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细胞实验室简介 作者Vincent 1 学习资料 细胞实验室组成细胞实验室的设置细胞实验室的基本设备配置常用器皿 器械实验室操作注意事项 大纲 2 学习资料 细胞培养实验室的设计是由工作的目的和规模决定的 其基本要求是 便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察 细胞培养实验室的设置必须满足三个基本的需要 即 实验准备 培养基配制 洗涤与灭菌等 无菌操作 控制培养 一 细胞实验室组成 3 学习资料 基本组成 基本实验室消毒准备室制备室无菌操作室辅助实验室细胞学实验室生化分析室摄影室及暗室 4 学习资料 消毒准备室制备室无菌操作室 1 基本实验室 5 学习资料 消毒准备室功能一切与实验有关的准备工作要求设备的安装和排列要合理房间要宽敞明亮 通风条件好地面要便于清洁 防滑配备实验台 高压灭菌锅 排风灭火设备 超声波清洗器 洗瓶机等 6 学习资料 制备室功能进行培养液及相关试剂的配制要求在无菌操作台内过滤 除菌 配备冰箱 天平 真空泵 PH计等 7 学习资料 无菌操作室地面 天花板及四壁尽可能光洁 无死角 易于清洁 大小适度 层高不高于2 5米 干爽 安静 清洁 明亮 紫外灯1 2盏 保持室内无菌状态 8 学习资料 无菌操作室设置空气过滤和恒温恒湿装置 恒温温度26度左右 相对湿度控制在30 65 保持正压 尽量减少与外界的空气对流 减少尘埃与微生物侵入 通常由内外间组成 外间为缓冲间 用于准备工作 研究人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋 9 学习资料 无菌操作 1 无菌操作室 无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域 最好能与外界隔离 不能穿行或受其他干扰 理想的无菌操作室应划为三部分 a 更衣室 供更换衣服 鞋子及穿戴帽子和口罩 b 缓冲间 位于更衣间与操作间之间 目的是为了保证操作间的无菌环境 c 无菌操作间 专用于无菌操作 细胞培养 其大小要适当 且其顶部不宜过高 不超过2 5m 以保证紫外线的有效灭菌效果 墙壁光滑无死角以便清洁和消毒 工作台安置不应靠墙壁 台面要光滑压塑作表面 漆成白色或灰色以利于酚红 10 学习资料 显示pH的观察 无菌操作间的空气消毒 紫外线灯 产生臭氧 并且室内温度及湿度均较高 不利于工作人员健康 空气过滤的恒温恒湿装置 最好无臭氧紫外线消毒器电子消毒灭菌器 在高压电场作用下 电子管的内外电极发生强烈电子轰击 使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧 臭氧是一种强氧化剂 能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应 从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的 消毒时没有死角 消毒后空间的残留臭氧只需30 40min即能自行还原成氧气 空气不留异味 消毒物体表面不留残毒 11 学习资料 细胞培养实验室应能进行五方面的工作 无菌操作制备清洗消毒灭菌处理储藏 二 细胞实验室的设置 12 学习资料 三 细胞实验室的基本设备配置 基本设备灭菌设备无菌操作设备细胞培养设备细胞学鉴定设备 13 学习资料 冰箱天平酸度计恒温水浴锅磁力搅拌器液氮罐纯水设备 1 基本设备 14 学习资料 15 学习资料 PH7 0 7 4去离子水无菌 16 学习资料 高温电子灭菌炉蒸汽式压力灭菌锅过滤灭菌装置喷雾消毒器紫外灯 2 灭菌设备 17 学习资料 18 学习资料 0 45 m0 22 m 19 学习资料 20 学习资料 生物安全柜 3 无菌操作设备 21 学习资料 生物安全柜根据主要几项生物安全柜国际标准的规定 安全柜可分为一级 二级和三级三大类以满足不同生物研究和防疫的要求 安全柜的分类级别与生物安全登记无关 22 学习资料 一级生物安全柜保护工作人员和环境 而不保护样品 排气口安装有HEPA过滤器 无自带风机 依赖外接通风管中的风机带动气流 23 学习资料 二级生物安全柜可提供对样品 环境 工作人员的保护 排气口安装有HEPA过滤器 独有特征是具有垂直层状薄片 无定向的 HEPA过滤器 内置风机 形成下沉气流无自带风机 依赖外接通风管中的风机带动气流 24 学习资料 三级生物安全柜为3 4级实验室生物安全等级而设计 柜体完全气闭 通过手套进行操作 俗称 手套箱 实验品通过双门的传递箱进出 适用于高风险的生物实验 25 学习资料 26 学习资料 27 学习资料 CO2培养箱离心机 4 细胞培养设备 28 学习资料 温度 37 0 5 CO2浓度 5 相对湿度 100 定期清洗 消毒 29 学习资料 罐内压力指示 接培养箱的管子 输出压力指示 压力调节旋钮 流量控制阀门 30 学习资料 31 学习资料 5 细胞学鉴定设备 倒置显微镜荧光显微镜酶标检测仪流式细胞仪 32 学习资料 33 学习资料 四 常用器皿 器械 培养器皿移液器特殊用具 34 学习资料 35 学习资料 移液器电动移液器微量移液器多通道微量移液器 36 学习资料 特殊用具细胞筛网 细胞刮刀 细胞计数板 37 学习资料 五 实验室操作注意事项 做好实验前准备 避免反复进出而增加污染机会进入细胞培养室前需更换工作服 换鞋并洗净 消毒双手 注意无菌室内的紫外灯室内常规用品不准随意拿出室外 所有物品不得挪作它用 38 学习资料 冰箱内