实验动物的基本技术和方法ppt.ppt

第八章动物实验基本技术及方法 第一节动物实验前的准备第二节实验动物的分组和标记第三节实验动物的抓取与固定第四节实验动物麻醉方法第五节实验动物的给药 采血方法 第一节动物实验前的准备 动物实验前要进行一系列的准备工作 包括理论准备 条件准备 预备实验 理论准备主要指了解动物实验的基础理论知识 选题立项和设定假设 研究计划和方案的制定 实验方法及实验动物的选择 参考文献的查阅等 条件准备指仪器设备的备置和校准 药品的配制 器械的准备 实验动物的购入 实验场所消毒与器具配套等 预备实验是正式实验的预演 动物实验前的理论准备 有关理论知识的学习查找有关动物实验的基础知识常用实验动物的生物学特点及其应用实验动物的选择原则 动物实验前的条件准备 动物饲养室 动物实验室及饲养器具的准备应检查动物笼器具的数量 饲养室卫生及消毒情况 环境控制 理化因素 居住因素 营养因素 生物因素 动物实验室及相关设施 动物实验设施是指以研究 试验 教学 生物制品和药品生产等为目的 进行实验动物饲养 试验的建筑物 设备以及运营管理在内的总和 包括 一般动物实验环境设施 特殊动物实验设施 实验仪器设备 用于一般动物实验的环境根据对饲养动物的微生物控制程度和空气净化程度 分为 普通环境 Conventionalcondition 普通级动物实验屏障环境 BarrierCondition SPF级动物实验隔离环境 Isolationcondition 悉生和无菌动物实验 一 普通动物实验观察室环境设施条件要求1 环境特点 普通环境设施符合动物饲养的基本要求 不能完全控制传染因子 没有进行严格的环境控制和微生物控制 但也应达到普通动物环境条件的基本要求 普通环境室内空气与外界直接相通 适用于普通动物实验的饲养观察2 饲养观察室内需要的基本设备 二 清洁动物实验观察室环境设施条件要求1 清洁级动物实验要求饲养在温湿度恒定的 半 屏障系统中 其特点是 与外界隔离 有缓冲间 物品经灭菌处理后进入屏障系统中 实验人员进出要严格按屏障系统操作规程操作2 屏障系统饲养观察室内的基本设备必需设备 超净工作台 三 SPF级以上动物实验观察室环境设施条件要求1 SPF级以上的动物观察饲养在屏障系统或隔离系统中其特点是 空气 饲料 水 垫料和实验器具均应无菌 实验人员要严格按隔离系统操作规程操作 2 隔离环境观察室内的基本设备必需设备 超净工作台 空气层流架的操作规程 使用前 清洁层流架的内环境 消毒 灭菌 进入层流架的一切物品必须经过灭菌处理 打开层流架门之前 应加大层流架内的送风量 以避免架内环境污染 实验操作时 须在超净工作台内进行 IVC系统的操作规程 1 IVC系统的安装和消毒2 IVC系统上的动物饲养盒必须在超净工作台内打开 无菌操作 3 实验完毕 动物饲养盒必须在超净工作台内盖好上盖后 方能离开超净工作台 放在IVC系统上 4 检查进气孔和排气孔是否成功对接 二 实验药品 试剂的准备 三 实验器械的准备实验器械准备得充分 适当 有助于实验的顺利完成 不同类型 部位的实验使用的实验器械种类 数量不尽一致 实验器械包括完成实验所需要的检测仪器 实验时动物的固定器械 动物外科手术器械 一 常用动物外科手术器械 二 手术器械的消毒手术器械常用的消毒方法有 煮沸灭菌法 高压蒸气灭菌法和化学药品灭菌法 三 敷料 手术巾 手术衣 帽 口罩的消毒 四 手术人员的准备为了保证无菌手术的进行 手术人员应作一系列的无菌的准备 虽然实验动物有不同的微生物控制等级 但手术人员不管做什么等级动物的手术 都应该遵循无菌手术的基本原则 因此手术人员在术前应作下列准备 一 手术所需人数 二 更衣 三 手 臂的清洁和消毒 特殊实验动物设施包括三类 感染 生物危害 实验设施 化学污染动物实验设施 放射性污染设施 生物危害特殊动物实验设施是指用病原体对动物进行实验感染的一种特殊屏障设施 目前 国内外根据病原微生物对人和动物的危害程度把感染动物实验设施分 BSL1 P1 BSL2 P2 BSL3 P3 BSL4 P4 级 动物设施的防护水平 实验操作和安全设备汇总危险度等级防护水平实验操作和安全设备1级ABSL 1限制出入 穿戴防护服和手套2级ABSL 2ABSL 1的操作加 危险警告标志 可产生气溶胶的操作应使用 级或 级BSC 废物和饲养笼舍在清洗前先清除污染 3级ABSL 3ABSL 2的操作加 准入控制 所有操作均在BSC内进行 并穿着特殊防护服 4级ABSL 4ABSL 3的操作加 严格限制出入 进入前更衣 配备 级BSC或正压服所有废物在清除设施前需先清除污染 ABSL 动物生物安全水平 BSC 生物安全柜 动物的引进 在动物实验的各项准备工作中 动物的引进是一个重要的环节 在引进动物前 应确定引进动物的种类 品系 规格 数量及动物微生物控制等级等 引进动物前 应检查各项准备工作是否就绪 如饲养动物的器具 器材是否准备好 饲养室的卫生和消毒情况 此外 还应检查动物的笼卡 实验记录本 垫料 饲料 秤等实验必须品是否准备好 购入动物时应注意以下几个方面的问题 1 购买动物时应向供应部门索取动物的相关资料 如动物的遗传背景和微生物资料 动物质量合格证 以及动物品系 年龄 体重 胎次等 2 购买动物时应仔细观察动物的状态 对动物进行外观的健康检查 皮毛是否有光泽 眼有没有眼屎 四肢有无肿胀溃烂 肛门周围有无脏物等 同时要核对动物的数量等是否符合实验要求 3 根据试验观察时间长短的需要 同时购入或领取相应数量的饲料和垫料 动物的运输 若是从外地购入动物购入动物时 无论运输距离的远近 都应考虑运输环境的温度 湿度 饮食以及途中污染和窒息死亡等问题 需若是购入或领取清洁级以上的实验动物 应注意运输工具 应采取带有空气过滤膜的无菌运输罐或带过滤帽的笼盒运输 严格检查其密封状况 新购进的动物最好不要立刻进行动物实验 应将动物雌雄分开 并分笼在隔离区饲养一段时间 以便动物得以恢复体能并适应新的环境 第二节实验动物的分组和标记 在实验前对动物进行随机分组和编号标记 分组方法随机化分组方法单纯随机抽样均衡随机抽样随机化方法抽签法 用带数字的卡片 如纸牌 随机抽取 若分两组 可用奇偶数为代表 若分四组 可用4种花色为代表随机分组 抽卡片法随机分组 动物编号随机分组123456789101112131415抽卡数字8647101377621142129除以3的余数201112110221200初步分组cabbbcbbaccbcaa表中b组为6只 a组为4只 需再调整 再重新抽一卡片 将其数字除以6得余数为几即挑第几只放入第三组 随机数字表法 基本同上 动物的标记 良好的标记方法应保证号码清楚 简便易认 耐久适用 对动物无毒性 操作简便且长时间能够识别 染色法 大 小鼠 豚鼠常用3 5 5 苦味酸溶液涂成黄色 兔 猫 犬用2 硝酸银溶液涂成咖啡色 烙印法 大 中型动物针刺法 兔号牌法 犬 猴 猫等大动物穿耳孔法 耳缘剪孔 小鼠断趾编号 小鼠剪尾编号 大 小鼠 仅限与两组动物区分被毛剪号 大动物笼子标号 小鼠的标记 动物的管理 经常性管理 保证动物正常饲养所必须的一切条件 每天观察动物的状态并认真做好记录 搞好动物的饮食卫生 每日添加新鲜的饲料和饮水 每周更换两次干净的垫料 做好常规消毒工作 防止动物的非正常死亡或意外损伤 特殊管理 在给动物施加一定的实验因素时 如麻醉 手术等 要对动物进行特殊管理 三分治 七分养 对动物也一样 防止动物窒息 控制伤口感染 消毒实验环境 麻醉过程中实施保温等措施在不同的情况下都需要进行 动物的性别判定 判断方法根据动物的生殖器与肛门之间的距离远近进行判断 距离长的是雄性 短的为雌性 小鼠的性别判定 第三节实验动物的抓取与固定 注意自我防护动物在保定过程中如果逃逸 要及时抓捕 避免损伤动物 小鼠的抓取与固定 手固定 灌胃 腹腔给药 取血等固定器固定 静脉给药 尾静脉取血固定板固定 外科手术等 小鼠的抓取 小鼠的固定 大鼠的固定 家兔的抓取与固定 手固定固定器固定手术固定台固定 兔的抓取 兔的固定 豚鼠的抓取与固定 豚鼠的抓取 犬的抓取与固定 犬的捉拿保定方法较多 未经训练和调教的犬性情凶恶 为防止在保定时被其咬伤 应对其头部进行保定 捉拿犬时可用铁钳固定犬的颈部 用长一米左右的绷带 打一个猪蹄扣套在鼻面部 使绷带两端位于下颌处并向后引至颈部打结固定 还有一种使用网口的方法也较简单 即用皮革 金属丝或棉麻制成的口网 套在犬口部 并将其附带结于耳后颈部防止脱落 如实验需要麻醉时 可麻醉后去除铁钳仰卧于 V 型犬实验台上 拉出犬舌 最好用一塑料棒闩于犬上下臼齿之间并用绷带固定好 拉出的犬舌上应放一块沾有生理盐水的纱布 以免损伤犬舌 头部和四肢的保定与兔相似 可根据具体实验条件而定 猕猴的抓取与固定 2020 3 17 47 可编辑 其它动物的抓取与固定 羊的固定 两栖类动物的抓取与固定 鸟类的抓取与固定 第四节实验动物麻醉方法 恰当的麻醉方法对保证动物试验的顺利进行和获得满意的试验结果有着非常重要的作用 有全身麻醉和局部麻醉 局麻仅适用大 小鼠 沙鼠 且对豚鼠和兔也很少使用 在这里就不述 全身麻醉分为药物麻醉和气体吸入麻醉两种 药物麻醉虽可以长时间保持深麻醉期 但如不精确的考虑动物的种类 品系 年龄 性别以及健康状况而给药 就会导致动物的死亡 吸入麻醉保持深麻醉期较短 还必须辅以其它辅助麻醉方法 比较繁杂 麻醉前的准备 在麻醉前几天要注意观察动物的采食情况 对猫 犬 猪或非人灵长类大动物 在麻醉前8 12h应禁食 以免麻醉或手术过程中发生呕吐 家兔和啮齿类动物无呕吐反射 术前无需禁食 动物在麻醉前给予一定量的饮水 大动物实验前要给予一定量的安定剂和阿脱品类药物 减轻动物的过度紧张和减少唾液分泌以利于气管插管操作 根据实验部位和种类 给予动物脱毛等 常用麻醉药物 全身麻醉药 乙醚戊巴比妥钠水合氯醛氯安酮局部麻醉剂 普鲁卡因 利多卡因 麻醉方法 全身麻醉 吸入麻醉腹腔或静脉麻醉局部麻醉 注意事项乙醚为易燃物品 要注意防火 准确计算麻醉剂量 避免麻醉过量致使动物中毒死亡 有些动物存在个体差异 应具体对待 注射时 一般要求缓慢 随时观察动物的反应 适可而止 当动物肌肉松弛 角膜反射消失 足爪紧张性下降时 应慢速或停止注射药物 麻醉时需注意保温 作慢性实验时 在寒冷季节 要将麻醉剂加温至动物体温水平 麻醉过量时应采取立即抢救措施 注意人员安全 实验动物的除毛方法 拔毛法 剪毛法 急性实验常用剃毛法 脱毛法 脱毛液8 硫化钠水溶液 第五节实验动物的给药 采血方法 实验动物的给药方法有 摄入法 用于消化道 注射法 涂布法 用于皮肤 吸入法 用于呼吸道 等 摄入法给药 自动口服给药 将药物放入饲料或饮水中使动物自由饮食 强制灌胃法 大小鼠 用灌胃针头直接灌入胃中 小鼠0 2 1ml 大鼠1 4ml 豚鼠1 5ml 犬 兔 猫 动物被固定后使用开口器固定在动物口中 再用灌胃管插入胃中 推入药液即可 实验过程中要注意别将灌胃管误入气管 小鼠胃内给药 家兔胃管给药 犬的胃管给药 猪的胃管给药 注射法给药 皮下注射 一般选择在动物的背部进行皮内注射 局部脱毛消毒后用结核菌素注射器注射肌肉注射 一般选择肌肉发达 无大血管的部位 多选臀部腹腔注射 静脉注射 大 小鼠常采用尾静脉注射豚鼠采用前肢皮下头静脉或后肢股静脉兔 耳缘静脉犬 前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉 小鼠尾静脉给药 小鼠尾静脉注射方法 小鼠皮下注射 小鼠腹腔注射 兔的静脉给药 其他给药途径 呼吸道给药 粉尘 气体 蒸汽或雾状药物 毒气等需要呼吸道给药 皮肤给药 外用药物 致敏试验 局部毒性等实验需进行皮肤给药 脑内给药 微生物学实验 动物实验中药物剂量的换算 动物实验所用的药物剂量一般按毫克 千克体重计算 若无相关资料 一般先用小鼠半数致死量的1 10 1 5进行尝试 也可参考其他动物或人的剂量用体表面积之比来换算 一般说来 动物的耐受性比人大 因此单位体重的用药量比人要大 可按以下比例换算 如人的用药量为1 小鼠 大鼠为25 50 兔 豚鼠15 20 猫 狗为5 10 动物的采血方法 根据采血量的不同应选择不同的采血方法 采血部位及采血量 实验动物的采血方法 采血方法 小鼠的取血 小鼠眼眶静脉丛取血方法 小鼠眼眶静脉丛取血方法 实验动物的处死方法 实验动物的安乐死是指在必需处死动物时 使动物在最短的时间内快速无痛苦的死亡 处死方法 颈椎脱臼 小动物过量麻醉空气栓塞急性大失血毒气吸入法 CO2 CO 乙醚等 小鼠颈椎脱臼处死法 动物实验报告或论文的写作方法 一 动物实验报告的基本格式与要求动物实验报告是对实验目的 内容 方法及实验结果的描述 是对实验的总结 评价材料 动物实验报告一般包括实验名称 实验目的 实验器材 实验步骤 实验结果和实验结论等 1 实验名称 能够明确表达实验的内容 使人一看就能明确实验内容2 实验目的 实验目的要直截了当地说明为什么要作此实验 解决什么问题 具有什么意义 3 实验器材 对实验用的所有仪器 材料的种类 名称 型号 规格 数量等介绍清楚 4 实验步骤 一般按实验时间顺序 说明实验的操作过程 是实验技术问题最集中的部分 可用序号列出每一步操作 也可作操作流程图 总之 实验步骤应表达详细 使他人能按表达重复实验过程 5 实验结果 实验结果是在实验过程产生的现象和数据的原始记录的基础上 经过科学加工而成的资料 在实验结束后 应对原始资料进行认真核对 系统分析 对数据进行科学的处理 形成的结果 正式写进实验报告中 6 实验结论 实验结论是是根据实验过程观察到的现象和测得的数据等感性材料进行理论上的分析 推理而产生的理性认识的客观表述 实验结论不是实验结果的简单重复 如果实验结果不能说明问题 就不能勉强下结论 二 动物实验论文的撰写及注意事项涉及动物实验的论文撰写 除了要按照其他实验性研究论文撰写的要求外 还有一定的特定要求 主要表现在对实验动物和动物实验方面的描述 描述是否规范一定程度上影响论文的质量 有关动物实验的描述 与实验动物或动物实验有关的学术论文中应记载和描述的主要内容有 标题中实验动物的种名描述要准确动物的品种 系 表述要正确 书写要完整动物的来源 遗传背景等详细资料要标明对动物的性别 年龄 体重表述要清楚 一致说明动物的饲养方式甚至饲料配方记录完整的饲养或实验环境指标标明实验动物许可证号 生产许可证 动物实验许可证 在文章中要说明麻醉剂的使用情况 施加的处理因素 动物的处死方式等