曼陀罗叶与茎中氨基酸含量的对比.doc

生化实验1曼陀罗叶与茎中氨基酸含量的对比 指导老师：张芬琴姓名：吴潇潇 学号：0812134（河西学院生命科学与工程系08级1班 ） 摘要：通过以曼陀罗的叶子和茎为实验材料测定叶和茎内氨基酸的含量。结果表明：叶与茎相比，叶中所含氨基酸高于茎中所含的氨基酸。关键词：曼陀罗；叶；茎；氨基酸含量；对比引言：1 氨基酸的定义：氨基酸：是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。氨基酸是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。植物根系的吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。所以测定植物体内游离氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。2氨基酸的功能:氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质，是在生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗体内具有特殊的生理功能，是生物体内不可缺少的营养成分之一。 1构成人体的最基本物质之一构成人体的最基本的物质，有蛋白质、脂类、碳水化合物、无机盐、维生素、水和食物纤维等。作为构成蛋白质分子的基本单位的氨基酸，无疑是构成人体内最基本物质之一。2、在食物营养中的地位和作用 人类为了生存必需摄取食物，以维持抗体正常的生理、生化、免疫机能，以及生长发育、新陈代谢等生命活动，食物在体内经过消化、吸收、代谢，促进抗体生长发育、益智健体、抗衰防病、延年益寿的综合过程称为营养。食物中的有效成分称为营养素。3.曼陀罗简介1.基本资料：中名：曼陀罗学名：Dature Stramonium Datura L.2形态特征在热带为木本或半木本，在温带地区为一年生直立草本植物。单叶互生，花两性，花冠喇叭状，五裂，多少唇形，有重瓣者；雄蕊5，全部发育，插生于花冠筒；心皮2，2室；中轴胎座，胚珠多数。蒴果。花萼在果时近基部环状断裂，仅基部宿存。3. 生物学特征：一年生草本，在低纬度地区可长成亚灌木。生于荒地、旱地、宅旁、向阳山坡、林缘、草地。花期610月，果期711月。种子繁殖。 4. 我国分布现状：全国各地区栽培和归化。 1.材料与方法1.1 材料采集、使用试剂与仪器设备 1.11实验材料 ：实验材料曼陀罗的叶子和茎于2009年9月16日采于河西学院校园内。采集到的曼陀罗的叶和茎先用自来水冲洗干净，然后用吸水纸擦拭干净。 1.12试剂 ： 水合茚三酮试剂， 4mol/L乙酸，标准氨基酸（用一定浓度的亮氨酸所配置），0.1抗坏血酸， 10 乙酸， 60%乙醇。1.13仪器设备 ：可见光分光光度计，分析天平，研钵，容量瓶，试管，移液管，水浴锅，三角瓶，漏斗。1.2方法 1.2.1氨基酸的提取用分析天平分别称取待用的曼陀罗叶和茎，将其分别放到两个研钵里并各加入5 mL 10 乙酸，研磨成匀浆后，用蒸馏水各稀释至 100 mL ，并混匀，过滤到三角瓶中，此滤液即为氨基酸的提取液。1.3.2氨基酸含量的测定方法（茚三酮测定氨基酸法）采用李合生（2005）之法。其测定原理为：氨基酸与茚三酮共热时，能定量地生成二酮茚胺。该产物显示蓝紫色，称为 Ruhemans 紫。其吸收峰在 570 nm ，而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。氨基酸与茚三酮的反应分两步进行，第一步：氨基酸被氧化形成 CO 2 、 NH 3 和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步：所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚胺（ Ruhemans 紫），反应式如下：在一定范围内，反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比，因此，可用分光光度法测定其含量。1.3.3标准曲线的制作具体步骤：1. 取6支 20 mL 刻度试管，按表 1.3-1操作。表1.3- 1制作游离氨基酸标准曲线各试剂量及操作程序 试 剂管 号123456标准氨基酸（ mL ）00.20.40.60.81无氨蒸馏水（ mL ）21.81.61.41.21水合茚三酮（ mL ）333333抗坏血酸（ mL ）0.10.10.10.10.10.1每管含氮量（ g ）012345加完试剂后混匀，用保鲜膜封住试管口。置沸水中加热 15 min ，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动，使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去。当呈现蓝紫色时，用 60 乙醇定容至 20 mL 。混匀后用 1 cm 光径比色皿在 570 nm 波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以含氮量为横坐标，绘制标准曲线。 样品测定 ：吸取样品滤液 1.0 mL ，放入 20 mL 干燥试管中，加无氨蒸馏水 1.0 mL ，其他步骤与制作标准曲线相同。根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。2.结果与分析2.1标准曲线以及待测样的含氮量表1 标准曲线中不同量标准氨酸及曼陀罗叶片和茎中氨基酸的含氮量表2 亮氨酸吸光值标准曲线图试 剂管 号12345678标准氨基酸（ mL ）00.20.40.60.8111无氨蒸馏水（ mL ）21.81.61.41.2111水合茚三酮（ mL ）33333333抗坏血酸（ mL ）0.10.10.10.10.10.10.10.1每管含氮量（ g ）012345吸光度00.0740.0850.1510.1920.2360.1230.204表3 曼陀罗叶与茎的吸光值吸光值的对照为何不对比样品中氨基态氮的含量而对比其吸光值？前者才是我们的实验目的呀！2.2结果计算按下式计算样品中氨基态氮的含量。 式中： C 从标准曲线上查得的氨基态氮含量（g）。 V T 样品稀释总体积（mL） 。V S 测定时样品体积（mL） 。 W 样品鲜重（g）。经计算，曼陀罗茎中氨基肽氮含量为0.0416%，曼陀罗叶中氨基肽氮含量为0.0854% 。备注：7号管为曼陀罗茎氨基酸提取液，8号为曼陀罗叶子氨基酸提取液。由实验得出结果如表一所示，测得曼陀罗叶片中的氨基酸的含量高于曼陀罗茎中氨基酸的含量。其吸光值如表1、表2所示，很明显叶的吸光值大于茎的吸光值。3.讨论实验结果证明曼