比得出结论 3 在微生物数量测定时 应选取具有合适的菌落数的培养基 如细菌 放线菌 酵母菌以每个培养皿内有30 300个菌落数为宜 霉菌以每个培养皿内有10 100个菌落数为宜 小结 选择培养基应用实例 培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌 培养基中缺乏氮源时 可以分离出固氮微生物 因为非固氮微生物不能在此培养基上生存 当培养基的某种营养成分为特定化学成分时 也具有分离效果 如石油是唯一碳源时 可以抑制不能利用石油的微生物的生长 而使能够利用石油的微生物生存 得到能消除石油污染的微生物 改变微生物的培养条件 也可以达到分离微生物的目的 如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物 高考地位 近几年本考点考查频率不高 但在一些一些省市的非选择题中有所涉及 命题角度 考题多以非选择题的形式出现 微生物的生存及培养结合在一起考查 通过生产生活中有关微生物计数 微生物分离与培养等实际问题进行考查 如典例3 典例3 富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一 主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同 制定环境条件使仅适应该条件的微生物旺盛生长 从而使其在群落中的数量大大增加 人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物 富集条件可根据所需分离的微生物的特点 从物理 化学 生物及综合多个方面进行选择 如温度 pH 紫外线 高压 光照 氧气 营养等许多方面 下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程 1 本实验所需培养基为 碳源为 2 实验原理是 3 重复培养的目的是 4 的菌落中大部分是降解 的微生物 5 为 组 为 组 设置 的目的是 6 采用 法 接种到 的培养基中 在操作过程中为防止污染应注意的事项是 解析 富集培养的培养基是一种选择培养基 可用于具有某种代谢特点的微生物 本题就是为了选择出能分解对羟基苯甲酸的微生物 该实验的培养基的碳源为对羟基苯甲酸 全过程包括筛选 扩大培养 纯化 鉴定 答案 1 选择培养基对羟基苯甲酸 2 利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基 经富集培养 选择出能降解对羟基苯甲酸的微生物 3 增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例 4 对羟基苯甲酸 5 对照实验说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物 6 单细胞挑取接种环在火焰上灼烧灭菌 烧红的接种环在空气中冷却 同时打开皿盖挑取菌种接种到试管中 并塞好棉塞 接种环在火焰上灼烧 杀灭残留物 高考随堂体验 1 2012 北京高考 高中生物学实验中 在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是 A 将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B 将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C 将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D 将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上解析 将转基因植物叶片接种到无菌培养基上 是植物组织培养的步骤之一 必须进行严格的无菌操作 否则会导致实验失败 答案 C 2 2011 新课标全国卷 有些细菌可分解原油 从而消除由原油泄漏造成的土壤污染 某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株 回答问题 1 在筛选过程中 应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上 从功能上讲 该培养基属于 培养基 2 纯化菌种时 为了得到单菌落 常采用的接种方法有两种 即 和 3 为了筛选出高效菌株 可比较单菌落周围分解圈的大小 分解圈大说明该菌株的降解能力 4 通常情况下 在微生物培养过程中 实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌 和 无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行 以避免周围环境中微生物的污染 解析 1 筛选目的菌株应使用选择培养基 可以在这类培养基中加入某种营养物质 促进所需要的微生物生长 这就是微生物学家常用的 投其所好 的策略 2 平板划线法和稀释涂布平板法都可以将聚集在一起的细菌分散或稀释成单个细胞 进而得到单菌落 3 目的菌株可分解原油 从而在培养基上形成以目的菌株为中心的分解圈 分解圈越大表明菌株的降解能力越强 4 常用的灭菌方法有灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 酒精灯火焰附近是一个无菌区 故实验操作在此处进行可防止周围环境中微生物的污染 答案 1 原油选择 2 平板划线法稀释涂布平板法 3 强 4 干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰 3 2009 上海高考 氯苯化合物是重要的有机化工原料 因其不易降解 会污染环境 某研究小组依照下列实验方案 图1 筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌 培养基配方如表1 表1培养基的组成 1 配制 号固体培养基时 除添加 号液体培养基成分外 还应添加1 的 2 培养基配制时 灭菌与调pH的先后顺序是 3 从用途上来说 号培养基和 号培养基分别属于 培养基和 培养基 在 号培养基中 为SP1菌提供氮源的成分是 4 在营养缺乏或环境恶劣时 SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体 这种休眠体被称为 5 将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的 号培养液中培养 得到生长曲线 如图2 从图2可知SP1菌在 培养条件下最早停止生长 其原因是 解析 1 固体培养基必须含有适量的琼脂 2 配制培养基时应先调pH后灭菌 灭菌后再调pH可能导致杂菌污染 3 号培养基是为了获得更多的菌株 属于通用培养基 号培养基是为了选择出SP1菌株 属于选择培养基 号培养基成分中含N物质为硝酸铵 则应由它为SP1菌株提供氮源 4 在恶劣环境下一些菌体会形成芽孢休眠体 来度过不良环境 5 SP1菌株以氯苯为碳源 当氯苯消耗尽 菌株因缺少碳源而不能继续生存 故氯苯含量越少 SP1菌株越早停止生长 答案 1 琼脂 2 先调pH 后灭菌 3 通用选择硝酸铵 4 芽孢 5 20mg L氯苯碳源最早耗尽 课时达标检测 见 限时集训 四十三 一 菊花的组织培养1 植物组织培养的基本过程 2 影响植物组织培养的因素 判断正误 1 菊花组织培养 一般选择开花植株的茎上部新萌生的侧枝 2 植物激素的浓度可影响细胞分化 但使用的先后顺序及比例不影响组织培养的过程 3 pH 温度和光照等也影响植物组织培养 3 实验操作过程 灭菌 2 外植体消毒 质量分数为0 1 无菌水 3 接种 始终在旁进行 对接种工具要用灭菌 将菊花茎段插入培养基中时注意 4 培养与移栽 在18 22 的中培养 得到后进行移栽 二 月季的花药培养1 被子植物的花粉发育过程 酒精灯火焰 火焰灼烧 不要倒插 无菌箱 试管苗 四分体时期 单核期 2 产生花粉植株的两条途径3 影响花药培养的因素 1 主要因素 和 2 月季花药培养一般选择期 细胞核由中央移向细胞一侧的时期 材料的选择 培养基的组成 单核 4 实验操作 判断正误 1 在剥离花药时 不要损伤花药 否则接种后不能脱分化形成愈伤组织 2 与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 3 月季花药培养得到的都是单倍体植株 知识体系构建 脱分化 再分化 体细胞 细胞的全能性 细胞分裂素 单核期花粉 1 2012 广东卷T2A 培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是植物组织培养 2 2011 上海卷T22A 外植体可以来自植物的任何细胞 3 2011 江苏卷T16A 愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞 植物组织培养的过程及条件 4 2012 山东卷T34 1 改编 由外植体经过脱分化过程形成愈伤组织 由愈伤组织经过再分化过程形成胚状体 5 2012 山东卷T34 3 外植体的消毒所需酒精的体积分数是70 6 2012 山东卷T34 2 培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值高时 有利于芽的分化 1 植物细胞的全能性 1 细胞具有全能性的物质基础 生物体的每一个细胞都含有本物种所特有的全套遗传物质 都有发育成完整个体所必需的全套基因 2 植物细胞只有脱离了植物体 在一定的外部因素作用下 经过细胞分裂形成愈伤组织 才能表现出全能性 2 植物组织培养的过程中脱分化与再分化的比较 过程 特点 条件 脱分化 外植体成为愈伤组织 排列疏松 高度液泡化的薄壁细胞团 离体 营养物质 植物激素 其他适宜条件 再分化 由愈伤组织成为幼苗或胚状体结构 有根 芽或有生根发芽的能力 3 影响植物组织培养的因素 1 培养材料 不同的植物组织 培养的难易程度差别很大 容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养 同一种植物材料 材料的年龄 保存时间的长短对培养也有影响 幼龄 保存时间短的植物材料容易培养成功 2 无菌条件 培养基上有细菌等微生物存在时 它们比植物细胞生长 繁殖得更快 而且它们会产生毒素 使培养的植物细胞很快中毒死亡 因此在培养过程中要求进行一系列的消毒 灭菌 并且要求无菌操作 3 植物激素 在配制好的MS培养基中 常常需要添加植物激素 其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂 脱分化和再分化的关键性激素 植物激素的浓度 使用的先后顺序以及用量的比例等 都会影响实验结果 按照不同的顺序使用这两类激素 会得到不同的实验结果 如下表 使用顺序 实验结果 先使用生长素 后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂 但细胞不分化 先使用细胞分裂素 后使用生长素 细胞既分裂又分化 同时使用 分化频率提高 当同时使用这两类激素时 两者用量的比例影响植物细胞的发育方向 关键一点 无菌技术是植物组织培养获得成功的关键 无菌技术包括培养基的灭菌 植物材料 外植体 的消毒和接种时的无菌操作 高考地位 近几年高考对本考点考查频率逐渐走高 命题形式以非选择题为主 选择题也有所考查 命题角度 1 以植物组织培养为材料背景考查了植物组织培养过程中涉及的MS培养基及消毒灭菌的相关的知识 如典例1 2 将植物组织培养的有关知识与植物激素的应用和植物中有效成分的提取相联系进行综合考查 如典例2 典例1 如下图所示为胡萝卜的韧皮部细胞通过无菌操作 接入试管后 在一定的条件下 形成试管苗的培育过程 请据图回答下列问题 1 要促进细胞分裂生长 培养基中应含有营养物质和激素 营养物质包括 和小分子有机物 激素包括细胞分裂素和 两类植物激素 2 此过程依据的原理是 A和B阶段主要进行的分裂方式是 B阶段除了细胞分裂外 还进行细胞 等 3 此过程要无菌操作 主要是指对 进行灭菌消毒 B阶段需要光照 原因是 4 试管苗的根细胞没有叶绿素 而叶的叶肉细胞具有叶绿素 这是基因 的结果 5 将胡萝卜组织块接种到培养基上时 为防止细胞污染应如何操作 解析 该题综合考查植物组织培养过程 所需条件等方面的知识 解答本题应着重从植物组织培养的原理 过程 影响因素及相关的无菌操作技术等方面入手 1 植物组织培养使用的培养基应含有供组织细胞生长发育所需要的无机盐和小分子有机物 还需供调节细胞发育方向的细胞分裂素和生长素等激素 2 植物细胞的全能性是植物组织培养的理论基础 脱分化和再分化阶段中细胞的增殖方式均为有丝分裂 再分化阶段愈伤组织经细胞有丝分裂和分化形成试管苗 3 植物组织培养过程一定要做到无菌操作 包括外植体 培养基 容器 工具等均应 消毒灭菌 其中培养基的灭菌最为重要 再分化阶段需要光照 因为叶中叶绿素的合成需要光照条件 4 同一植株的所有细胞所含有的遗传信息相同 但形态功能存在差异这是基因选择性表达的结果 5 酒精灯火焰旁温度较高 可有效杀死空气中的细菌 答案 1 无机盐生长素 2 植物细胞的全能性有丝分裂分化 3 培养基芽发育成叶 叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照条件 4 选择性表达 5 接种要在酒精灯火焰旁进行 典例2 下表是植物组织培养时 相关激素的使用情况及实验结果 下列叙述错误的是 A 从表中信息可知 不同激素的使用顺序影响植物细胞的发育方向B 从表中信息可知 不同激素用量比例影响植物细胞的发育方向C 在植物组织培养中 生长素的主要作用是促进细胞的生长 分裂和分化D 在生长素存在的情况下 细胞分裂素的作用呈现减弱趋势 解析 由表可知 如先使用生长素 后使用细胞分裂素 则有利于细胞的分裂 但细胞不分化 表明在生长素存在的情况下 细胞分裂素的作用呈现加强趋势 D错误 答案 D 月季的花药培养 1 2011 上海卷 T22BC 在无菌条件下以花粉作为外植体可得到单倍体植株 2 2012 江苏卷 T16B 二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株 3 2013 湖南32校3月联考T42 2 确定花粉发育时期最常用的方法有醋酸洋红法 某些植物的花粉不易着色 需采用焙花青一铬矾法 4 2013 临沂一模T34 4 若用花药进行离体培养则应选择花粉发育至单核期的花药培养成功率最高 1 植物组织培养技术和花药离体培养技术的异同 植物组织培养技术 花药离体培养技术 相同点 理论依据 植物细胞的全能性 基本过程 影响因素 选材 营养 激素 pH 温度 光照等 不同点 选材 体细胞 生殖细胞 花粉 生殖方式 无性生殖 有性生殖 2 注意事项 材料的选取 菊花的组织培养实验中 应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 该部分不仅分生能力强 而且无病毒侵染 月季花药的培养实验中 应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花药进行培养 且在花蕾期 因为此时质地幼嫩 花瓣未开 微生物不易侵入 容易消毒 剥离花药时 尽量不要损伤花药 同时还要彻底去除花丝 防止对实验产生干扰 外植体消毒 所用消毒剂为体积分数为70 的酒精和质量分数为0 1 的氯化汞溶液 所使用的清洗液是无菌水 培养过程 在初期 菊花的组织培养需光照 月季的花药培养不需光照 而在后期两者均需光照 高考地位 近几年高考对花药培养的单独考查较少 但结合生物育种内容对本考点的考查都很频繁 命题角度 花药离体培养技术的操作及与植物组织培养的区别将是命题主要的方向 如典例3 典例3 某二倍体植物是杂合体 下图为其花药中未成熟花粉在适宜的培养基上培养产生完整植株的过程 请据图回答 1 图中 表示的是该花粉培养过程中的 过程 表示的是 过程 X代表的是 表示的是 过程 表示的是诱导 过程 2 图中从愈伤组织形成完整植株的途径有两条 具体通过哪一条途径主要取决于培养基成分中 的种类及其浓度配比 最后获得的来源于未成熟花粉的完整植株都称为 植株 甲 未成熟花粉经培养能形成完整植株 说明未成熟花粉具有 3 对植株甲进行 才能使其结实产生后代 乙 否则植株甲只有通过 的方式才能产生后代 丙 乙 丙两种植株中 能产生可育花粉的是 植株 该植株群体中每一植株产生可育花粉的基因组成种类数为 种 该群体植株产生可育花粉的基因组成种类数为 种 花药培养在育种上的特殊意义是 从而开辟育种新途径 解析 由高度分化的植物器官 组织或细胞产生愈伤组织的过程为植物细胞的脱分化 愈伤组织继续培养 重新分化成根或芽等器官的过程为再分化 而植物激素是植物细胞脱分化 再分化不可缺少的调节物质 且不同激素的浓度比影响再分化过程 乙植株为纯合的二倍体 所以每一株乙植株产生可育花粉的基因组成种类为1种 该群体植株有多种基因型的纯合体 所以 该群体植物产生的可育花粉的基因组成种类为多种 单倍体育种的最大特点是明显缩短育种周期 答案 1 脱分化再分化胚状体分化 或发育 生根 2 激素单倍体细胞的全能性 3 染色体加倍无性繁殖乙 或经过染色体加倍 一多缩短育种周期 高考随堂体验 1 2010 安徽高考 草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代 导致产量降低 品质变差 运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗 草莓微型繁殖的基本过程如下 请回答 1 微型繁殖培育无病毒草莓苗时 一般选取 作为外植体 其依据是 2 在过程 中 常用的MS培养基主要成分包括大量元素 微量元素和 在配制好的培养基中 常常需要添加 有利于外植体启动细胞分裂形成愈伤组织 接种后2 5d 若发现外植体边缘局部污染 原因可能是 3 在过程 中 愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根 但分化出了芽 其原因可能是 解析 1 微型繁殖技术一般选取植物的茎尖或根尖 因为此处的分生组织刚刚形成 被病毒感染的机会很少或无病毒 2 MS培养基的主要成分除了大量元素 微量元素还应含有有机养分 如蔗糖 培养基中添加植物激素能促进细胞的分裂或分化 培养过程应对外植体彻底消毒 否则会引起杂菌污染 3 由愈伤组织诱导生根的培养基中 生长素类物质的量应比细胞分裂素类物质的量高 反之诱导芽的生长则低 答案 1 茎尖 或根尖 茎尖 或根尖 病毒极少 甚至无病毒 2 有机物植物激素外植体消毒不彻底 3 培养基中生长素类物质用量与细胞分裂素类物质用量的比值偏低 2 2012 新课标全国卷 为了探究6 BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响 某研究小组在MS培养基中加入6 BA和IAA 配制成四种培养基 见下表 灭菌后分别接种数量相同 生长状态一致 消毒后的茎尖外植体 在适宜条件下培养一段时间后 统计再生丛芽外植体的比率 m 以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数 n 结果如下表 回答下列问题 1 按照植物的需求量 培养基中无机盐的元素可分为 和 两类 上述培养基中 6 BA属于 类生长调节剂 2 在该实验中 自