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文档简介

多维葡萄糖粉中维生素B2含量的测定 实验者 赵安周吉 目录 一实验目的 了解荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的原理和方法 掌握荧光分光光度计的使用 二 实验原理 物质发出的荧光强度If与物质为激发荧光而吸收紫外光强度Ia的关系式为 If Yq Ia式中 Yq为荧光量子效率 Ia为吸收强度 与物质浓度成正比 Ia kc 则If k c 维生素B2 又叫核黄素 VB2 是橘黄色无臭的针状结晶 其结构式为 维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂 在中性或酸性溶液中稳定 光照易分解 对热稳定 维生素B2溶液在430 440nm蓝光的照射下 发出绿色荧光 荧光峰在535nm 维生素B2在pH 6 7的溶液中荧光强度最大 在pH 11的碱性溶液中荧光消失 所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量 多维葡萄糖中含有维生素B1 B2 C D2及葡萄糖 其中维生素C和葡萄糖在水溶液中不发荧光 维生素B1本身无荧光 在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光 维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光 他们都不干扰维生素B2的测定 维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素 光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多 故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内 且在避光条件下进行 三 实验仪器与试剂 LS 45型荧光光度计 10mL移液管 有刻度 1支 5mL移液管 有刻度 2支 50mL容量瓶7只 0 01g L维生素B2标准溶液 冰乙酸 多维葡萄糖粉试样 四 实验步骤 1 LS 45型荧光分光光度计的使用 开机 开仪器电源 预热约10min后开计算机电源 仪器初始化完毕后 在工作界面上选择测量项目 设置适当的仪器参数 设置激发波长为440nm 发射波长为540nm 灵敏度 2 入射缝宽和出射缝宽均为10nm 点击 测本底值 测得本底值为1 41 2 样品测定 1 标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定 在6个干净的50mL容量瓶中 分别吸取0 2 0 4 0 6 0 8 0 10 0mL维生素B2标准溶液 各加入2 0ml冰乙酸 稀释至刻度 摇匀 得到不同浓度的溶液分别是 0 0 4 0 8 1 2 1 6 2 0ug mL的维生素B2溶液 从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度 2 未知试样的测定 称取约0 10g多维葡萄糖粉试样 用少量水溶解后转入50mL容量瓶中 加2 00mL冰乙

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