七 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性.pptVIP

实验七金氏法测定血清谷丙转氨酶活性 3 了解测定血清谷丙转氨酶活性的临床意义 1 掌握金氏法测定血清谷丙转氨酶活性的原理 2 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定具体操作方法 将 氨基酸的氨基通过酶促作用转移到 酮基上 生成相应的酮酸与氨基酸的反应 催化这一反应的酶称为转氨酶 转氨作用 也称氨基转移酶 是一组催化氨基在 氨基酸与 酮酸之间转移的酶 是一种细胞内酶 当细胞膜通透性增加或细胞死亡时释放到血液中 转氨酶 转氨酶广泛存在于机体的各种组织中 在肝 心 肾等组织中 谷丙转氨酶 GPT 和谷草转氨酶 GOT 的活性均较高 在正常的新陈代谢过程中 血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性 即正常值 转氨作用的机制 体内主要两种转氨酶 谷丙转氨酶 GPT 又称丙氨酸转氨酶 ALT 谷草转氨酶 GOT 又称天冬氨酸转氨酶 AST 肝脏 心脏 谷丙转氨酶 催化谷氨酸和丙氨酸之间的转化的转氨酶 其结构式反应如下 血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义 谷丙转氨酶广泛存在于机体各组织中 正常人血清中此酶浓度活性很低 肝细胞中该酶浓度活性极高 当肝细胞受损时此酶从细胞中释放血 因此测定血清ALT活性对于某些疾病的诊断和预后判断具有重要的参考价值 1 血清ALT活性增高 肝胆疾病 药物和毒物 2 ALT活性降低 磷酸吡哆醛缺乏症 ALT在临床上主要用于肝脏疾病的诊断 酶活性 是指在规定条件下 单位时间内底物的减少量或产物的生成量 即酶反应速度 酶活性的影响因素 样品处理 测定条件 溶血 抗凝剂 存放时间 温度 pH 时间 底物浓度 酶浓度 常用的谷丙转氨酶酶活性测定方法有 1金氏法 King法 2赖氏法 Mohun法 3改良穆氏法 Reitman Frankel法 共同点 原理 试剂 操作步骤和作用时间相似 不同点 在于单位定义和标准曲线绘制方法不同 因此测定结果的单位数值不同 在37 1ml血清与底物作用60min 生成1 mol丙酮酸为1个活性单位 第一步反应 2020 3 15 13 可编辑 第二步反应 520nm CH3 丙酮酸 2标准曲线的制备 1测定酶活性 1测定酶活性 取试管2支 按下表3 13操作 表3 13 2标准曲线的制备 取6支试管 编号 按下表3 12步骤操作 表3 12 表2丙酮酸标准曲线的绘制 表1金氏法测定血清谷丙转氨酶活性 原始数据记录 1标准曲线图绘制 1 用坐标纸绘制标准曲线 2 标明操作人 时间 仪器型号和图表名称 1 标准曲线图绘制 1 标准曲线要过原点2 注明标准曲线名称 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性3 注明横纵坐标的名称及单位4 注明分光光度计型号 2血清谷丙转氨酶 ALT 活性的计算 1 将测定管吸光度值代入求出相应的丙酮酸含量 mol 2 根据丙酮酸含量计算每毫升血清中ALT活性单位数ALT活性单位数 生成丙酮酸的量 10 在37 1ml血清与底物作用60min 生成1 mol丙酮酸为1个活性单位 1 加样的时候平行加样 减少操作误差 使得结果更加精确 2 标准丙酮酸溶液的加样一定要准确 减小实验结果误差 3 酶的活力测定与温度 时间影