应用生化论文——酵母RNA的提取.doc

酵母RNA的提取摘要 采用稀碱法提取三种不同品牌，不同生产日期的的干酵母粉，通过颜色反应，沉淀物的生产程度进行对比，得出三种不同品牌、不同生产日期的干酵母粉所含的酵母RNA含量不同，得出丹宝利与安琪品牌的干酵母粉RNA含量大大超过实验室中生产日期为2009年的丹宝利品牌，可知酵母粉的存活时间不能无限延长，且酵母生产与水分含量有关，保留年份越久，水分损失越厉害，酵母存活数越少，所提取到的RNA含量越少。关键词 酵母RNA 提取 RNA含量 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。用碱液提取的RNA有不同程度的降解。通过掌握酵母RNA的提取，从而对比三种不同来源，不同生产日期的干酵母粉的检验反应，得出酵母RNA含量的差别。一、实验用具与试剂实验器材本实验采用不同品牌干酵母 （安琪干酵母 丹宝利干酵母 实验室干酵母），并在pH试纸（pH1-14）、电子天平、水浴锅、离心机4000r/min、烧杯100ml3、量筒50ml1 10ml1漏斗、吸管0.5ml1 1ml1 2ml1等辅助实验器材下进行。实验试剂0.2%氢氧化钠溶液：2gNaOH溶于蒸馏水并稀释至1000ml，乙酸、95%乙醇、无水乙醚、氨水、10%硫酸溶液：浓硫酸10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml、5%硝酸银溶液：5gAgNO3溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中苔黑酚-三氯化铁试剂：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3 6H2O。二、实验步骤RNA的提取称取三种品牌的干酵母各5g于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH5-6）离心15min（4000r/min）。取上清液，加入两倍体积的95%乙醇，边加边搅。加毕，静置，待完全沉淀，过滤。滤渣先用95%乙醇洗2次（每次约10ml），继而用无水乙醇洗两次（每次10ml）,洗涤时可用玻璃棒小心搅动沉淀。乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可作鉴定和测量含量用。经离心后，三种不同酵母粉的形状各俱不同分散度，具体见图1。 图1鉴定取上述RNA约0.5g，加入10%硫酸液5ml，加热至沸1-2min，将RNA水解。取水解液0.5ml，加苔黑酚-三氯化铁试剂1ml，加热至沸1min，观察颜色变化。水解液2ml，加氨水2ml及5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状的嘌呤银化合物。三、实验结果加入苔黑酚-三氯化铁试剂后，三支试管中均有不同程度的变黄绿色。（如图2）加入硝酸银溶液后，约20分钟后，三支试管才陆续有不同程度的混浊产生，但混浊量都极少。（如图3） 图2图3具体结果见下表：酵母品牌现象鉴定方法丹宝利酵母粉安琪酵母粉实验室酵母粉方法1（加苔黑酚-三氯化铁试剂）颜色改变程度深黄绿色深黄色浅黄色方法2加入（氨水及硝酸银溶液）沉淀生成量+四、实验结果分析实验结果原因分析在实验中，丹宝利和安琪酵母鉴定结果较好，颜色改变及沉淀都相对明显，而实验室的酵母结果不如前者，且在离心的过程中沉淀渣颜色都比其他要深（如下图）。在实验过程中我小组成员发现实验室中的酵母的超过了保质期，其生产日期为2009年。在学习微生物知识中，我们得知，微生物生产需要一定的水分和营养物质，干酵母粉之所以能用于发酵，是干酵母粉中的酵母菌的微生物发酵作用，而酵母菌能在包装中生产，是在干酵母粉中还有一定的水分，干酵母粉含有一定的营养物质，能基本保证酵母菌的存活。而酵母RNA的含量，又与菌体的存活度大大相关。实验误差分析本次实验，所提取到的酵母RNA含量总体较低。原因可能在于几下几点：离心过程中，转速为4000r/min，离心10min，在几次离心过程中，都是同样的转速与时间，在此过程中，可能导致离心时间不够，至此，导致离心结果所得酵母RNA量较少。在实验过程中，在乙醇、乙醚洗涤时，实验指导建议采用过滤洗涤，而本实验中，由于过滤漏斗与漏斗夹数量不够。实验小组采用离心代替过滤，酵母RNA属于酶类，酶在温度高时，易变性失活，在离心过程中，由于离心力的热量，可能使部分酶变性失活。本实验小组创新之处在于，能发现实验室中所存放的酵母粉与本实验小组购买的干酵母粉的年份与品牌不同，在完成实验的基本要求基础上，还进行对比实验，从而得出酵母菌的生长与水分的获取及营养物质密切