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文档简介

叶绿体色素的提取 理化性质的鉴定及叶绿素含量的测定 目的和意义 因此 测定叶绿素含量便成为研究光合作用必不可少的手段 在作物育种 科学施肥 看叶诊断中有着广泛的应用 绿色植物的光合作用是在叶绿体中的叶绿体色素中进行的 了解叶绿体色素的组成 性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助 叶绿素的化学结构 一 叶绿体色素的提取 叶绿体中含有叶绿素 叶绿素a与b 和类胡萝卜素 胡萝卜素和叶黄素 这两类色素均不溶于水 而溶于含有水的有机溶剂 故常用95 的酒精或用酒精 丙酮和水的混合液提取或80 丙酮提取 一 原理 二 器材与试剂 器材 分光光度计 电子天平 量筒 研钵 剪刀 漏斗 滤纸 移液管 1mL 试管及试管架 酒精灯等 试剂 95 乙醇 醋酸酮 5 盐酸 碳酸钙 石英砂等 三 方法与步骤 称取0 1g左右的鲜叶 剪碎 放入研钵中 加少许碳酸钙和少量的石英砂 中和细胞中的酸 防止镁从叶绿素分子中移出 与1ml95 乙醇 在研钵中快速研磨 再加95 乙醇洗涤残渣中的色素 过滤 在25ml的容量瓶里定容至25ml 滤液即为色素提取液 二 叶绿体色素某些理化性质的观察 叶绿素是一种二羧酸酯 在弱酸作用下 叶绿素中镁可被H 取代而成为褐色的去镁叶绿素 后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素 一 原理 取上述叶绿体色素5ml 放入试管中 加5 盐酸两滴摇匀 观察溶液颜色的变化 当溶液变褐色后 投入醋酸铜粉末少许 微微加热 观察溶液颜色的变化 二 铜代叶绿素反应 三 叶绿素含量的测定 分光光度法 一 原理叶绿素a b在红光区的最大吸收峰分别为665nm和649nm 类胡萝卜素的最大吸收峰为470nm 据朗伯 比尔定律 求出叶绿素a b含量 Ca 13 95A665 6 88A649Cb 24 96A649 7 32A665 二 方法与步骤 用移液管取叶绿素提取液注入比色杯中 以95 乙醇作为参比溶液 根据实验要求 选用相应的波长在分光光度计上测定光密度 三 结果与计算 样品中叶绿素含量 mg g 比色杯中叶绿素浓度 稀释倍数 定容体积 样品量 g鲜重 注意事项 叶绿素提取液避光保存 酒精灯用完后要及时用灯帽盖灭 以防着火 叶绿体色素提取液不能浑浊 可在710nm或750nm波长下测量光密度 其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时光密度值的5 否则应重新过滤 由于叶绿素a b的吸收峰很陡 仪器波长稍有偏差 就会使结果产生很大的误差 因此最好用波长较准确的高级型分光光度计 思考题 1 叶绿素a b在蓝光区也有吸收峰 能否用这一吸收峰波长进行
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