MM_FS_CNJ_0104 出口肉及肉制品中己烯雌酚残留量检验方法.DOC

MM_FS_CNJ_0104出口 肉 肉制品 己烯雌酚 残留量 分光光度法 MM_FS_CNJ_0104 出口肉及肉制品中己烯雌酚残留量检验方法1.适用范围 本方法适用于出口冻猪、牛、兔、鸡及午餐肉、清蒸猪肉和咸牛肉罐头中己烯雌酚残留量的检验。2.原理概要 用正己烷和氢氧化钠溶液依次提取试样中的己烯雌酚。取部分含己烯雌酚的氢氧化钠溶液，用磷酸调至pH为8左右。加乙醇和水至一定体积。此澄清液在紫外灯下辐照，使已烯雌酚转变为醌式的化合物，在波长418nm测定吸光度值，由标准曲线求得其含量。3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂 正己烷：分析纯； 磷酸：分析纯； 磷酸溶液：14； 氢氧化钠溶液：0.8mol/L，求出中和15mL0.8mol/L氢氧化钠溶液所需磷酸溶液的毫升数，以酚酞为指示剂，至粉色刚刚消失； 乙醇：分析纯； 无水硫酸钠：分析纯，650灼烧4h，于密闭容器内； 己烯雌酚标准品：纯度99%； 己烯雌酚标准储备溶液：准确称取己烯雌酚标准品25.0mg，加精制花生油至50.00g(每毫克油中含己烯雌酚0.5g)。3.2.仪器 紫外灯：15W； 分光光度计：具有10mm或40mm比色池(石英)； 组织捣碎机； 锥形瓶：250mL，具磨口玻璃塞； 分液漏斗：250mL； 容量瓶：25mL，50mL； 试管：25mL，具磨口玻璃塞和刻度。4.试样的抽取与制备4.1.检验批 以不超过2500件为一检验批，同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。4.2.抽样数量批量(件)最低抽样数(件)1251261005101250102515001550110001710012500204.3.抽样方法 按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。 肉及肉制品(罐头除外)：每件至少取一袋为原始样品，原始样品总量不少于2kg，放入清洁容器内。加封后，标明标记，及时送实验室。 如每件中无小包装或有小包装但每袋重量超过2kg，则可用锋利刀(用酒精灭菌过)在抽出的包件中，每件割取不少于100g，混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。 罐头：每件随机取一罐。 所抽取的样品加封后，标明标记，及时送实验室。4.4.试样制备 肉及肉制品(罐头除外)：从所取全部样品中取出有代表性样品约1000g，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封并标明标记。 罐头：将所取全部样品开罐后，充分搅碎、混匀，取出约1000g，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封并标明标记。4.5.试样保存 将试样于18冷冻保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5.过程简述5.1.标准曲线的绘制 准确称取己烯雌酚标准储备液100.0mg(含己烯雌酚50g)于50mL烧杯中，用50mL正己烷定量转移至分液漏斗中。用氢氧化钠溶液20，20，10mL提取三次，合并氢氧化钠溶液。 取氢氧化钠提取液0.5,1.0,2.5,5.0,7.5和10.0mL(分别含己烯雌酚0.5，1.0，5.0，7.5和10.0g)分别置一组25mL试管中，用氢氧化钠溶液补足至15mL。按3.2.4条事先求出的毫升数加入磷酸溶液中和。再加乙醇2.5mL，最后用水稀释至25mL。上述溶液每毫升含己烯雌酚分别为0.02,0.04,0.10,0.20,0.30和0.40g。 分别取适量上述溶液置于比色池中，按5.2条预先选好的辐照条件，在紫外灯下辐照。在波长418nm处测定其吸光度，以未辐照的溶液为参比液，按吸光度对浓度绘制标准曲线。5.2.辐照条件的选择(注意保护眼睛，勿直接接触紫外光线) 移取适当体积的绘制标准曲线用的溶液(0.40g/mL)放入比色池中，垂直放置在距紫外灯约7cm处，辐照10min，在波长418nm处测定其吸光度，以未辐照的溶液为参比液。然后每辐照12min重复测定其吸光度。记录达到最大吸光度的辐照时间。重复以上试验，或改变比色池和紫外灯的距离，直至找到最合适的条件，得出稳定的并可以重复的最大吸光度(约为0.09)。记录辐照时间和距离，以后试验按此条件进行。注：温度对辐照时间长短有一定影响，室温高辐照时间则短。5.3.测定 称取试样515g(精确到0.1g)于100mL烧杯中，加2050g无水硫酸钠，充分混匀，定量转入锥形瓶中。加入正已烷100mL，强烈振摇2min，静置。取清液80mL(相当于412g试样)，置分液漏斗中，加20mL氢氧化钠溶液，强烈振摇2min，静置分层(必要时可微热)。取15mL氢氧化钠溶液(相当于39g试样)，置于试管中，按3.2.4条事先求出的毫升数加入磷酸溶液中和。再加乙醇2.5mL，最后用水稀释至25mL。以下按标准曲线绘制5.1条中“取适量上述溶液置于比色池中，”。进行紫外辐照后，测定其吸光度。5.4.空白试验 用15mL 0.8mol/L氢氧化钠溶液代替样品溶液，按5.3条测定步骤进行。6.结果的计算 按下式计算样品中己烯雌酚含量：己烯雌酚(mg/kg)m1/m式中：m1按测得的吸光度从标准曲线上查得每毫升溶液中含有的己烯雌酚量，g；m每毫升样液含有的试样量，g。注：计算结果需将空白值扣除。如样品中存在大量油脂时，需将油脂体积计算在正己烷提取液体