MM_FS_CNJ_0027 出口粮谷中抗倒胺残留量检验方法.DOC

MM_FS_CNJ_0027出口 粮谷 抗倒胺 残留量 气相色谱法 外标法定量MM_FS_CNJ_0027 出口粮谷中抗倒胺残留量检验方法1.适用范围 本方法适用于出口大米中抗倒胺残留量的检验。2.原理概要 大米中残留的抗倒胺用丙酮-水提取，提取液用正己烷净化。再用二氯甲烷提取，过弗罗里硅土柱净化。经氯乙酰化后，用配有电子俘获检测器的气相色谱仪进行检测，外标法定量。3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂 丙酮：重蒸馏； 硅藻土：硅藻土545； 盐酸水溶液：2mol/L； 氢氧化钠水溶液：10mol/L； 正己烷：重蒸馏； 二氯甲烷：重蒸馏； 无水硫酸钠：650灼烧4h，冷却后贮存于密闭容器中； 三氯甲烷：重蒸馏； 乙腈：重蒸馏； 苯：重蒸馏； 氯乙酸酐：纯度99%； 氯乙酸酐苯溶液：5%；取5mL氯乙酸酐，用苯稀释至100mL； 弗罗里硅土：100200目，640灼烧5h，冷却后密闭贮存，用前在130加热5h以上； 硅胶：100200目，用前在130加热5h以上； 抗倒胺标准品：纯度99%； 抗倒胺标准溶液：准确称适量的抗倒胺标准品，用丙酮配成浓度为100g/mL的标准储备溶液，根据需要再配成适当浓度的标准工作液； 碳酸氢钠饱和水溶液；3.2.仪器 气相色谱仪：配有电子俘获检测器； 旋转蒸发器或K-D浓缩器； 振荡器； 弗罗里硅土柱：300mm15mm(id)玻璃柱，内装10g弗罗里硅土，上加5g无水硫酸钠； 硅胶柱：300mm15mm(id)玻璃柱，内装10g硅胶，上加5g无水硫酸钠。4.试样的抽取与制备4.1.检验批 以不超过4000袋(200t)为一检验批。 同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、等级和规格等。4.2.抽样数量 按一批总袋数的平方根式(1)抽取：a(1)式中：N全批袋数； a抽样袋数。注：a值取整数，小数部分向前进位为整数。4.3.抽样工具 单管取样器：不锈钢管，全长55cm(包括手柄)，直径1.5cm，沟槽长度应超过袋对角线长度的一半； 取样铲； 分样板； 样品筒(袋)：可密封； 分样布或适用铺垫物。4.4.抽样方法4.4.1.倒包抽样从堆垛的各部位随机抽取规定的应抽样件数的10%(每批一般不少于3袋)，将袋口缝线全部拆开，平置于分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧握袋底两角，提起约成45倾角，倒拖约1m，使袋内货物全部倒出。检查货物的外观、气味、有无发霉、变质等，并查看袋内和袋间品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，立即将样品倒入盛样器内。每袋抽取样品数量应基本一致。4.4.2.袋内抽样 按规定的应抽样袋数的90%，在堆垛四周上、中、下各层以曲线形走向随机抽取。将取样器管槽朝下，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后将管槽旋转朝上，抽出取样器，立即将样品倒入盛样容器内。每袋抽取样品数量应与4.4.1基本一致。每批样品总量应不少于4kg。4.4.3.大样缩分 集中袋内和倒包抽样所取全部样品，倒于分样布上，用分样板按四分法缩分出样品不少于2kg，盛于样品筒内，加封后标明标记并及时送交实验室。4.5.试样制备 将样品按四分法缩分到1kg，全部磨碎并通过420m标准筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器中，密封，标明标记。4.6.试样保存 将试样于5以下避光保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5.过程简述5.测定步骤5.1.提取 称取试样约20g(精确至0.1g)于500mL具塞锥形瓶中，加入40mL水，放置2h。然后加入100mL丙酮，剧烈振荡30min，静置。经铺有1cm厚硅藻土的布氏漏斗抽滤。收取残渣，加入100mL丙酮-水(73)，与上述同样操作一次。将滤液合并，于40减压浓缩至约70mL。将此液移入500mL分液漏斗中，加入150mL盐酸溶液(2mol/L)及100mL正己烷，剧烈振荡5min，静置。分取水层于500mL分液漏斗中，加入50mL正己烷，与上述同样操作一次，弃去正己烷层。水相用氢氧化钠溶液(10mol/L)中和后，加100mL二氯甲烷，振荡5min，静置。分取二氯甲烷层于锥形瓶中。于水相中再加入100mL二氯甲烷，与上述同样操作一次。将二氯甲烷层合并于上述锥形瓶中，加适量无水硫酸钠，放置30min，并间隔振摇，过滤。用20mL二氯甲烷洗涤锥形瓶后过滤。合并二氯甲烷液，于40减压蒸发至干。加入5mL三氯甲烷以溶解残渣。5.2.净化 用三氯甲烷淋洗弗罗里硅土柱，待液面与柱上端齐平时，将上述溶液定量转移入柱。以100mL三氯甲烷淋洗，弃去流出液。然后用200mL乙腈-三氯甲烷(119)洗脱。收集洗脱液，于40减压浓缩至干。加50mL苯以溶解残渣。5.3.氯乙酰化 于5.2所得溶液中加入10mL氯乙酸酐苯溶液(5%)，移入250mL分液漏斗中，加入0.1mL吡啶，剧烈振荡30min，静置。加30mL苯及50mL水，剧烈振荡1min，静置，弃去水相。然后用50mL碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，弃去水相。再用50mL水洗涤。转移苯层于100mL锥形瓶中。加入适量无水硫酸钠，放置30min，并间隔振摇。过滤，用10mL苯洗涤锥形瓶及残渣，洗液并入滤液中。于40减压浓缩至干。加入5mL丙酮-正己烷(37)以溶解残渣。 用丙酮-正己烷(37)淋洗硅胶柱，待液面与柱上端齐平时，将上述溶液定量转移入柱。以50mL丙酮-正己烷(37)淋洗，弃去流出液。改用120mL丙酮-正己烷(23)洗脱，弃去前30mL流出液，收集随后的90mL流出液，于40减压浓缩至干。加丙酮溶解残渣，定容至20mL。供气相色谱测定。5.4.测定5.4.1.色谱条件色谱柱：1.5m2.0mm(id)玻璃柱，填充物为1.5%OV-171.95%OV-210涂于ChromosorbW-HP(100200目)；载气：氮气，纯度99.99%，30mL/min；柱温：220；进样口温度：280；检测器温度：280。5.4.2.色谱测定 根据试样中抗倒胺含量情况，选定峰面积相近的标准工作液。标准工作液和样品中抗倒胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液应穿插在样液间等体积注入，进行测定。在上述色谱条件下，氯乙酰化的抗倒胺保留时间约为5.6min。标准品色谱图见附录A中图A1。5.5.空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。6.结果计算 用色谱数据处理仪或按式(2)计算：XAcV(2)Asm式中：X试样中抗倒胺残留的含量，mg/kg；A样液中氯乙酰化的抗倒胺峰面积，mm2；As标准工作液中氯乙酰化的抗倒胺峰面积，mm2；c标准工作液中抗倒胺的浓度，g/mL；V样液最终定容体积，mL；m称取的试样量，g。注：空白值应从计算结果中扣除。7.低限、回收率的测定7.1.