风湿病自身抗体荧光模式.ppt

风湿病自身抗体荧光模式及临床意义 风湿性疾病相关自身抗体1 抗核抗体谱 ANA 抗组蛋白抗体 抗非组蛋白抗体 抗DNA抗体 抗DNA组蛋白复合物抗体 抗核仁抗体 抗其他细胞成分抗体2 抗磷脂抗体 ALP 抗心磷脂抗体 ACL 抗 2 糖蛋白1 2 GP1 抗体3 抗中性粒细胞胞浆抗体谱 ANCA anti PR3 anti MPO 4 早期诊断相关抗体 抗角质蛋白抗体 AKA 抗Sa抗体 抗核周因子 APF 抗RA33抗体 抗CCP抗体 抗聚角蛋白微丝蛋白抗体 AFA 抗核抗体 ANA 的概念传统定义 是以细胞核内成份为靶抗原的器官非特异性自身抗体总称 现代定义 是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称 对ANA的理解已不再局限于核成分 而是指抗核酸 nucleicacid 和核蛋白 nucleoprotein 抗体的总称 靶抗原分布 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞分裂周期 ANA筛选实验基本原理患者血清中存在的ANA 第一抗体 能与相应细胞核 浆 抗原成分结合 再用荧光标记的抗人球蛋白抗体 第二抗体 复染 经过荧光显微镜观察即能反映ANA的存在 而且通过对患者血清做一定稀释后的检测还可以对抗体含量作半定量 滴度 测定 ANA阳性的定义 一般将超过95 正常人群ANA水平数值定义为ANA阳性 对大多数实验室而言 通常认为IFANA滴度 1 80为阳性 原因 在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖 1 1000 1 1000 ANA核均质型和着丝点型 1 100 1 100 ANA核均质型和核仁型 推荐一个标本平行作两个稀释度1 100和1 1000 整个细胞核呈现一片模糊而均匀的荧光 有时核仁部位也可见到荧光 分裂期细胞的染色体区也出现荧光 以HEp 2细胞为基质检测ANA免疫荧光模式 抗组蛋白抗体 AHA 靶抗原 组蛋白亚单位H1 H2A H2B H3 H4及其复合物抗体 主要抗原H1和H2B 功能 组蛋白 DNA 核小体相关性 药物 普鲁卡因胺 肼屈嗪等 诱导性的红斑狼疮 100 唯一的标志抗体 SLE 56 4 EUROIMMUN研究 40 80 其它风湿性疾病 少见 抗非组蛋白抗体 抗ENA抗体 Sm SSA SSB抗染色体抗体 抗着丝点 核颗粒型核内荧光呈斑点或颗粒状 核膜存在 分裂期细胞的染色体区无荧光 此型多与可溶性核抗原 ENA 有关 抗Sm抗体靶抗原 与U1 U2 U4 U5 或U6 nRNA连接的6种不同蛋白分子 coreproteinsB B D E F G 功能 切割pre mRNA相关性 SLE 6 3 EUROIMMUN研究 5 30 核粗颗粒型 RNP Sm类型 抗核糖核蛋白抗体 抗U1 nRNP 靶抗原 与U1 nRNA连接的3个颗粒特异性蛋白 70K A和C 功能 切割pre mRNA相关性 MCTD 95 100 SLE 17 5 EUROIMMUN研究 15 40 抗SS A抗体 抗Ro抗体靶抗原 与Y1 Y3 Y4或Y5型RNA连接的2个蛋白 52kDa和60kDa 功能 调节mRNA的转译活性相关性 干燥综合征 40 95 SLE 34 7 EUROIMMUN研究 20 60 抗SS B抗体 抗La抗体靶抗原 与小分子RNA U6 RNA pre tRNA 结合的磷脂蛋白 48kDa 功能 RNA多聚酶III的辅助蛋白相关性 干燥综合征 40 95 SLE 13 3 EUROIMMUN研究 10 20 核细颗粒型 SS A SS B类型 抗着丝点抗体靶抗原 连接动粒 着丝点 上的4个蛋白分子 A B C D 蛋白 分子量 17 80 140 50kDa 主要的靶抗原 着丝点B蛋白 与IIFT相关性 100 相关性 对系统性硬化诊症局限型 CREST综合征 有确诊意义 80 95 ANA 着丝点型 抗DNA抗体 ssDNA dsDNA 靶抗原 单链 非天然 变形 DNA 嘌呤和嘧啶碱基对 双链 天然DNA 脱氧核糖核酸结构 相关性 ssDNA类风湿80 8 EUROIMMUN研究 SLE40 0 EUROIMMUN研究 干燥综合征44 0 EUROIMMUN研究 皮肌炎12 3 EUROIMMUN研究 类风湿性关节炎51 7 EUROIMMUN研究 献血员6 8 EUROIMMUN研究 dsDNASLE30 90 抗ds DNA 绿蝇短膜虫 抗DNA组蛋白复合物抗体狼疮细胞抗DNP抗体抗核小体抗体 抗核仁抗体抗RNA多聚酶 原纤维蛋白NOR 90和Th To等抗体 RNA多聚酶I II和III靶抗原 多个蛋白亚单位组成的核仁酶复合物功能 多聚酶I 转录rRNA基因多聚酶II 转录mRNA基因多聚酶III 转录tRNA基因相关性 硬皮病 4 核仁颗粒型 抗RNA多聚酶 抗体 核仁均质型 Scl 70类型 抗Scl 70抗体靶抗原 DNA拓扑异构酶I降解产物 100kDa 功能 DNA复制和翻译过程的辅助蛋白相关性 系统性硬化症 79 7 EUROIMMUN研究 25 75 抗Scl 70抗体阳性患者肺间质纤维化的危险性明显增加 并且提示预后不良 抗PM Scl抗体靶抗原 多个蛋白分子的复合物主要的靶抗原100kDa 与DNA拓扑异构酶I不同 功能 未知相关性 硬皮病 2 5 皮肌炎 8 重叠综合征 24 核仁均质型 PM Scl类型 抗原纤维蛋白 U3 nRNP 抗体 AFA 靶抗原 与基础蛋白 34kDa 连接的U3 nRNA和其它5个蛋白功能 分离pre rRNA相关性 硬皮病 5 10 核仁颗粒型 抗原纤维蛋白抗体 抗增殖性细胞核抗原抗体靶抗原 PCNA功能 DNA聚合酶的辅助蛋白相关性 SLE的特异性抗体3 抗周期蛋白I抗体 抗周期蛋白II抗体 抗核点型抗体主要有两种荧光模型少核点型 p80卷曲蛋白抗体 1 5个点 SLE 干燥综合症 原发性胆汁性肝硬化多核点型 Sp100 5 20个点 常与线粒体抗体同时出现 原发性胆汁性肝硬化 进行性系统性硬化症 SLE 重叠综合症 ANA 核点型 抗Ku抗体靶抗原 66KD 88KD核蛋白相关性 PM DM SLE 核细颗粒 网状型 抗Ku抗体类型 HEp 2细胞 灵长类肝脏 抗核膜型 抗中性粒细胞抗体 ANCA 一组与中性粒细胞或单核细胞胞浆中的一些特异性抗原发生反应的自身抗体靶抗原谱 丝氨酸蛋白酶3 PR3 髓过氧化物酶 MPO 杀菌 通透性增高蛋白 BPI 人白细胞弹性蛋白酶 HLE 乳铁蛋白 LF 组织蛋白酶G CG 溶菌酶 LYS 天青杀素 AZU ANCA荧光染色模型 固定剂作用人为形成胞浆型 C ANCA cytoplasmicpattern 主要靶抗原成份是PR 3 在活动性韦氏肉芽肿 WG 中阳性率几乎100 特异性在90 以上 也可见于显微镜下多血管炎等原发性血管炎 且与疾病活动度具有明显相关性 核周型 P ANCA perinuclearpattern 主要靶抗原成份是MPO 要与坏死性血管炎 特发性坏死性新月体性肾小球肾炎 NCGN Churg Strauss综合征及炎症性肠病等有关 在SLE患者可有10 15 阳性 RA患者存在关节外损害及血管损害时也可呈阳性 非典型型 X ANCA atypicalpattern A ANCA为上述两型的混合型 P ANCAC ANCA 目前ANCA临床常规检测存在的问题仅用IIF法检测ANCA 而不检测ANCA特异性抗体降低了ANCA对疾病诊断的特异性仅检测抗PR3和抗MPO两种特异性抗体 而不做IIF ANCA 降低了ANCA对疾病诊断的应用范用IIF法检测ANCA时 未能严格排除ANA的干扰 出现假阳性结果IIF和 或ELISA的检测仅为定性结果 而无定量结果 类风湿关节炎的自身抗体 名称 敏感性 特异性 类风湿因子RA33 36抗体Sa抗体抗角蛋白抗体抗核周因子抗CCP抗体抗CB10抗体抗BiP抗体 50 7025 45373338 6260 707270 8693 678 9787 9270 909670 8892 不同抗体在RA诊断中的意义 系统性红斑狼疮的自身抗体 抗体敏感性 特异性 抗核抗体 ANA dsDNA抗体抗Sm抗体膜DNA抗体核小体抗体U1RNP抗体SS A抗体SS B抗体抗心磷脂抗体类风湿因子PCNA抗体组蛋白抗体核蛋白抗体 809599949287 9470407530955050 99702578855025 351520 4025530 8058 干燥综合征的自身抗体 自身抗体阳性率 ANA抗SSA抗体抗SSB抗体抗a 胞衬蛋白抗体抗M3受体抗体类风湿因子ANCA抗M2抗体ACA抗RNP抗体 60 8050 7030 6065 87926