食源性细菌检验.ppt

2001 02 1 食源性细菌检验 2001 02 2 沙门菌 沙门菌属Salmonella沙门菌属为一大群寄生于人 动物肠道中 生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌 种类繁多 抗原型别多样 主要致病菌 伤寒杆菌 副伤寒甲 乙杆菌 引起伤寒病其它沙门菌 对动物致病人类食物中毒 败血症 2001 02 3 一 生物学性状 一 形态与染色同其它肠道杆菌有鞭毛动力 沙门菌1000 二 生化反应不发酵乳糖大部分菌株产生H2S葡萄糖发酵情况可有不同 见下表 2001 02 4 主要沙门菌的生化特性 菌名动力葡萄糖乳糖H2S 伤寒沙门菌 副伤寒甲 副伤寒乙 2001 02 5 三 抗原结构 O抗原 H抗原 Vi抗原 1 沙门菌 O 抗原 耐热菌体抗原用阿拉伯数字1 2 3 表示 从1 67 实际上共有58种 不同沙门菌可有相同的O抗原 故将有共同O抗原沙门菌归一群 组 共可分40多组 引起人类疾病的沙门菌 其O抗原大多属于A E组 P125表9 4 2001 02 6 伤寒 副伤寒甲 副伤寒乙沙门菌O抗原中均有共同组分12 因此为共同抗原 O抗原化学本质为细胞壁中脂多糖 产生早 消退早 早期诊断 共同抗原刺激产生 无特异性 不易产生非特异性回忆反应 O抗原刺激机体产生抗体 IgM 特点 2001 02 7 2 沙门菌 H 抗原 不耐热鞭毛抗原H抗原分为第1相 第2相第1相特异性高 以英文小写字母表示第2相特异性较低 以阿拉伯数字表示各组沙门菌可依H抗原不同分种 型 H抗原为特异性抗原 H抗原化学本质为蛋白质 不耐热 2001 02 8 出现较晚 维持时间较长 特异性强 易受非特异性刺激产生回忆反应 H抗原刺激机体产生抗体 IgG 特点 2001 02 9 3 沙门菌 Vi 抗原 表面抗原少数沙门菌 伤寒杆菌等 新从病人体内分离标本常有表面抗原Vi virulence毒力Vi抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集 在细菌鉴定中应予注意 Vi抗原可刺激机体产生低效价抗体 随细菌清除 此抗体消失 故测定Vi抗体有利于检出带菌者 2001 02 10 二 致病性 1 侵袭力沙门菌侵袭力较强 经口感染穿过小肠粘膜上皮细胞上皮下淋巴组织被吞噬具抗吞噬作用 可在吞噬细胞内增殖 不完全吞噬 致病物质 2001 02 11 目前证明 沙门菌侵袭细胞的能力与染色体中某些基因位点有关沙门菌侵入细胞及在细胞内存活对细菌的全身扩散及局部炎症形成均十分重要 Vi抗原存在于O抗原表面 可保护O抗原免受相应抗体及体内其它免疫因素作用 是伤寒沙门菌重要侵袭力 2001 02 12 2 内毒素导致体温升高 白细胞数变化等 3 肠毒素个别沙门菌可产生肠毒素 鼠伤寒 作用与大肠杆菌 霍乱弧菌肠毒素相似 引起胃肠炎 2001 02 13 由伤寒沙门菌 副伤寒甲 乙等沙门菌引起 肠道传染病传染病传播三环节传染源病人 带菌者 尤为重要 传播途径经粪 口途径传播易感者人群普遍易感 所致疾病 1 肠热症 2001 02 14 血流 菌血症 内毒素 全身淋巴组织中大量增殖 肝 脾 肠系膜 伤寒 副伤寒沙门菌 肠粘膜局部淋巴组织中增殖 局部炎症 症状 加重局部炎症溃疡 穿孔 全身症状发热 不适 全身疼痛 加重局部炎症溃疡 穿孔 加重局部炎症溃疡 穿孔 2001 02 15 临床表现 消化道症状 肠粘膜局部炎症 水肿全身表现 中毒症状 持续性高热 相对缓脉 肝脾肿大 皮疹 由内毒素血症 二次菌血症引起肝 胆损伤 细菌在组织中繁殖后 经胆囊进入肠道迟发性变态反应加重肠道病变 严重者致坏死 溃疡 肠穿孔 2001 02 16 整个病期约一个月左右 少数患者病后带菌 肠道内 胆囊带菌 成为重要的传染源 感染后体内有抗体产生 但对胞内菌无免疫作用 常用抗体测定作为伤寒病的辅助诊断 肥达反应 细胞免疫逐渐增强 细胞内细菌被清除 逐步痊愈 病后免疫以细胞免疫为主 终身免疫 2001 02 17 由其它沙门菌污染食物后引起潜伏期6 12小时主要表现恶心 呕吐 腹痛 腹泻 发热持续3 5天 2 胃肠炎 食物中毒 多见小儿及免疫功能低下者病原菌为其它沙门菌 猪霍乱 鼠伤寒等 可致全身感染 败血症 脑膜炎 骨髓炎 心内膜炎等 局部胃肠炎少见 3 败血症 2001 02 18 三 微生物学检查 标本伤寒病人按病程不同取不同标本 第一周血 第二周尿 粪便 病程全程骨髓 食物中毒者取排泄物 呕吐物 可疑食物 败血症患者取血液 细菌的分离鉴定 2001 02 19 细菌分离鉴定步骤 粪便 尿 增菌培养 SS中国兰 挑取不发酵乳糖菌落 血清学鉴定 直接玻片凝集 伤寒杆菌表现葡萄糖 乳糖 动力 H2S 双糖管 2001 02 20 用已知的伤寒杆菌 O H 抗原及副伤寒甲 乙的 H 抗原与不同稀释度的病人血清作试管凝集试验 根据血清中抗体效价及动态变化 可作为伤寒 副伤寒病人的辅助诊断试验 血清学试验 肥达反应 Widaltest 概念 2001 02 21 肥达反应操作示意图 稀释病人血清 病人血清作倍倍稀释1 20 第9管 共四排 分别加等量抗原 各排中分别加入伤寒O H 副甲H 副乙H菌液 观察结果 判断效价 出现明显凝集的血清最高稀释度 2001 02 22 1 正常效价O抗体 1 80H抗体 1 1602 病程中动态观察二份血清 第二次效价增长四倍以上有意义3 O H抗体的区别O Ab IgM 特点 H Ab IgG 特点 分析肥达反应结果 2001 02 23 O H均增高 伤寒 副伤寒可能性大 O H均不增高 伤寒 副伤寒可能性小 O增高 H不增高 感染早期 其它沙门菌感染 O不增高 H增高 预防接种后 非特异性回忆反应4 抗体始终不升高的可能因素早期使用抗生素 免疫功能低下等 2001 02 24 伤寒病人微生物检查阳性率 系列1 尿液中细菌培养 系列2 血液中细菌培养 系列3 粪便中细菌培养 系列4 肥达反应抗体效价 阳性率 病程 发病后周次 2001 02 25 细菌培养 按前面步骤进行 Vi抗体效价测定Vi抗体 1 10有意义 四 防治原则 预防接种 死菌苗 活菌苗 Ty21a株 彻底治疗病人及带菌者 注意饮食卫生 防止病从口入 伤寒带菌者检查 2001 02 26 变形杆菌属 简述 变形杆菌属肠杆菌科有周身鞭毛 运动活泼 培养基中迁徒生长能分解尿素 重要特征 主要引起各种创伤感染 尿路感染等 变形杆菌的迁徒生长现象 2001 02 27 变形杆菌某些菌株的菌体抗原 与部分立克次体间有共同抗原成分 因此可用变形杆菌作为抗原与立克次体感染者血清做交叉凝集反应 称外裴试验 Weil Felixtest 辅助诊断斑疹伤寒等疾病 外裴试验 2001 02 28 霍乱弧菌 弧菌属 Vibrio 为一大群菌体弯曲呈弧状的革兰阴性菌主要特点 有单鞭毛 运动活泼培养要求为碱性环境自然界广泛分布分类 O 1群霍乱弧菌 不典型O 1群霍乱弧菌 非O 1群霍乱弧菌 其它弧菌 副溶血弧菌等 2001 02 29 霍乱弧菌 Vibrio choleraV cholera 引起疾病 霍乱烈性传染病流行情况1817 1923年六次大流行 均从印度恒河三角洲发源地 1937 1958年四次小流行 印度尼西亚 1961年第七次大流行1992年亚洲流行 印度 盂加拉 泰国 霍乱弧菌 2001 02 30 霍乱弧菌病原菌的发现与命名 霍乱弧菌古典型的发现与命名 1854年首次发现 1884年分离成功 KochElTor弧菌的发现与命名 1905年在埃及EITor检疫所检出 当时未发现与霍乱发病产关系 1961年确定为霍乱病原菌 命名为ElTor型霍乱弧菌以上二型现均属于O1群霍乱弧菌O139群霍乱弧菌 第七次大流行中发现目前世界卫生组织规定 霍乱病原菌包括O1群霍乱弧菌与O139群霍乱弧菌 2001 02 31 一 生物学性状 形态与染色G 弧形 有单鞭毛 运动十分活泼 鱼群样穿梭运动 细菌有普通菌毛与性菌毛 霍乱弧菌扫描电镜 15000 2001 02 32 培养特性营养要求不高 在自然界中生存能力较强 耐碱怕酸 常用培养基为pH8 8 9 0碱性蛋白胨水 碱性琼脂平板生化反应氧化酶试验 触酶试验 硝酸盐还原试验 2001 02 33 抗原构造与分型霍乱弧菌具有O抗原 H抗原 H抗原无特异性 O抗原目前发现的已有200多个血清型O 1群含有二种生物型古典生物型ElTor型二种生物型均可引起霍乱流行 O139群1992年在印度 盂加拉国暴发霍乱流行 2001 02 34 二 致病性 致病物质1 侵袭力鞭毛 穿透能力强 穿过肠道粘液层 有利于细菌粘附于肠壁上皮细胞 菌毛 定居因子 是细菌定居于小肠粘膜上皮细胞的重要因素 粘液素酶 毒力强的菌株产生 分解肠粘膜上粘液层 有助于细菌穿过粘液层 2 霍乱肠毒素 2001 02 35 霍乱肠毒素化学结构与致病机理霍乱弧菌肠毒素与大肠杆菌LT有80 同源性 腺苷环化酶 ATP cAMP H2OCI Na 大量分泌 腹泻 腹泻 腹泻 2001 02 36 2 疾病与流行霍乱为烈性肠道传染病经口传播 人类为唯一易感者 霍乱弧菌对酸敏感 正常胃酸可杀死细菌 霍乱弧菌肠毒素作用后 引起剧烈腹泻 呕吐 典型病例大便为米泔水样 病人可严重脱水 酸中毒 最终因循环衰竭 死亡 未经治疗者死亡率高达50 75 2001 02 37 三 微生物学检查 霍乱为烈性传染病 传播速度极快 对首例病例要及时诊断 封锁疫区 上报疫情 一般根据病情诊断 必要时将可疑物密封保存于碱性蛋白胨水 送上级检疫部门 直接镜检 动力 分离培养 碱性培养基 快速诊断 免疫荧光 血清学鉴定 检查步骤 2001 02 38 副溶血弧菌 副溶血弧菌 原名 嗜盐弧菌 主要引起疾病 食物中毒特点 细菌嗜盐 易污染海产品 在海水中可存活50天 培养要求3 5 氯化钠潜伏期短 几小时即可发病 症状严重 可有水样 血水样便 恢复较快 2001