实验方案：聚六亚甲基双胍盐酸盐.doc

聚六亚甲基双胍盐酸盐消毒凝胶制备方案：方案1：卡波姆基质的制备：卡波姆940 10g，乙醇50g ，甘油 50g，聚山梨酯80 2g， 羟苯乙酯1g， 氢氧化钠4g，纯化水加至1000g (药剂书)方案2：聚六亚甲基双胍盐酸:1326.5， 乙醇3436，异丙醇10.515.5，聚丙烯酸0.251，三乙醇胺0.51.5甲基苷-20 0.61，丙三醇0.21，维生素E0.20.5，纯化水至100方案3:乙醇50-70，卡波姆940 0.2-2，pH值调节剂0.2-2，保湿剂0.11.0，香精0.011.5，纯化水加至100.方案4：羧甲基纤维素:60g，甘油150g，羟苯甲酯2g, 纯化水至1000g方案5：海藻酸钠30g，葡萄糖酸钙 0.5g,甘油450g,羟苯乙酯2g,加纯化水至1000g。方案6：消毒凝胶: 称取 聚六亚甲基双胍盐酸盐置于 ml（50）浓度为体积分数 %（50）乙醇中溶解，加入羧甲基纤维素钠 g（10）及其他辅助成分，充分搅拌 2min然后将其置于沸水浴中挥发脱除乙醇，继续在高速搅拌条件下加沸水至 ml（500），静置过夜去除气泡，即成消毒凝胶。质量标准：方案1：采用紫外分光光度法，对测定聚六亚甲基双胍盐酸盐的含量的准确度进行了观察。聚六亚甲基双胍盐酸盐在 234nm处有紫外吸收波长，不同浓度的样品溶液在 234nm处有不同的吸光度值，制备标准工作曲线，将所测样品的吸光值带入曲线方程即可获得样品的含量值。试验步骤1 工作曲线的绘制准确称取0.500 g (准确至 0.001g) Vantocil IB溶液于100 mL 容量瓶中, 定容, 混匀。再从上述溶液中分别吸取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL和2.5 mL于100 mL容量瓶中, 定容, 混匀。在 236 nm 处用 1 cm 石英比色池, 以蒸馏水为参比, 分别测量各稀释液的吸光度。以标准溶液浓度( 单位 g/L) 为纵坐标, 以相应的吸光度为横坐标, 绘制工作曲线。计算工作曲线方程 ( C= KA +B) 。要求相关系数 r0.999。2 检测吸取消毒液 V 为 0.250 mL 于 100 mL 容量瓶中,定容混匀。测量其吸光度, 要求消毒液测定浓度应在工作曲线范围内, 并按下式进行计算。式中:C1聚六亚甲基双胍盐酸盐的质量分数 /%;K曲线方程斜率;B曲线方程截距;V消毒液稀释前的体积 /mL消毒液的密度 /g/mL;A1样品的吸光度值用紫外分光光度法测定聚六亚甲基双胍盐酸盐含量的线性范围为330mg/L ，线性相关系数为 0.9999，加标回收率范围为 99.85%102.0% ，相对标准偏差为1.49% 。方案2：精确称取 0.20g盐酸聚六亚甲基双胍纯品到100ml 容量瓶，用蒸馏水定容配置成浓度 2g/l 的母液，再分别精确吸取3、4、5、6、7、8ml母液至 100ml 容量瓶，使盐酸聚六亚甲基胍的最终含量分别为 60、80、100、120、140、160mg/l分别取25ml 稀释液置 250ml碘量瓶中，加甲苯胺蓝指示液 2 滴，用0.0025mol/ml , 聚乙烯基硫酸钾滴定液滴定至溶液由蓝色显紫色，并将滴定结果用空白试验校正以盐酸聚六亚甲基胍含量为横坐标，消耗聚乙烯基硫酸钾滴定液的体积为纵坐标作图，得标准工作曲线,按照相关回归法计算出标准回归方程. 样品含量测定 精确吸取适量消毒剂样品于 100ml容量瓶中用蒸馏水稀释在标准曲线线性范围内，取稀释液 25ml，按上述步骤进行滴定,把消耗聚乙烯基硫酸钾滴定液的体积代入标准回归方程，计算出相应的聚六亚甲基单胍盐酸盐含量精密度试验 取配置好的120mg/ml 溶液重复测定 6 次，计算相对标准偏差.回收率试验 取 2 份含量为 60ml的平行已测样品，分别添加 0与 50mg 的聚六亚甲基单胍标准品，测定含量，计算平均回收率重复测定 3次. 最低检出浓度 将 0.0025mg/l的聚乙烯基硫酸钾滴定液稀释 50倍，配置 10/1/0.1mg/l 的聚六亚甲基单胍，各取25ml，加两滴甲苯胺蓝，用稀释后的聚乙烯基硫酸钾进行滴定，终点显蓝紫色明显的为其最低检出浓度.方案3： 聚六亚甲基双胍含量的测定方法(比色法 )1 原理 检测原理是聚六亚甲基双胍(PHMB)和 曙红(Eosin染料)之 间显色反应,颜 色改变可以通过在波 长545nm处 测量吸光度值。 2 仪器2.1 可见光分光光度计。2.2 2cm 1cm玻 璃ce11s。 2.3 容量瓶:25mL、100mL、250mL、500mL。 2.4 移液管:1.0 mL、2.0mL、2.5mL、4.0mL、6.0mL、8.0 mL 和 10.0mL。3 需要的反应物3.1 曙红Y水溶液(Eosh Y)。 3.2 PHMB标准品。3.3 三水合醋酸钠。 4 程序步骤4.1 指示溶液的制备 称0.6g水 溶性 曙红Y,放入250mL的 烧杯,以 大约50mL的 温蒸馏水溶解并冷却。转移至 100mL的标准容量瓶中 ,用 蒸馏水定容到100mL。 充分混匀,得 到溶液A。 用移液管吸取10mL A液 ,以 蒸馏水定容至250mL,得 到指示液。4.2 醋酸盐溶液的制备 将10g醋酸钠溶解于100mL蒸馏水中。 4.3 标准曲线的制备 用标准品分别配制浓度为0.8mg/L,1.6mg/L,3.2mg/L,4.8mg/L,6.4mg/L的 PHMB标准液。 将波长调至545nm,测 定上述不同浓度标准溶液的吸光值,并绘制标准曲线。 4.4 测定 用移液管吸取10mL浓度未知的PHMB溶液至25mL容量瓶，加1mL醋酸溶液和2.5mL指示液，以蒸馏水定容至25mL，用力振摇，充分混匀。用分光光度计测未知浓度的PHMB溶液的吸光度值。 5 结果计箅 根据标准曲线,计算未知溶液的PHMB含量,计算公式:式中 : c样品溶液中PHMB的 含量 ,单位为克每升(g/L);m以标准曲线中读出样品溶液的PHMB的质量,单位为微克(ug); V样品溶液的体积单位为毫升(mL)。 6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。消毒灭菌，菌落检测：方案1：各实验组试验以白色念珠菌和金黄色葡萄球菌为试验菌，试验在 20水浴条件下进行，设若干组试验大致分为如下情况： 分别将等量菌片与相应量的消毒凝胶原药作用取出，放入缓冲液中振荡打混匀，取一定量倾注法培养；白色念珠菌用消毒凝胶原药、金黄色葡萄球菌用对倍稀释液，每片菌片与相应的消毒凝胶作用取出，放入缓冲液中振荡打混匀，取一定量倾注法培养；定量菌片与对照凝胶作用取出，放入缓冲液中振荡打混匀，取一定量倾注法培养。 判定:各组的菌落生长情况长借此来判定凝胶的消毒作用。方案2：试验菌为白色念珠菌(ATCCl0231)、铜绿假单胞菌(ATcC 15442)、大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)。取其510代24 h新鲜培养物，用加有30 gL牛血清白蛋白的稀释液配制成试验菌悬液备用。试验菌为白色念珠菌和大肠杆菌，试验设平行6组，按中和剂选择试验程序进行。试验结果，以第1组不长菌或菌数远少于第2组，第2组菌数100 cfuml，第3、4、5组组问菌数相差15，第6组不长菌时，为所选中和剂及其浓度适宜。 用无菌硬水将消毒剂配制成待测浓度的1.25倍；在无菌试管内加入05 ml菌悬液