细胞内DNA和RNA的显示.doc

实验十 细胞内DNA和RNA的显示【 目的要求 】1、掌握显示细胞内DNA和RNA的方法。2、熟悉细胞内DNA和RNA的分布位置。【 实验原理 】核酸是酸性的，它们对于碱性染料派洛宁和甲基绿具有亲和力。利用这两种染料的混合液处理细胞，可使其中的DNA和RNA呈现出不同的颜色，这种颜色上的差异由DNA和RNA聚合程度的不同所引起，因为甲基绿分子上有两个相对的正电荷，它与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色；而派洛宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA相结合使其染成红色。这样细胞中的DNA和RNA可被区别开来。【 器材与试剂 】1、器材：光学显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、注射器。2、材料：洋葱、蟾蜍。3、试剂：0.2mol/L醋酸缓冲溶液、2%甲基绿染液、1%派洛宁染液、甲基绿派洛宁混合染液。4、试剂的配制（1）2mol/L醋酸缓冲溶液：用2ml注射器抽取1.2ml冰乙酸加入到98.8ml蒸馏水中，混匀。再称取醋酸钠（NaAC3H2O）2.7g溶于100ml蒸馏水中，使用时按2：3的比例混合两液即成。（2）2%甲基绿染液：称取2.0g去杂质甲基绿溶于100ml0.2mol/L的醋酸缓冲溶液中即成。甲基绿粉中往往混有影响染色效果的甲基紫，它们必须预先除去，其方法是将甲基绿溶于蒸馏水中，放在分液漏斗中加入足量的氯仿（三氯甲烷）用力振荡，然后静置，弃去含甲基紫的氯仿，再加入氯仿重复数次，直至氯仿中无甲基紫为止，最后放入40C温箱中干燥后备用。（3）1%派洛宁染液：称取1g派洛宁（吡罗红）溶于100ml0.2/L醋酸缓冲溶液中混匀。（4）甲基绿派洛宁混合染液：将2%的甲基绿液和1%的派洛宁液以5：2的比例混合均匀即可。该液应现配现用，不宜久置。【 内容与方法 】一、血涂片DNA和RNA的显示1、制备蟾蜍血涂片：将蟾蜍用乙醚麻醉后，打开胸腔，剪开心包，小心地在心脏剪开一小口，取心脏血一小滴在干净的载玻片一端，用另一载玻片的一端紧贴血滴，待血液沿其边缘展开后，以30400角向玻片的另一端推去，制成较薄的血涂片，室温下晾干。2、固定：将晾干的血涂片浸入95%乙醇中固定510分钟，取出后在室温下晾干。3、染色：将血涂片平放在染色架上，往血标本上加数滴甲基绿派洛宁混合液，染色515分钟。4、冲洗：用蒸馏水冲洗标本片，并用吸水纸吸去玻片上多余的水分，但不要吸得过干。5、分化：将血涂片在纯丙酮中迅速地过一下，进行分化，取出晾干。6、观察：光镜下可见细胞质呈现红色，细胞核呈绿色。二、洋葱表皮细胞DNA和RNA的显示。1、用小镊子撕取一小块洋葱鳞茎表皮置于载玻片上。2、用吸管吸取甲基绿派洛宁染液滴一滴在表皮上，处理3040分钟。3、吸一滴蒸馏水冲洗表皮，并立即用吸水纸吸干（因派洛宁易脱色）。图10-1 显示细胞内DNA（绿色）、RNA（红色）（高倍镜）4、盖上盖玻片后置显微镜下观察。可见细胞核除核仁外均被染成蓝绿色，表明其含有DNA；而细胞质因含有较多RNA故被染成红色。【 作业与思考 】1、简述DNA和RNA的染色原理。2、细胞核中核仁理论上应被染成何种