对乙酰氨基酚的生物利用度和药物动力学参数的测定.doc

对乙酰氨基酚的生物利用度和药物动力学参数的测定【实验目的】 掌握用血药浓度法（静脉注射与口服给药）测定药物制剂的生物利用度和药物动力学参数的原理与方法，并加深对这些参数的理解。【实验原理】对乙酰氨基酚水解生成对氨基苯酚，对氨基苯酚在次溴酸钠的存在下，能与苯酚产生反应，生成靛蓝染料，靛蓝染料在波长620nm处有最大吸收。为了排除血浆中的蛋白的干扰，测定血药浓度时首先应加入适量20的三氯醋酸沉淀蛋白。【实验方法】 1、血药标准曲线的制备 （1）标准贮备液的配制：精密称取105干燥恒重的对乙酰氨基酚400mg，用热蒸馏水溶解于100ml容量瓶中，冷却至室温后稀释至刻度，至冰箱保存备用（4000g/ml）。 （2）标准溶液的配制：分别精密吸取上述4000g/ml的浓贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，得40g/ml、80g/ml、120g/ml、200g/ml、280g/ml的标准溶液。 （3）空白血浆的制备：将实验动物家兔耳缘静脉处毛拔掉，涂擦酒精，用100W灯泡烤5min，将耳静脉横向切开，用经1肝素溶液处理并烤干的离心管采血约9ml。然后将刀口贴上棉球，用夹子夹住。离心得上清液血浆约4.5ml，制备标准曲线用3ml。剩下放置冰箱供测样品用。 （4）标准曲线的制备：取干燥洁净离心管6支，标上管号。精密吸取各种浓度的标准液0.5ml。按表1程序操作，于分光光度计波长620nm处，以空白血浆按同法作对照，测定吸收度。表1：操 作标准液浓度（g/ml）04080120200280标准液（ml）0.50.50.50.50.50.5空白血浆（ml）0.50.50.50.50.50.520三氯醋酸（ml）0.50.50.50.50.50.5涡旋混合后离心（3500转/分）101010101010小心吸取上清液（ml）111111浓盐酸（ml）0.50.50.50.50.50.5煮沸（h）11111140氢氧化钠溶液（ml）0.30.30.30.30.30.3显色剂加至（ml）101010101010摇匀放置（min）404040404040测定吸收度A123平均A 2、静脉给药血药浓度的测定（1）先准备7支EP管，标上试管号备用。（2）取雄性家兔1只，每只称重。精密称取0.25g对乙酰氨基酚于25ml容量瓶内。加灭菌注射用水适量，在37下溶解，并稀释至25ml。静脉注射15ml，立即记下开始时间然后按15min、30min、1h、1.5h、2.5h、4h、6h定时采血约1.5ml，每份样品离心10min（3500转/分），将上清液血浆转移至一个编号的洁净干燥EP管中，置冰箱保存备用。（3）先准备7支离心管并编号取出所有样品血浆及空白血浆。在室温解冻后，吸取0.5ml，按表2程序操作。用分光光度计在波长620nm处，以空白血浆按同法处理作对照，测定吸收度A。表2操 作取血样时间015min30min1h1.5h2.5h4h6h蒸馏水（ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5空白血浆（ml）0.50000000样品血浆（ml）00.50.50.50.50.50.50.520三氯醋酸（ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5涡旋混合后离心（3500rpm）1010101010101010小心吸取上清液（ml）11111111浓盐酸（ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5煮沸（h）1111111140NaOH溶液（ml）0.30.30.30.30.30.30.30.3显色剂加至（ml）1010101010101010摇匀放置（min）4040404040404040测定吸收度A123平均A3、口服给药血药浓度的测定 取雄性家兔1只，禁食24h，实验前称重，口服给药0. 5g，给药后按15min、30min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h定时采血约1.5ml，其他操作与静脉给药项下完全相同。4、结果处理（1）将血药标准曲线数据列表，并求出回归方程。血药浓度（g/ml）4080120200280A回归方程（2）静脉注射血药浓度的数据处理取样时间（h）1/41/211.52.546样品A根据标准曲线回归方程计算得血药浓度（g/ml）（3）口服给药血药浓度的数据处理取样时间（h）1/41/211.52346样品A根据标准曲线回归方程计算得血药浓度（g/ml）（4） 运用D