微生物鉴别试验计划.doc

配制试剂：1 吲哚试剂（23mL）对二甲基安基苯甲醛 0.2g 95%乙醇 19mL 浓盐酸4mL2. V.P试剂（20mL） -苯酚 0.5g KOH 4g 无水乙醇10mL 蒸馏水10 mL3. 甲基红试剂（20mL） 甲基红 0.08g 95%乙醇12mL 蒸馏水8 mL4.1.6%溴甲酚紫乙醇溶液（10mL） 溴甲酚紫0.16g 95%乙醇10mL5. 1%溴香草酚蓝乙醇溶液 (10 mL) 溴香草酚蓝0.004g 95%乙醇10mL6.1molLNaOH和1molLHCl溶液7.结晶紫染液、卢龙氏碘液、番红染液配制培养基：1. 蛋白胨培养基（120mL）蛋白胨 1.2g NaCl 0.6g 蒸馏水120mL pH 7.6其中100mL用于糖发酵，另20mL分装两试管中（各10mL），121。C灭菌20min，用于吲哚试验。2. 糖发酵培养基（100mL） 蛋白胨培养基 100 mL 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1 mL 葡萄糖、乳糖、蔗糖20%溶液各5 mL（葡萄糖、乳糖、蔗糖各1g,蒸馏水15 mL） 制法：将上述含指示剂的蛋白胨水培养基分装于9支试管中，每管中放一倒置的杜氏小管，是充满培养液将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水121。C灭菌20min，糖溶液121。C灭菌20min 每管无菌操作分别加入20%的无菌糖溶液0.5mL，配成1%浓度。3. 葡萄糖蛋白胨水培养基（50mL）蛋白胨0.25g 葡萄糖0.25g K2HPO4 0.1g 蒸馏水50mL pH 7.07.2过滤后，分装四试管中（各10mL），121。C灭菌30min，用于甲基红试验和V.P试验。4. 柠檬酸盐培养基（30mL）NH4H2PO4 0.03g K2HPO4 0.03g NaCl 0.15g MgSO4 0.006g 柠檬酸钠 0.06g 琼脂 0.4-0.6g 蒸馏水 30mL1%溴香草酚蓝乙醇溶液0.3mL 将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤，制成后为黄绿色，分装两试管中（各10mL），121。C灭菌20min后制成斜面。5. H2S试验用培养基（30mL）蛋白胨 0.6g NaCl 0.3g 柠檬酸铁铵0.015g 硫代硫酸钠 0.03g琼脂 0.45g 蒸馏水 30mL 将上述各成分加热溶解后，调pH7.2，分装两试管中（各10mL），121。C灭菌20min不搁斜面。6. LB培养基（200mL） 蛋白胨 2g 酵母膏1g NaCl 2g 蒸馏水200mL pH 7.0 其中40mL、40mL、30mL、30mL分装到三角瓶中，在分装到6支试管中（每支5mL），121。C灭菌20min 7. LB培养基（400mL）蛋白胨 4g 酵母膏2g NaCl 4g 蒸馏水400mL pH 7.0 pH测试分装20支，每支10mL, 分装后调相应pH后121。C灭菌20min再测pH； 温度测试分装16支，每支10mL；121。C灭菌20min8.牛肉膏蛋白胨培养基（150ml）牛肉膏0.45g 蛋白胨1.5g NaCL 0.75g 琼脂1.53g 蒸馏水150ml pH7.07.2 121。C灭菌20min 50。C左右倾入无菌培养皿中（1520ml）仪器和工具：1. 电子天平 恒温震荡培养箱 分光光度计 灭菌锅 酒精灯 三脚架 无菌操作台2. 5mL无菌吸管4支 移液枪3. 大烧杯（100mL）一个 小烧杯（50mL）一个 三角瓶（250mL）2支4. 大试管（50mL）36支 小试管（20mL）3支 培养皿8个5. 杜氏小管9支6. 显微镜、电子显微镜、载玻片、香柏油7. 接种环2把、接种针2把 玻璃涂棒2把8. 标签纸药品和试剂：1. 对二甲基安基苯甲醛0.2g2. -苯酚 0.5g3. 甲基红 0.08g4. 溴甲酚紫 0.16g5. 溴香草酚蓝 0.004g 试剂用药品6. KOH 4g7. 浓盐酸 4mL8. 无水乙醇 10mL9. 95%乙醇 80mL10. 生理盐水 11. 结晶紫染液 12. 卢龙氏碘液 革兰氏染色用试剂13. 番红染液 14. 无菌水 15. 蛋白胨 7.85g16. NaCl 6.82g17. 葡萄糖 1.25g18. 乳糖、蔗糖各 1g19. NH4H2PO4 0.02g 20. K2HPO4 0.12g 培养基用药品 21. MgSO4 0.004g 22. 柠檬酸铁铵 0.01g 23. 硫代硫酸钠 0.012g 24. 琼脂 2g 25. 酵母膏 3g 26. 蒸馏水 1000mL27. 1mol/L HCL 1mol/L NaCL实验计划第一天 配制培养基（7种，除7外），分装、灭菌配制试剂（5种）；晚8点扩增菌株6份。第二天 早8点接种(用什么培养基)扩增后的菌株，用于测012h（怎么测）的生长情况；同时，早8点扩增两种菌株，用于晚上实验；晚8点接种扩增后的菌株，用于测1420h的生长情况；中间时间接种菌株于生理生化试验所用培养基很多歌培养基先配好中，记录接种时间；扩增菌株2份。第三天 早8点测OD值，得出生长曲线；观察24h后生化试验结果；配制培养基7号，分装，