5年制第1章蛋白质.ppt

第一篇生物大分子的结构与功能PartI Structure functionofbiologicmacromolecules Protein structuralmolecule functionalmoleculeNucleicacid geneticmaterialEnzyme biocatalyst 第一章蛋白质的结构与功能Chapter1 Structure functionofprotein 蛋白质是组成生物体最基本的成分蛋白质的分子结构分成不同的四个层次蛋白质的种类和功能具有多样性不同蛋白质的功能取决于其组成和结构的差异 第一节 蛋白质的分子组成Section1 Molecularcomposeofprotein 一 结构 组成蛋白质的20种氨基酸均为 氨基酸通常处于电离状态构型均为L 型 组成蛋白质的元素主要有C H O N S 某些蛋白还含有P Fe Cu Zn Mn Co Mo等元素其中 N含量恒定 平均为16 蛋白质的基本组成单位是氨基酸 一 氨基酸 aminoacid 100g样品中蛋白质含量 g 每克样品含氮克数 100 6 25 根据侧链R在水溶液中的性质可分为 1 非极性疏水性氨基酸 侧链为链烃2 极性的中性氨基酸 侧链含有O N或S原子组成的非电离极性基团 如羟基 巯基 酰胺基等3 酸性氨基酸 Asp Glu4 碱性氨基酸 Lys Arg His 两种特殊氨基酸A 脯氨酸 Pro 亚氨基酸B 半胱氨酸 Cys 常以胱氨酸形式存在 二 氨基酸的分类 1 两性电离及等电点 三 氨基酸的理化性质 氨基酸可结合或解离质子 进行两性解离解离方式取决于其所处的酸碱度使某一氨基酸呈电中性的pH称为该氨基酸等电点 isoelectricpoint pI 2 紫外吸收性质 芳香族氨基酸 含苯环 均对紫外光有特定吸收 最大吸收波长为280nm用于快速测定蛋白的含量 两性电离及等电点 2 紫外吸收 色氨酸 酪氨酸 苯丙氨酸的最大吸收峰在280nm波长附近 3 茚三酮反应 是鉴定氨基酸 蛋白质 的特殊颜色反应可用于氨基酸 蛋白质 的定量分析 1 肽键 peptidebond 氨基酸与氨基酸之间的连接方式 二 肽 peptide 一 肽 肽键 2 肽链 polypeptidechain 由若干氨基酸通过肽键首尾相连而成的链状结构 主链 由肽键原子及相邻的C 所构成的长链骨架侧链 各氨基酸侧链 残基 residue 组成肽链的氨基酸已不完整 3 多肽与蛋白质 均是氨基酸组成的多肽链人为地将肽链较短的称为多肽 而把肽链较长的称为蛋白质 4 肽链的方向性N 末端 N terminal 和C 末端 C terminal 书写方向通常为 N 端在左 C 端在右 1 谷胱甘肽 glutathione GSH 二 生物活性肽 结构特点功能特性 SH的还原性和嗜核性 主要作为体内的氧化保护剂和解毒剂 2 多肽类激素与神经肽 下丘脑 垂体 肾上腺皮质轴的多种激素神经肽 1 根据组成成分 单纯蛋白结合蛋白 其中非蛋白成分称为辅基 可以是金属离子 色素 寡糖 脂类 磷酸或核酸等 2 根据形状 三 蛋白质的分类 classificationofproteins 纤维蛋白 长轴 短轴 10 呈纤维状 多数不溶于水 为结构蛋白球状蛋白 长轴 短轴 10 呈球形或椭圆形 多数可溶于水 为功能蛋白 第二节 蛋白质的分子结构Section2 Structureofprotein 蛋白质的分子结构是生理功能的基础蛋白质分子结构分为一 二 三 四级结构4个层次 其中二 三 四级结构又称空间构象 conformation 一 蛋白质的一级结构 primarystructure 1 概念蛋白质分子中氨基酸的排列顺序称为蛋白质的一级结构 1961年 IUPAC 2 重要性 是决定蛋白质空间构象的基础蛋白质一级结构的测定具有重大意义 1 概念是指多肽链主链中各原子在局部的空间排布方式 这种局部肽段的排布通常是指周期性呈一定规则的空间结构 2 组成 肽单元 peptideunit 由于构成肽键的C N键有部分双键性质 使肽键的四个原子和与之相连的两个 碳原子都处于同一平面 称之为肽平面 或称肽单元 二 蛋白质的二级结构 secondarystructure 肽平面 peptideplane 3 二级结构的主要形式 螺旋 helix i 在二级结构中最常见 含量最丰富ii 是局部肽段的盘绕呈右手螺旋状 侧链伸向四周的一种结构iii 主要特征 右手螺旋 3 6a a turn pitch 0 54nm螺旋之间通过氢键保持稳定由第一个肽单位上的 NH 和其后的第四个肽单位上的C O之间形成影响螺旋形成的主要因素有侧链的大小 形状及所带电荷等 Cross sectionalviewofan helix 折叠 pleatedsheet i 两条或多条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起 呈折纸状 相邻肽链上的 NH 与C O形成有规则的氢键 这样的结构称为 折叠或 片层 ii 主要特征 主链较伸展 呈Z 字型相邻的两条链之间通过氢键保持稳定侧链位于片层上 下主链走向可平行 亦可反平行 其中反平行的方式更稳定 Modelofanantiparallel pleatedsheet 转角 turn 是指多肽链中出现的一种180O回折由第一个残基的C O和第四个残基的 NH 形成的氢键来稳定其结构 4 二级结构的聚集 模序 motif 由相邻的二至三个 螺旋或 折叠组成特定的组合体 发挥特殊的功能 如 钙结合蛋白的 螺旋 环 螺旋 锌指结构等 不规则卷曲是指多肽链中规则性不强的一些区段 5 影响二级结构形成的因素 蛋白质的二级结构是根据其一级结构的特点而决定的 但在同一个蛋白质多肽链中的不同区域 可形成不同的二级结构 蛋白质二级结构是以一级结构为基础的影响二级结构形成的因素主要为残基侧链的大小 电荷脯氨酸的存在影响 螺旋的形成分子伴侣 chaperon 1 概念是指一条多肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置 亦即肽链上所有原子或基团的空间排布 2 结构域与三级结构结构域是指二级结构折叠比较紧密的区域 每个结构域都有自己独立的功能 结构域通常是蛋白质的活性区域3 三级结构的维系力 次级键包括疏水作用 离子键 盐键 氢键及VanderWaals力等 三 蛋白质的三级结构 tertiarystructure Modelofmyoglobinathighresolution Diagramofbindingdomainoffibronectin Alpha carbondiagramof chymotrypsin ModelofribonucleaseS 1 概念由两条或多条的肽链之间相互作用 彼此以非共价键相连而成的更复杂的空间排布 2 组成单位 亚基 subunit 数量 2 几千个2 10 寡聚体 10 多聚体亚基有自己独立的一 二 三级结构 但无完整的功能亚基可以相同 均一四级结构亚基亦可不相同 非均一四级结构 四 蛋白质的四级结构 quaternarystructure 3 主要维系力 疏水作用 Summary 第三节 蛋白质结构与功能的关系Section3 Relationshipsbetweenstructureandfunctionsofprotein 一 蛋白质一级结构与功能的关系 primarystructure function 一级结构一旦确定 就决定了其空间结构的排布但一级结构并不是决定空间结构的唯一因素 一 一级结构是空间结构的基础 二 一级结构与功能的关系 1 不同的一级结构决定不同的生理功能 2 一级结构中只有少数氨基酸残基与功能直接相关 即功能基团 或称关键部位 key part 3 非功能基团对维持功能基团的构象有重要作用 关键部位相同 则功能可能相同或相似 如Insulin Cytc 关键部位不同 即便是一个氨基酸残基的改变 也可导致功能的完全改变或丧失 如镰刀型血红蛋白 镰刀形血红蛋白 镰刀形红细胞贫血 sicklecellanemia Differencesinaminoacidssequenceofinsulinfromhumanandanimals InsulinA8A9A10B30humanThrSerIleThrpigThrSerIleAladogThrSerIleAlarabbitThrSerIleSercowAlaSerValAlagoatAlaGlyValAlahorseThrGlyIleAla 二 蛋白质空间结构与功能的关系 conformation function 一 肌红蛋白与血红蛋白的结构 Mb储存氧气Hb运输氧气 蛋白质的空间结构与生理功能密切相关以肌红蛋白和血红蛋白为例 含153个氨基酸残基的单链蛋白和一个血红素 heme 辅基空间结构上主要为8段 螺旋折叠为球状 heme位于分子内部的袋形空穴中 1 肌红蛋白 myoglobin Mb 由4个亚基组成 分别为2个 亚基和2个 亚基每个亚基的结构与Mb极相似4个亚基共同围绕成紧密的球形 亚基之间以疏水作用和盐键维持稳定 2 血红蛋白 hemoglobin Hb 二 血红蛋白的构象变化与结合氧 1 结合氧特性 解离曲线 Hb与O2的结合曲线呈S型 与Mb不同 直角双曲线 4个亚基与4个O2结合时难易程度不同 先难后易 平衡常数K1 K2 K3 K4 具有正协同效应 positivecooperativity 2 协同效应机理 变构效应 allostericeffect 1 变构效应的概念蛋白质与效应剂结合后引起蛋白质的构象改变 进而引起生物活性改变 的现象 称为变构效应 2 Hb的变构效应未结合时处于紧张态 T态 第一个O2结合血红素后 该亚基F肽段位移 两个 亚基之间的盐键断裂 亚基间结合松弛 第二 第三亚基更易结合O2 三个亚基结合O2以后 第四亚基的血红素已几乎完全暴露 极易结合O2 整个血红蛋白完全处于松弛态 R态 Summary Mb 三级结构 无变构效应Hb 四级结构 有变构效应 三 蛋白质构象改变与疾病 蛋白质的折叠发生错误 使蛋白质的构象发生改变 尽管其一级结构不变 仍可影响其功能 严重时可导致疾病发生 此类疾病称为蛋白构象疾病 例 疯牛病PrPCPrPSC helix sheet 第四节 蛋白质理化性质及其分离纯化Section4 Physicochemicalproperties separationandpurificationofprotein 一 蛋白质的理化性质 physicochemicalproperties 氨基酸两性电离的结果蛋白质的两性电离还受侧链酸 碱性基团电离的影响 一 蛋白质的两性电离 二 蛋白质的胶体性质 分子量大 在水溶液中分子颗粒达1 200nm蛋白溶液的稳定因素 形成水化膜 表面电荷 概念 是指某些理化因素使蛋白质分子的空间构象发生改变或破坏 导致其理化性质的改变和生物活性的丧失 本质为次级键的破坏 不涉及一级结构的改变应用 消毒灭菌 三 蛋白质的变性 1 变性 denaturation 变性因素 加热强酸 强碱有机溶剂 乙醇重金属离子 Hg2 Pb2 变性剂 SDS 尿素还原剂 巯基乙醇 蛋白质的变性与复性 四 蛋白质的紫外吸收 蛋白质的特征吸收光为280nm的紫外光 且其吸收值 O D 与蛋白质浓度呈正比 可用于蛋白质的定量 五 蛋白质的呈色反应1 茚三酮反应 ninhydrinreaction 2 双缩脲反应 biuretreaction 二 蛋白质的分离纯化 separation purification 三 氨基酸序列分析 sequencingofpolypeptide 四 蛋白质空间结构测定 determinationofconformation 一 透析 dialysis 二 层析 chromatography 离子交换层析凝胶过滤亲和层析 离子交换层析 ionexchangec