蛋白酶k实验检测报告.doc

重组蛋白酶K质量检测报告实验检测报告一 ：蛋白酶k消化荧光素酶 实验原理：荧光素酶在荧光素和ATP等物质存在的条件下可以发出荧光，当荧光素和ATP都过量时，发光强度与荧光素酶的活性有关，用绿邦产的ATP检测仪可测其发光度RLU，蛋白酶K消化荧光素酶后其活性降低，相应的RLU会降低，因此可以根据发光度比较蛋白酶K的活性。实验目的：通过不同品牌的蛋白酶K消化荧光素酶，对两种蛋白酶K的活性做出比较。实验方法：取10个1.5ml的离心管分为两组，一组为绿邦的重组蛋白酶K，另一组为Sigma公司的蛋白酶K，均加入400ul的荧光素酶，再分别向两组加入1/ml的蛋白酶10ul，20 ul， 30 ul， 40 ul， 50 ul，置于室温15min后用ATP荧光检测仪测RLU，结果如下：K（RLU）SK（RLU）10 ul304121620 ul458630 ul293140 ul101550 ul010注：不加酶K 测该荧光素酶RLU为9999做出折线图如下：结果分析：荧光素酶在不加蛋白酶K的情况下，用ATP检测仪测得的RLU为9999，加入绿邦的酶K后为304，加入Sigma公司的酶K为1216，同样的体积同样的荧光素酶，在其他条件都相同的情况下，绿邦的酶K消化后的RLU下降值比Sigma的大，说明绿邦产的酶K活性较好。实验检测报告二 ：蛋白酶K消化酪蛋白实验原理：酪蛋白在A280与A650有紫外吸收峰，由分光光度计测吸光值可检测酪蛋白被酶消化的量，进而比较两种不同品牌蛋白酶K的活性。实验方法：配制10ml的酪蛋白溶液 将绿邦公司的蛋白酶K和Sigma公司的蛋白酶K配成1.5ml用于检检测实验：取十个1.5 ml的离心管分为两组，一组为绿邦的酶K（zk），一组为Sigma公司的酶K（sk），分别向离心管中加入以下试剂： 800ul酪蛋白+100ul K+250ul水 800ul酪蛋白+150ul K+200ul水 800ul酪蛋白+200ul K+150ul水 800ul酪蛋白+250ul K+100ul水 800ul酪蛋白+300ul K+50ul水室温条件下，吸混匀后的混合液稀释10倍测OD650，结果如下：0 min(A650)40min(A650)80 min(A650)100ul zk0.0660.0380.026100ul sk0.0720.040.032150ul zk0.0600.0340.025150ul sk0.0560.0310.035200ul zk0.0320.0270.025200ul sk0.0350.0300.025250ul zk0.0240.0200.016250ul sk0.0270.0250.020300ul zk0.0230.0180.016300ul sk0.0230.0200.0185.室温条件下，吸混匀后的混合液稀释10倍测OD280，结果如下：0 min(A280)40min(A280)80 min(A280)100ul zk1.2450.7360.556100ul sk1.1250.7270.667150ul zk1.0820.6250.480150ul sk0.9340.6120.482200ul zk0.7120.5430.347200ul sk0.7340.5230.352250ul zk0.6470.4820.346250ul sk0.6520.5000.384300ul zk0.6210.4350.302300ul sk0.5980.4120.314通过A280与A650紫外吸收值的不同时间变化比较，发现绿邦的蛋