仔猪链球菌病的病理学观察

兴 安 职 业 技 术 学 院 院 题目 ：仔 猪 链球 菌 病 的 病理 学 观察 院 系 名 称 ： 兴 安 职 业 技 术 学 院 农 牧 分 院 专 业： 畜 牧 兽 医 学 生 姓 名 ： 王长江 指 导 教 师 ： 朝 克 图 完 成 日 期 ： 2010 年 5 月 15 日 2010 年度 毕业论文 毕业论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名： 日期： 摘要 ： 猪链球菌病是由链球菌引起的猪 的 多种疾病的总称， 是一种人畜共患传染病。临床上主要表现为淋巴结脓肿、脑膜炎、关节炎以及败血症等症状，还可引起人类脑膜炎、败血症等，导致严重疾患，甚至死亡。由于链球菌血清型较多，侵害的部位广泛及机体抵抗力不同，临床上可呈现多种多样的病症与病理变化，并且常与其他疾病发生混合感染，对疾病的诊断和治疗带来了很大困难。本试验以某猪场送检并已确诊为猪链球菌感染死亡的仔猪病例为实验动物，采用病理解剖学和病理组织学技术，观察其病理学变化，为临床的鉴别诊断及治疗提供理论依据。结果表明：患病仔猪胸腹下部和四肢内侧的皮肤有紫红色出血斑，关节部肿胀 变形。各脏器呈现不同程度的充血、出血 、淤血 ；肺脏的病理变化明显，呈充血、出血、气肿；淋巴结高度肿胀，切面呈大理石状花纹，淋巴窦内充满大量血液，呈现出血性、坏死性淋巴结炎的病理变化；脑膜出血；心局部呈点状出血；肝、脾、肺、肾广泛充血、出血；各脏器实质细胞变性坏死。 关键词 ： 仔 猪 ； 链球菌 病 ；病理学 目 录 前 言 1 材料与方法 2 1 试验材料 2 验动物 2 验试剂 2 器设备 2 2 试验方法 2 色液配制 2 理解剖学方法 2 理组织学方法 2 结 果 4 1 病理解剖学观察结果 4 表变化 4 检变化 4 2 病理组织学观察结 果 6 脏 7 脏 7 脏 7 脏 8 脏 8 巴结 9 讨 论 11 结 论 13 参考文献 14 1 前 言 猪链球菌病 (由链球菌引起的 链球菌属中马链球菌兽疫亚种 (S. 马链 球菌类马亚种 (S. 致猪的疫病的总称 。近年来，国内此病的发生率呈上升趋势，严重威胁着养猪业的发展，而且还可引起从业人员感染发病和死亡，日益受到关注 。 近年来，在我国及其他各国均有链球菌感染致人患病死亡的报道 1。 猪链球菌病是一种人畜共患传染病。临床上主要表现为淋巴结脓肿、脑膜炎、关节炎以及败血症等症状，还可引起人类脑膜炎、败血症等，导致严重疾患，甚至死亡2,3。其中，猪链球菌是世界范围内引致猪链球菌病最主要的病原，该菌可引起猪脑膜炎以及败血病等疫病，人通过特定的传播途径亦可感 染该菌 4。 猪链球菌病 对猪不分年龄、性别、品种均易感，其中仔猪、怀孕母猪及保育猪较常见。 感染途径广泛 ，主要通过呼吸道感染 。 此病一年四季均可发生，在有许多其他的细菌和病毒感染压力下可加速猪链球菌的感染。拥挤、通风不良、天气变化、混群、运输迁移、免疫接种，以及同时发生其他疾病等压力都使猪只可能感染猪链球菌 5。 猪链球菌血清 2 型是猪中的重要病原菌，主要致脑膜炎，也可致心内膜炎、关节炎与肺炎。但此菌也可存在于猪的扁桃体而并不引起疾病，处于带菌状态。致病链球菌经呼吸道或其他途径（受损处的皮肤和粘膜）进入机体后 ，首先在入侵处分裂繁殖。之后，很快进入淋巴管和淋巴结。继之突破淋巴屏障，沿淋巴系统扩散到血液中，引起菌血症。由于细菌繁殖过程中产生的毒素作用，使大量红细胞溶解，血液成分改变，血管壁受损和整个血液循环系统发生障碍，网状内皮系统的吞噬机能降低，以致发生热性全身性败血症。临诊上表现体温升高。最后导致各个实质器官严重充血、出血，浆液腔 内 出现大量浆液纤维素蛋白。 目前，对于猪链球菌病的报道多为对所遇到的病例的诊断、诊治的研究，而缺乏对该病的病理学的系统的 研究 和 报道 。 病理解剖和组织学方法是一种传统的实验室诊断方法， 是一 种准确、直观的诊断方法，能通过该方法了解到疾病对患病机体的损伤部位和程度，为疾病的预防、诊断和治疗提供可靠的理论依据。 本试验 所用动物是送检的 经 关节液涂片镜检后 确诊为猪链球菌感染死亡 的 仔猪，利用病理解剖和组织学方法进行进一步实验研究，并对其病理学变化进行 观察讨论 ，以期为该病的诊断、鉴别及防治提供参考资料。 2 材料与方法 1 试验材料 试验动物 延吉某猪场 送检 的并已确诊为猪链球菌感染 死 亡 仔猪 4只 。 试验试剂 10%甲醛溶液； 无水乙醇 ； 95%酒精；二甲苯；软蜡；硬蜡；蛋白甘油；苏木精 染液 ； 伊红 染液 ；冰醋酸；树胶； 蒸馏 水等。 仪器设备 解剖工具（如 解剖刀，镊子，剪刀，骨钳， 锯等）；恒温箱； 包埋盒 ；组织盒；载玻片；盖玻片； 海仪表厂）；电热恒温培养箱（湖北省黄石市医疗器械厂）； 江省金华市科第仪器设备有限公司）； 江省金华市科第仪器设备有限公司）； 本 箱（长岭电冰箱公司）；北省黄石市医疗器械厂）。 2 试验方法 染色液配制 102000液混合后继续加热煮沸。往煮沸的混合液中加入 止加热并用玻璃 棒搅拌染液加速氧化。两天后，过滤 加入 4可使用 。 伊红染色液配法：将 5g 伊红溶于 250精 中，最后加入 醋酸。同样，需要 1成熟方可使用。 10%福尔马林配制： 10醛加 90馏水混合即可。 病理解剖学方法 首先，对 4只仔猪尸体外部及天然孔进行眼观检查，之后 借助解剖刀、镊子、剪刀、骨钳等解剖器械，剖检仔猪 2只 ，对 肝、脾、肾、 心、肺 、淋巴结、关节 组织器官进行常规病理解剖学观察并照相，同时取材放入 10%甲醛固定液固定，供病理组织学观察用。 病理组织学方法 取仔猪 的心、肾、肝、肺 、脾 、颌下淋巴结、肺门淋巴结、肠淋巴结 组织块，制作病理石蜡组织切片， H学显微镜下观察并照相。 具体步骤如下： 固定 将患病组织用 10甲醛溶液进行固定； 取材 切取组织块 ,使其平滑 ,组织块的厚度为 5 ，选取病变特征部位 ； 水洗 流水 水洗 24h； 脱水 70酒精 3h 80酒精 12h 90酒精 1h 95酒精 1h 100酒精 3 1h 100酒精 30 透明 二甲苯 20甲苯 10 浸蜡 蜡块放入恒温箱中 60人融化后，浸入， 软蜡 蜡 3h； 包埋 包埋盒 预热从恒温箱中取出酒精灯上加热倒入包埋 蜡 （反复融化使用的硬蜡） 放入组织块 ,平面朝下赶气泡再在酒精灯上稍微加热压上 组织盒盖 再倒 些许包埋 蜡赶气泡冷却凝固 ，从包埋盒中取出，修蜡块 ； 切片 利用组织切片机，厚度 57 m； 贴片、干燥 放入 恒温箱 中 ， 40 ， 至少 4h；或者 放于恒温箱中干燥后， 常温过夜 ； 二甲 苯 10甲苯 5100酒精 295酒精 20酒精 280酒精 270酒精 2木精染色 约 4水冲洗 约 30红染色 2几滴冰醋酸 ) 70酒精 30s 80酒精 190酒精 195酒精 1100酒精 11:1=酒精 :二甲苯 1甲苯10甲苯 10 封片 滴中性树胶 ,盖盖玻片； 观察 显微镜下观察并照相 。 4 结 果 1 病理解剖学 观察结果 体表变化 病猪营养状况良好 ，两耳、鼻端、腹部、四肢下端等处皮肤可见大小不等的淤血点或出血斑点。眼部有眼屎，口、鼻部污秽，呈现角弓反张状。关节部肿胀变形。颈部、颌下部肿胀。 （ 图 1） 剖检变化 肾：一个 表面呈粉白色，有出血点，如“麻雀蛋样” （图 2） 。 另一个表面出血、充血明显，呈“花斑样”，被膜易剥离，有白色坏死灶，切开后髓质变宽，皮质变薄，有明显出血斑，肾乳头扩大并充血 （图 3） 。 脾：两只均较正常 稍肿大 ， 质软， 一个 色深 ，另一个 表面发白 ，均附着有纤维素，但第 二只 较 重 ， 均 稍肿大，局部 有大小不同的 肿胀、 淤血 。 （图 4） 图 1 病猪外观 体表可见出血斑，颈部、颌下部肿胀，呈现角弓反张状，关节部肿胀 图 2 肾 表面呈粉白色，有出血点，如“麻雀蛋样” 图 3 肾 表面出血、充血明显，呈“花斑样” 5 肺：均呈 水肿、 气肿，淤血，间质增宽。一只表面有出血斑点， 另一只 前 下部呈广泛淤血。 切面流出带血的泡沫样液体。 （图 5） 颌下淋巴结及其他淋巴结：高度肿大，呈暗红色，充血，呈大理石花纹样。 （图 6） 心：心包腔积液。心脏表面充血，色淡，松弛。右心室扩张，右心心肌变性、易碎，心瓣增厚，表面粗糙，二尖瓣瓣膜上有菜花样赘生物。心内外膜有出血斑点，心冠沟及纵沟脂肪充血，心耳外膜 及冠状沟脂肪有豌豆大小出血点，心脏色淡。 肝 及胆囊 ：无明显变化，颜色稍变深 ，稍肿大 ，质硬 ；胆囊 壁炎性水肿 。 脑：肿胀，毛细血管充血、出血，质软，脑回变浅，脑脊髓膜出血。 图 6 颌下淋巴结 淋巴 结肿胀，出血，呈大理石样变形。颈部、颌下部肿胀 图 5 肺 水肿，局部气肿，充血、淤血，间质增宽 图 4 脾 表面发白，附着有纤维素，局部有大小不同的肿胀、淤血 6 喉头、气管、支气管黏膜出血。 回盲口：钮 扣状溃疡。 局部充血， 黏膜肥厚肿胀，皱折成脑回样皱 纹 。 第二只溃疡和褶皱比第一只严重许多。 （图 7） 关节：肘关节切开后，关节腔内 滑液增多，呈淡红色， 含有纤维素性渗出液 ， 关节囊增厚 ，滑膜血管的扩张和充血 。 （图 8） 2 病理组织学观察结果 图 7 回盲口 钮扣状溃疡，局部充血，黏膜肥厚肿胀，皱折成脑回样皱襞 图 8 膝关节 关节腔内滑液增多，呈淡红色，含有纤维素性渗出液，关节囊增厚，滑膜血管的扩张和充血 7 A B D C C 心脏 局部心 肌纤维 浓缩、肿胀、出现空泡， 弯曲、断裂，变性坏死，颗粒变性 ，局部溶解液化 。 心肌纤维间 散在有红细胞 和炎性细胞 ，局部有出血点和淤血。心 内、外膜有炎性 水肿、 渗出。心肌纤维间有炎性细胞浸润，尤其是心肌纤维断裂处更明显。（图 9） 肝小叶中央静脉及其附近的肝血窦扩张 充满大量血细胞 (图 10)。肝细胞肿胀，颗粒变性， 多数细胞界限不清， 部分细胞核浓缩，染色较重 ，少数细胞碎裂 、消失，出现空泡 。肝血窦内出现大量的淋巴细胞 （图 11） 。肝小叶间有白细胞浸润，门管区尤为明显。小叶间胆管细胞肿 胀 ，颗粒变性。 脾小结增多， 发育不良，生发中心不明显。脾淤血， 小结周围有大量红细胞浸润， 脾小结淋巴细胞减少，部分有坏死灶出现。 血窦内红细胞数量增多，有含铁血黄素颗粒出现 。 （图 12） 图 10 肝小叶 HE 190 淤血，肝小叶中央静脉及其附近的肝血窦扩张，充满大量的血细胞 图 9 心肌 HE 680 A:炎性细胞聚集 B:细胞溶解液化 C:细胞肿胀、弯曲，出现空泡 D:心肌纤维断裂 A B D C C 图 11 肝细胞 HE 680 肝细胞肿胀，颗粒变性，核浓缩，血窦内充满血细胞，且有炎性细胞出现 8 有明显的充血、出血现象。局部 表现为气肿，可见大量红细胞 ，肺泡破裂、融合、脱落 （图 13） 。 肺泡腔内可见少量均质、淡红色的纤维素性渗出， 肺泡壁增厚，毛细血管淤血，小支气管、细支气管上皮细胞肿胀，纤毛脱落，破裂 （图 14） 。 有含铁血黄素颗粒出现。 肾 脏 所取两个肾的眼观变化差异很大。 出血较严重的一只，镜下出血、充血严重，肾小球内、肾小管间均有大量红细胞、白细胞浸润，尤以肾小球出血严重，膨大的血管球几乎占据整个肾小囊的囊腔，囊腔内有渗出的白细胞和浆液，肾小球透明变性，肾小管上皮细胞颗粒变性、坏死。 （图 15 另一只，呈局灶坏死，坏死灶周边组织病理变化较轻。坏死处肾小球肿胀，甚至破碎，系膜细胞增生和中性粒细胞图 13 肺气肿 HE 240 肺泡肿胀，互相融合；肺泡隔中有大量红细胞 图 14 肺 HE 240 肺泡隔增厚，有纤维素性渗出和大量红细胞浸润，小支气管内有渗出物，且管壁上附着红细胞 图 12 脾淋巴小结 H E 680 小结周围有大量红细胞浸润，细胞肿胀，变性。局部细胞核崩解消失，形成空洞。 9 浸润。肾小管上皮细胞颗粒变性，部分崩解、消失，管腔中有均质，淡粉色物质。皮质和髓质的肾小管间毛细血管充血，局部有点状出血。 （图 17 颌下淋巴结、肺门淋巴结充血、出血较肠系膜淋巴结严重，三者均高度肿大。 被膜与小梁炎性水肿。 淋巴组织内含 有多量巨噬细胞 。 肺门淋巴结， 淋巴窦扩大，被膜下窦与小梁旁窦充满大量红细胞，相邻淋巴组织充血、出血较轻微。 （图 18） 颌下淋巴结呈弥散性出 血，弥散性淋巴组织及淋巴窦内有大量的红细胞浸润，局部 呈现淋巴细胞的变性坏死， 细胞肿胀， 核浓缩、裂解。 （图 19） 肠系膜淋巴结，充血、出血轻微，可见散在的单独存在的红细胞，呈广泛的淋巴细胞的变性坏死，局部形 成坏死灶。 （图 20） 图 16 肾 1 HE 760 肾小球肿胀，含有均质透明粉红色的物质，可能为细菌性血栓。肾小管颗粒变性、裂解，出现上皮管型，小管间有少量淋巴细胞 图 15 肾 1 HE 210 A:肾小管内可见均质、粉红色渗出物 B:肾小球胀，细胞透明变性 C:小管上皮细胞浓缩，嗜碱性增强 D:肾小球变性为均质 、粉红色物质，失去细胞形态 B C D A A 图 18 肾 2 HE 760 A:白细胞浸润 B:肾小管上皮细胞颗粒变性、破裂 C:肾小管上皮细胞裂解，失去细胞形态 D:红细胞浸润 B C D A A B A 图 17 肾 2 HE 240 髓质部红细胞聚集于几处，呈点状出血。集合管上皮细胞颗粒变性、脱落。小管间有少量淋巴细胞 10 图 19 颌下淋巴结淋巴小结 HE 960 可见大量散在的红细胞 ，一些淋巴细胞变性坏死，核浓缩、裂解消失 图 18 肺门淋巴结 HE 120 被膜下窦 充满大量红细胞 图 20 肠系膜淋巴结 HE 960 只可见零星散在红细胞，许多淋巴细胞浓缩、融解消失，失去细胞结构 ，形成坏死灶 11 讨 论 猪链球菌病是链球菌属中马链球菌兽疫亚种、马链球菌类马亚种引致猪的疫病的总称，是一种人畜共患传染病，可侵害机体的任何器官与组织。临床上主要表现为淋巴结脓肿、脑膜炎、关节炎以及败血症等症状，还可引起人类脑膜炎、败血症等，导致严重疾患，甚至死亡 6。 在此试 验中，死亡仔猪已经经关节液涂 片 染色 镜检确诊为猪链球菌感染，经解剖和组织学观察后，病理解剖学变化主要为胸腹下部和四肢内侧的皮肤有紫红色出血斑，关节部肿胀变形。 各脏器呈现充血、出血 、淤血 ，程度有所不同，从点状出血到广泛斑块。肺脏的病理变化明显，水肿、气肿。淋巴结高度肿胀，切面呈大理石状花纹。脑脊髓出血。各关节滑液量增多，有纤维素性浆液性渗出液。病理组织学变化主要是心的点状出血和肝、脾、肺、肾、淋 巴结的广泛充血、出血 、淤血 。实质细胞的变性坏死。淋巴结的出血性炎和坏死 性炎。 这与林太明 7报道的 典型的链球菌病的 病理变化相符 。 而不同之处主要表现在 病理解剖学上：纤维素性胸膜炎，胸膜肺炎，各脏器表面有纤维素性渗出物、发生粘连等，这种细菌性疾病变化较少，仅在脾表面上可看到白色 纤维素性渗出。原因可能与仔猪病程较短，发病较急，且此病例中呈混合感染，并有应激反应有关，没有该种病理变化。 近几年，猪病流行与往年相比有些新变化，典型猪瘟、仔猪副伤寒、猪肺疫 、猪丹毒已经很少见到，而非典型猪瘟、猪链球菌病、附红细胞体病、猪传染性胃肠炎却频繁发生 8。 猪 链球菌病 与往年相比 也 有些新变化， 典型的猪链球菌病或是单纯的链球菌感染，而是与非典型猪瘟、 附红细胞体病、猪传染性胃肠炎却频繁发生，且时常混合感染 ，给诊断、治疗带来了很大困难 。从试验结果 发现 ，病猪具 有猪瘟的特征性 病理 变化，如“麻雀蛋样”肾、回盲 口黏膜的纽扣状溃疡，淋巴结 的出血性炎，呈“大理石样”，这与邵世伟 9等报道的病理解剖学变化相符，但其缺乏病理组织学变化。 所以，当猪链球菌病与猪瘟混合感染时，主要在肾脏和回盲口处呈现猪瘟的典型病理变化。 从发病机理看，猪链球菌病的感染途径看，主要是通过呼吸道感染，首先在入侵处分裂繁殖。之后，很快进入淋巴管和淋巴结。继之突破淋巴屏障，沿淋巴系统扩散到血液中，引起菌血症。 此试验结果 所呈现的病理变化主要表现在呼吸系统的肺脏，泌尿系统的 肾脏 和免疫系统的淋巴组织 。 猪链球菌病在有许多其他的细菌和病毒感染压力下可加速猪 链球菌的感染。拥挤、通风不良、天气变化、混群、运输迁移、免疫接种，以及同时发生其他疾病等压力都使猪只