霍乱弧菌实验室检测完整版本.ppt

霍乱弧菌的实验室检测与分析 病原体 霍乱弧菌古典型O1群ElTor型O139群 霍乱 病原体 霍乱弧菌O1群 古典型 ElTor型 O139群 发病特征 剧烈腹泻 呕吐 严重脱水时致酸中毒 循环衰竭而致死亡 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20 50 重症病人达70 100 流行特征 发病急 传播快 波及范围广 能引起大流行 霍乱乱于胃肠则为霍乱 霍乱诊断标准带菌者 无霍乱临床表现 但粪便或肛拭子细菌培养检出O1群或 和O139群霍乱弧菌者 疑似病例 下列任一类病例均为疑似病例 与霍乱病人或带菌者有密切接触史或共同暴露史 临床表现为轻型病例 临床表现为轻型病例或中毒型病例 并粪便 呕吐物或肛拭子标本霍乱毒素基因PCR检测阳性或粪便 呕吐物或肛拭子标本霍乱弧菌快速辅助检测试验阳性 中 重型病例 临床诊断病例 符合下列任一类病例均为临床诊断病例 临床表现为轻 中 重型或中毒型病例 并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中检出O1群或 和O139群霍乱弧菌 在一起确认的霍乱暴发疫情中 暴露人群中临床表现为轻 中 重型或中毒型病例 实验室确诊病例 临床病人并粪便 呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或 和O139群霍乱弧菌 在疫源检索中 粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者 霍乱的实验室检测 细菌分离培养 辅助检测方法 制动试验 免疫荧光球法 PCR检测 胶体金检测卡 标本 粪便 呕吐物 水体 食品 前处理 运输 调pH 增菌 碱性蛋白胨水 水体 加十倍浓缩液 6h 过夜 涂平板 16h 4号琼脂 TCBS 庆大霉素 挑可疑菌落 多价血清凝集 血清分型 生化鉴定 胶体金层析卡检测 核酸提取 荧光PCR检测 问题 实验时间 灵敏度 初筛 等待时间 标本的采集和运输采集 病例 粪便 肛拭子 呕吐物未使用抗生素之前 健康 人 粪便 肛拭子其他传播环节的标本 食物 水 操作台 砧板 下水道口 要求 位置 数量运输 C B运输培养基 pH8 4 碱性蛋白胨水 不是最佳的 尤其6小时内还不能进行培养时 不要用运输培养基用前预冷1 2小时 采样后不能立即运至实验室时 需冷藏 实验室检查 一 血液检查 血液浓缩表现 二 尿常规检查 可见少量蛋白 白细胞 红细胞 管型等 三 粪常规检查 为水样便 无炎症细胞成分 四 粪便细菌学检查 1粪便悬滴检查及制动试验 在暗视野显微镜下发现有小亮点划过视野 为动力阳性 表明标本中有弧菌 不一定为霍乱弧菌 如再滴加诊断血清 在上述镜中 看不到小亮点划过 为制动试验阳性 提示有霍乱弧菌 2粪便直接涂片镜检 可见排列成鱼群状的革兰染色阴性的弧菌 划平板 挑菌落与玻片凝集庆大霉素平板和4号琼脂 多呈半透明状 菌落中央常呈灰色或灰黑色 并随培养时间的延长而加深 由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份 TCBS 硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂 菌落生长呈黄色发亮 表面光滑 润湿 稍凸起 边缘整齐 与诊断血清的玻片凝集 多价血清O1 小川 稻叶O139每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定 常用的选择培养基为硫代硫酸盐 枸橼酸盐 胆盐 蔗糖琼脂平板 TCBS 霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落 因发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色 血清学鉴定 对可疑菌落与O1群霍乱多价诊断血清作玻片凝集试验 如很快出现肉眼可见的明显凝集即为阳性 阳性者必须用生理盐水按同样方法作对照试验 以排除菌体自凝而导致的假阳性反应 O1群多价血清凝集阳性者用小川和稻叶单价血清进行进一步分型 O1群多价血清不凝集的可疑菌落 应用O139群诊断血清作玻片凝集 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定 小川型菌株有时在稻叶型单价血清中可出现弱凝集 这并非彦岛型 而是小川型含有少量C抗原成分 O1群和O139群抗原构造与血清分型 进一步实验 氧化酶试验1 盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸二甲基对苯二胺水溶液 粘丝试验0 5 去氧胆酸钠水溶液 霍乱快诊试剂O1群霍乱胶体金标记快诊卡O139群霍乱胶体金标记快诊卡 胶体金免疫层析检测 CT CT CT 结果 阴性阳性阳性 荧光PCR检测霍乱弧菌病例标本检测环境和食品调查的初筛方法 Ancestorstrain VariantA VariantB OutbreakA 不同暴发 不同地点 不同时间 不同的病人 不同的分离株 OutbreakC OutbreakB 关系 关联 溯源 流行病学证据 实验室证据 ICDC ChinaCDC 获得一个细菌染色体DNA的指纹图谱 细菌染色体DNA 限制性内切酶 凝胶和专用电泳仪 电泳图谱 BioNumerics 数据管理和分析 实验室网络化监测的作用 暴发的发现和溯源 1998年8月 欧芹导致的宋内志贺菌腹泻暴发 美国 加拿大 墨西哥 暴发调查 散发菌株 散发菌株 此暴发的分离株 海水 河口水霍乱弧菌增殖 超本底水平 海 水产品养殖区 批发 市售 餐馆加工家庭加工 食用者 无感染带菌者患者 不就诊患者 就诊 未检出患者 就诊 检出 特定地区 交叉污染 交叉污染 感染因素多样化 初级感染因素 衍生的感染因素 临床及时发现病例 细致的流行病学调查 实验室检测与分析 信息整合 控制行动 标本 粪便 呕吐物 水体 食品 前处理 运输 调pH 增菌 碱性蛋白胨水 水体 加十倍浓缩