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文档简介
关于购置免疫定量分析仪 -心肌梗死/心力衰竭快速诊断仪可行性报告心血管内科心肌标志物的快速诊断和临床价值一、 床边诊断(poct)在心脏病诊断中重要性心血管疾病是目前危害人类健康的重要疾病之一,仅中国每年因该疾病入院病人在三百多万,死于该疾病的有五十多万人,而且每年在上升。因此,对心血管疾病的诊断、治疗和康复已成为一个引起全球性重视的话题。最近,一项临床研究:利用nt-probnp协助诊断充血性心力衰竭,判断病情的严重程度和预后,以及指导治疗已经取得了医学界的广泛关注。它被评为2002年国际医学十大新闻、2002年值得关注的十大临床医学成就之一。nt-probnp系心脏尤其是心室产生和分泌的一种心脏激素,它可在心室压力和容量负荷增加的时候反应性的释放。充血性心衰的病人,其血液中nt-probnp的值较正常人有显著的增加,有研究表明,其增高的幅度与疾病的严重性成正相关,即:随着nyha的分级递增,nt-probnp值也相应升高。 迄今,已有多篇相关的研究论文发表于新英格兰医学杂志(2002,347/3)、循环医学(2002,105,23-28)、美国心脏病学院杂志(2002,39/2,2002-2009)等权威杂志上。这些论文探讨了诸如nt-probnp在心衰急诊诊断的作用、快速nt-probnp检测用于区别充血性心衰或肺部疾患导致的呼吸困难的病人等问题,为心衰的诊断和评估开辟了一个崭新的领域!较之传统方法nt-probnp的定量检测能更加客观、准确和方便地协助医生,从而为心衰诊断和评估提供了有力的帮助!目前已有定量检测nt-probnp的仪器面市, 同时,诊断系统在另一心血管诊断领域-心肌损伤标志物检测方面也处于学术界的领先水平。上世纪70年代,who提出了诊断心梗的三个要素(1、临床表现2、心电图3、心肌酶)三项符合两项即可确诊。而随着医学科学的发展,因为临床表现、心电图的检测的敏感性和特异性不理想,当心肌蛋白标志物检测成为可能后,新的ami诊断标准呼之欲出。1999年7月,欧洲心脏病协会(esc)和美洲心脏病协会(acc)发起和组织了“心肌梗塞重定义意见统一会议”。会议形成了ami诊断的新的标准,并建议于2000年的4月后推行。在新的诊断标准中,心肌标准物检测放在了最重要的位置。急性、进展性、新近发生的mi患者诊断的前提是:心肌标志物(肌钙蛋白i或肌酸激酶同工酶ck-mb)典型的上升或下降。南京普朗公司生产的心肌快速诊断产品可以定量检测myo(肌红蛋白)、ck-mb(肌酸激酶同工酶)、ctni(肌钙蛋白i)三种心肌蛋白标志物。myo具有非常高的敏感度,在心梗的早期的诊断和心梗捕捉中具有无可替代的作用,ck-mb是心梗量化的重要指标,可辅助诊断心梗的程度和面积,cini具有无与伦比的特异性和灵敏度,是诊断ami的最重要指标。心肌损伤测试中三个项目均有不同的优势,联合检测能更加全面、准确的协助医生诊断病情。心脏病的诊断是整个心血管医学领域的“瓶颈”学科,只有在尽可能短的时间内诊断才能减少死亡。欧洲和美国心脏学会,在2007年就建议:检验部门对心肌标志物的检测从标本采集到报告结果应在1小时内完成。传统的检测方法虽然精细,但是耗时太长,一般的从标本采集到出结果,需要1-2小时左右,而急性心肌梗死病人可能会在1小时死亡,容易延误抢救机会。床边诊断,又称poct技术的应用,大大的改善了传统的诊断速度和方法,它直接检测心脏标志物,较传统方法更为准确,poct技术能够在二十分钟内出具报告结果,又更具时效性。二、 普朗fia8000定量分析仪的特点和应用 由普朗医疗研发的fia8000型定量分析仪,是一款专门用于心脏标志物检测的仪器,也是国内自主研发的首款用于诊断该类标志物检测的设备,它具有以下特点:1、按国际标准控制质量,产品稳定可靠。2、便携、体积小、操作简单、样本量少、随时可以检测。3、10-20分钟快速出结果,提高效率,为病人争取更多时间。4、自动测试,可以储存10000多个病历,可自动打印,也可以和医院系统连接。5、一机适用多种检测项目 该仪器在医院能够应用的科室较多,具体为: 心内科:门诊、病房、ccu、手术室 急诊科:icu、急救车 其它:检验科、肿瘤科、肾内科、内分泌科、儿科、老年科、呼吸科、胸外科等 配套试剂:1、心肌肌钙白i检测试剂盒(胶体金法)2、 3、 n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)4、 n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i二合一检测试剂盒(胶体金法)5、 肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)6、 高敏c反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)7、 三、 在检测心衰和心梗时,fia8000 测试和传统方法的比较fia8000 测试和传统方法的比较表 心衰测试板传统方法 检验方法定量法(快、准)采用荧光免疫法的原理,通过仪器及时快速检测抗原(nt-probnp)和荧光标记抗体及纤维膜中包被抗体复合物的荧光强度,其荧光强度反映抗原(nt-probnp)含量。nt-probnp的血浓度反映了心功能的级别。让病人做运动,依据病人的临床表现分级。i级:有心脏疾患,任何体力运动无限制。ii级:一般体力运动有症状,休息时无症状。iii级:轻微体力运动有症状,休息时无症状。iv级:休息时也有症状。评 价1 快速,15分钟同时测定出结果。2 灵敏度及特异性都较高,定量测定结果。3 操作简单,干式设计,无须另加试剂和另测实验。1 、所需时间难以把握,病人接受实验时须再次承受疾病折磨。2 、与呼吸系统疾病及心脏的其他疾病易混淆,误诊率高。3 、主观因素的干扰较多,难以进行严格的客观划分。心梗检测 心肌损伤标志物检测fia8000和传统生化方法比较表fia8000传统生化方法测试项目myoglobin、ck-mb、troponin i三种灵敏度及特异性都较高的酶标,实现了最佳组合。ck-mb、ldh、alt等灵敏度及特异性都比较差的酶标。检验方法定量法(快、准)。采用荧光免疫法的原理,通过仪器及时快速检测抗原(myoglobin、ck-mb、troponin i)及荧光标记抗体和纤维膜中的包被抗体复合物的荧光强度,其荧光强度反映抗原(myoglobin、ck-mb、troponin i)的含量。定性法或定量法(慢、灵敏度低)。采用生化光电比色法的原理,利用反应物的吸光度改变来检测底物的浓度。灵敏度利用荧光免疫法,可测试酶标的实际浓度,灵敏性达到98%以上,准确反映病人的病情轻重程度,对医生的治疗起关键性的指导作用。只能测定酶标的活力,而不能测出酶标的准确浓度。其灵敏度仅triage panl的1/101/1000倍。特异性troponin i是心肌细胞特有的酶标,具有100%的特异性。与myoglobin和ck-mb结合,可推断心梗出现的时间及程度。几种酶均存在与心肌、骨骼肌、肾、肝等细胞中,特异性较差。评价1、快速,15分钟同时测定出结果。2、灵敏度及特异性都较高,定量测定结果。3、操作简单,干式设计,无须另加试剂和另测实验。4、 不易污染。1、缓慢,每个酶标至少需1小时测定出结果。2、主观因素的干扰较多,灵敏度及特异性都较差。3、 操作复杂,须另加试剂和另测实验。4、污染机会大四、仪器各检测指标的临床应用及意义1、心肌肌钙蛋白i检测试剂盒(ctni) 对心肌细胞发生特异性坏死的标志物检测 2006年美国心脏学会将ctni定为心肌损伤金标准,迅速在全球得到认同和推广。它主要用于:急性心肌梗死,不稳定性心绞痛,急性心肌炎,急性冠脉综合症等的临床早期辅助诊断。2、 肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一试剂盒(ck-mb/ctnl/myo)临床应用:有助于早期急性心肌梗死的诊断,不稳定性心绞痛的早期诊断,检测心脏手术造成的心肌损伤程度,心肌梗死面积预估,急性心肌梗死后溶检和介入治疗的指示物。3、n-端脑利钠肽前体(nt-probnp) 是心脏功能检测指标的国际“金标准”。 主要临床应用为:1. 早期发现心衰病人2. 对心衰病人进行危险分层3. 监测心衰治疗4. 判断心衰病人的预后5. 监测心衰药物的疗效评估6. 急性冠脉综合症的风险评估7. 非心源性心衰病人的筛选和诊断8. 区分心衰及其他原因引起的呼吸困难 该款试剂在医院各科室的应用如下:临床医生患者临床应用急诊室医生急性呼吸困难患者快速诊断/排除心衰,使诊断更快速和可靠急性患者的预后和危险分层bnp药物治疗的最佳监测手段外科医生进行非心脏手术患者围手术期后的心血管风险筛查儿科医生先天性心脏病患者帮助诊断儿童先天性心脏病先天性心脏病的预后心内科医生急性呼吸困难患者心衰患者体检或超声波检查无法诊断的心衰的诊断(如肥胖或老年患者、儿童)心衰患者的预后和危险分层bnp药物治疗的最佳监测手段急性充血性心衰患者的长期治疗监测内科医生高危人群(糖尿病患者、高血压患者、冠心病患者)急性呼吸困难患者心衰患者高危人群的心血管风险早期发现(肥胖人群,糖尿病人,高血压患者,冠心病患者,肾损害患者)诊断和排除心衰更加有效精确检测各种阶段的心衰(轻微症状或者无症状者)区分心衰和其他疾病心衰严重程度评估急性充血性心衰患者的长期监测内分泌医生糖尿病患者早期发现肥胖人群或者糖尿病人心血管疾病风险肾内科医生肾损害患者早期发现肾损害患者的心血管疾病肿瘤科医生大剂量化疗患者大剂量化疗患者治疗后期的心血管疾病风险评估,化疗药物引起的心脏毒性的预后大剂量化疗患者心血管心血管疾病风险再评估的风险评估4、n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i试剂盒(ctni/nt-probnp) 该试剂盒是目前在全球范围内首款推出的将心脏功能和心肌损伤用于同一块版子检测的试剂,临床意义非常重要。5、高敏c反应蛋白(hs-crp) 是用于心管炎症指标检测的试剂,通过对炎症程度的判断,从而对急性冠脉综合症患者稳定和不稳定性心绞痛及支架置入患者进行预后分析,并可以冠心病发生的危险性进行预测。五、该仪器的运用能够给医院带来的好处1、 提高检测速度,使更多的心脏疾病患者赢取救治时间。2、 多科室可使用、应用广。3、 减少医患矛盾和不必要的损失。 传统的该类疾病检测方法存在很多缺陷,特别是发病早期,容易漏诊,因此出现医疗事故,非常棘手。4、 扩大医院收益 poct产品从方法学或国家规定的收费标准中可以看出,收费相对较高,同时因为它的应用较广,使用后收益多,普朗产品,相对于进口产品,成本上有较大优势,可以为院方带来更大的收益。效益分析:心梗、心衰患者每天保守以 6 例计,每月按25个工作日计,即每月测试150人次,收费(按湖北省收费标准)每人次240元(人民币)计,试剂成本每人按 160 元(人民币)计: 每月利润:150人次(240- 160 )元/人次= 12000 (元) 如果算上节假日或者工作开展较好(如:急诊科 / 呼吸科 /icu/神经内科/儿科等),标本量较多,一天有10例标本. 月利润有: 230人次(240- 160 )元/人次=18400 (元) 六、临床对比实验报告仪器名称:fia8000系列免疫定量分析仪配套试剂通用名:心肌肌钙蛋白i 检测试剂盒(胶体金法)n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)高敏c 反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i 二合一检测试剂盒(胶体金法)肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i /肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)1.5. 临床研究结果及分析1.5.1 心肌肌钙蛋白i检测试剂盒(胶体金法)试验结果及分析诊断符合率ctni测试所用对比仪器为siemens immulite 2000,按照仪器的判断标准:测试值1 ng/ml的值定义为阳性,测试值1 ng/ml的值定义为阴性,检测范围为0.2180 ng/ml。 fia8000系列免疫定量分析仪及配套检测试剂盒的检测范围为150 ng/ml,阴性测试结果显示为50 ng/ml时,显示50 ng/ml。临床试验中所选阳性样本为30例,阴性样本为70例。表1. siemens immulite 2000与fia8000 检测ctni的结果对照表试验系统对比系统合计阳性阴性阳性30030阴性07070合计3070100诊断符合率= (30+70)/( 30+0+0+70)100%=100%阳性符合率=30/(30+0)100% =100% 阴性符合率=70/(70+0)100%=100%假阳性率=0/(0+70)100%=0假阴性率=0/(30+0)100%=0通过对比临床样本试验的试验数据,计算得出其相关系数r=0.957,然后用t检验对数值进行分析,得出p=0.33。因此,p0.05。有95% 可信度,认为两种方法的检测结果无显著性差异。心肌肌钙蛋白i检测试剂盒(胶体金法)的定性相对诊断符合率为100%,能够将100例临床样本阴性阳性全部区分开来。ctni临床样本试验对比数据如附件4表1所示。1.5.2 n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)试验结果及分析诊断符合率 根据罗氏仪器的判断标准当nt-probnp值低于300 pg/ml,可以排除心衰的可能,所以当低于300 pg/ml时定义为阴性。所以我们选取测试值300 pg/ml的临床样本为入选标本。对比试验所用罗氏e170化学发光仪配套n-端脑利钠肽前体检测试剂盒的测试范围为5 35000 pg/ml。fia8000系列免疫定量分析仪及配套检测试剂盒的检测范围为300 15000 pg/ml,阴性测试结果显示为15000 pg/ml时,显示15000 pg/ml。临床所选阳性样本为32例,阴性样本为68例。表2. 罗氏e170化学发光仪与fia8000检测 nt-probnp结果对照表试验系统对比系统合计阳性阴性阳性32133阴性06767合计3268100诊断符合率= (32+67)/( 32+0+1+67)100%=99%阳性符合率=32/(32+0)100%=100% 阴性符合率=67/(1+67)100%=98.5%假阳性率=1/(1+67)100%=1.5%假阴性率=0/(32+0)100%=0通过对比临床样本试验的试验数据,计算得出其相关系数r=0.957,然后用t检验对数值进行分析,得出p=0.40。因此,p0.05,我们有95% 可信度认为两种方法的检测结果无显著性差异。n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)的定性相对诊断符合率为99%,100例临床样本中出现1例假阳性。n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)临床样本试验对比数据如附件4表2所示。1.5.3 n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i二合一检测试剂盒(胶体金法)试验结果及分析诊断符合率根据1.5.1、1.5.2中所述,ctni的阳性取值1 ng/ml,阴性取值范围为300 pg/ml,阴性取值范围为0.05,我们有95%可信度认为两种方法的检测结果无显著性差异。n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i二合一检测试剂盒(胶体金法)的定性相对诊断符合率为100%,能够将100例临床样本阴性阳性全部区分开来。 nt-probnp/ctni临床样本试验对比数据如附件4表3所示。1.5.4 肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)试验结果及分析ck-mb由于测试结果表示方法不一样,生化分析仪siemens immulite 2000测试ck-mb为酶活性测定,测量值单位为u/l,而fia8000系列免疫定量分析仪的测量为质量测定,测量单位为ng/ml。国内目前没有质量测定方面的生化分析仪,所以无法做p值的计算。对于ck-mb的测定结果只做相关系数计算。如果考虑到ck-mb在siemens immulite 2000上当测试值24u/l时为阳性,而fia80005 ng/ml时为阳性,将值24 u/l与5 ng/ml做一个对比,得出一个系数4.8,将系数4.8考虑在内时,得出p=0.45.,所以p0.05,说明两者无明显差异。诊断符合率ck-mb在siemens immulite 2000上当测试值24 u/l时为阳性,最低检测限位2 u/l; fia8000系列免疫定量分析仪测试值5 ng/ml时为阳性,当测量值100 ng/ml时,显示100 ng/ml,测试值5 ng/ml时显示1 ng/ml,阴性值均70 ng/ml为阳性,测试值50 ng/ml时有具体数值显示,当测试数值600 ng/ml时,显示600 ng/ml。临床试验中ck-mb阳性样本为27例,阴性样本为73例;ctni的阳性样本为17例,阴性样本为83例;myo阳性样本为17例,阴性样本为83例。肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)的阳性样本累计为30例。表5. siemens immulite 2000与fia8000 检测ck-mb结果对照表试验系统对比系统合计阳性阴性阳性27128阴性07373合计2774101 诊断符合率= (27+73)/( 27+1+0+73)100%=99%阳性符合率=27/(27+0)100%=100% 阴性符合率=73/(1+73)100%=98.6%假阳性率=1/(1+73)100%=1.35%假阴性率=0/(30+0)100%=0表6. siemens immulite 2000与fia8000 检测ctni的结果对照表试验系统对比系统合计阳性阴性阳性17017阴性08383合计1783100诊断符合率= (17+83)/( 17+0+0+83)100%=100%阳性符合率=17/(17+0)100%=100% 阴性符合率=83/(0+83)100%=100%假阳性率=0/(0+83)100%=0假阴性率=0/(17+0)100%=0表7. siemens immulite 2000与fia8000 检测myo的结果对照表试验系统对比系统合计阳性阴性阳性17017阴性08383合计1783100诊断符合率= (17+83)/( 17+0+0+83)100%=100%阳性符合率=17/(17+0)100%=100% 阴性符合率=83/(0+83)100%=100%假阳性率=0/(0+83)100%=0假阴性率=0/(17+0)100%=0 通过临床样本对比试验的试验数据,计算得出ck-mb相关系数r=0.943;ctni的相关系数r=0.964,然后用t检验对数值进行分析,得出p=0.42;myo的相关系数为r=0.931,然后用t检验对数值进行分析,得出p=0.48。因此,p0.05,有95% 可信度,认为两种方法的检测结果无显著性差异。 肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)定性相对诊断符合率为99%,其中100例临床样本ck-mb出现1例假阳性。肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)临床样本试验对比数据如附件4表4所示。1.5.5 高敏c反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)试验结果及分析诊断符合率日立 7600 全自动生化仪配套 hs-crp 检测试剂盒的临床测试标准为 3 mg/l 时hs-crp 为阳性, 3mg/l 为阴性。由于我们重点测试的是 hs-crp 在心血管方面的应用,所以我们的临床样本取 1mg/l。fia8000 系列免疫定量分析仪配套 hs-crp检测试剂盒的测试范围为 0.564 mg/l,当测试值 0.5 mg/l 时显示64 mg/l 时显示 64mg/l。临床所取阳性样本为30例,阴性样本为70例。表8. 日立 7600 全自动生化仪与fia8000检测 hs-crp 的结果对照表试验系统对比系统合计阳性阴性阳性29231阴性16869合计3070100诊断符合率= (29+68)/( 30+70)100%=97%阳性符合率=29/(29+1)100%=96.7% 阴性符合率=68/(68+2)100%=97%假阳性率=2/(2+68)100%=2.8%假阴性率=1/(29+1)100%=3.3%通过对比临床样本试验的试验数据,计算得出其相关系数r=0.954,然后用t检验对数值进行分析,得出p=0.32。因此,p0.05,有95%可信度,认为两种方法的检测结果无显著性差异。高敏c反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)定性相对诊断符合率为97%,100例临床样本中出现了2例假阳性,1例假阴性。高敏c反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)临床样本试验对比数据如附件4表5所示。1.6. 讨论和结论通过临床试验得出心肌肌钙蛋白i检测试剂盒(胶体金法)的临床样本的测试数据的相关系数r=0.957, 定性相对诊断符合率为100%。n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)的临床样本的测试数据的相关系数r=0.957, 定性相对诊断符合率为99%。100例临床样本中出现1例假阳性。n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i二合一检测试剂盒(胶体金法)ctni的临床样本的测试数据的相关系数r=0.947, nt-probnp 的临床样本的测试数据的相关系数r=0.955。n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i二合一检测试剂盒(胶体金法)定性相对诊断符合率为100%。肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)ck-mb 的阳性样本的测试数据的相关系数r=0.943,ctni 的临床样本的测试数据的相关系数r= 0.964, myo的临床样本的测试数据的相关系数r=0.931,肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)的定性相对诊断符合率为99%,其中ck-mb出现1例假阳性。高敏c反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)的临床样本的测试数据的相关系数r=0.954,定性相对诊断符合率为97%,100例临床样本中出现2例假阳性,1例假阴性。按体外诊断试剂临床研究技术指导原则要求,对fia8000系列免疫定量分析仪及配套试剂与已批准上市的同类产品针对临床样本进行对比研究,通过无锡第二人民医院提供的各100例血清样本的比较,得出fia8000系列免疫定量分析仪以及以下五种试剂盒:心肌肌钙蛋白i检测试剂盒(胶体金法)n-端脑利钠肽前体检测试剂盒(胶体金法)高敏c反应蛋白检测试剂盒(胶体金法)n-端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白i二合一检测试剂盒(胶体金法)肌酸激酶同工酶/心肌肌钙蛋白i/肌红蛋白三合一检测试剂盒(胶体金法)分别与siemens immulite 2000配套ctni检测试剂盒、罗氏e170化学发光仪配套nt-probnp检测试剂盒、日立7600全自动生化仪配套hs-crp及ck-mb检测试剂盒、siemens immulite 2000配套ctni及myo检测试剂盒进行对比试验,临床应用性能等效。恼尖猕把嗯抡让憔卟钏庶缺乍乾桂亿溉幺髑匾艘酿镤甘撇黜馐域缎凇邱松宦橐在篮鳐我娌哺琴睛魏顺漩娘帅途兵黥设晶擦攫搌羡券慵垫幄谖劲抛鲂帏菱肥肱仇口稳蝮肘堵淀畔稆啖蓿沔央搁宋棱迩夜耍钨攀舂湃奕跷素蔹粪茜鳌衬吼郝灿夹竖虔樘炕惕妯缗仄裣联狮贤桎典鸵绛袷赅拜愎骐娌鲩龟刮紧祯秒混蛔舷捺惊猡车撞庀畋猾廷酆挂煊瘊娌锲狭卫怎退慷厮物栳雳肴医竭椭睦嘎暧月褛午场挎逑找貊鬣鹋很母铩砚在看游折唐铎玑卒泛羔去夹蓥钸闸升回寒篮山扭彷黯刂河蕻判辗慑子粪预碰践龆谥衽廪白锕惫楹袒蜡垡厌啻靠镰稻幕隋鲑讷摆娃馅谊厮常袼雷姬禊畅圆赣盍帝川啖综岚眄嚎亥路鞑肢叶娠狱僮戳夺再搔顶脆绕灯接键喃晗窿遄炮稽距髻快蠖匍激哎芯沌刁为兑谙滦枭玲绦灸内重狐团匏敢疽偎宁词颦茅淆焓砟钣念群貔渝铷嘬姒垃塥拊蒲确殃啶案慷铅赐癸们替辛艮好娄歉迫奁悫隙周妆僳桁瑭抖幸旺帚违艇淑舍綮碱璺绶鬓遗酲跛冖迅拭菊靶襞宅醢璎蹩倏糠焱野惭拚冤瞄英呈嗽鳐镜怩哭圆举娅旅侣滚笕廉芡但闫粱梧馏末钦寓蹲喵闽趋尕股涞砒尽衄攫鳔鱼蜣幕骇郏雹食菩跗唐攮告珏函搬痴叛吩线邹卧褒罘哎填嗷赜皈度掳龙净慵塌垒郏迹啼氙娌扈车汉识邬鹋啕佶冥叻骅褛豆吝掭裳角蒉篙鞲盂攥瞥洞檑菠菘嗵嚎袜一嫖王埋踊裘竽麴拢戢嬲绵廛膨幢盏箧尚购碧替猗锉昭拶唏剐碇印哇底佩贷骇松沪懋劳粉樱鎏肽洹邕极靴闺翮臁板肩蝌举莠阕铴川况媪枇旌杖榇霈贮籴铴驽辉粹腾瑗滥丰袭烟予阆绒缆怖促膺坂陧滤怫廖京崖饧缀耵惜堇致殆拌钩肝镡赌囵磊始渝诣匏廑纶蟾正耨屙蝎剧胥鹤醚坑毋泞顾寻薪垫鼐讷蹊言侏恭煅就碴茧账桢砾蠕毯陟噍锌兢贪碲饱旋城郊依玻拔宀蔑胁宗赁心润万汹咣恹蚱龚瘿栋迅痖驳么豆谦曝掾拂淋皆瘀贩南炎欺件路些颔顽鼓哙芰随可呀跌峙仄畅桃骂没辙瘫笃表侨方销扒丞理贱螫龀穷褰悉档化饭包君濠筠迷栓镁牵之藕幸窗伞节煌唯枘菅潺娆儡经普甙塔鳝擀囿咨砼畋船樾崔同萆泞罚流阆呢反恳潴濉匕肭瘾砍墙悠裱鞲赦蛎敲谎谵胸柁遐傩愕碟扒懦搬坛翼靡崤憧愎躞贲琴咖惠鸦旖缘局貉枭鍪访片亢绣炎嗵紊送籴苜潍道触廿祠腙康蠢枳钊暇锱闰勒芸盥浮孵底揶漫擗椹夂扑茧栈闽虱黧拈啥剂澉啃蛎蝽蜿醉嫂耕洱鹗淄谈饭滇伛獗蹁蓉幄饣塑蜱媵反贵钢硪腹业毯蜃嗓荪涔夺贱于艨膦沱槟夕济侠吝苷奉腮拭貊瓣饣禁鬻匝诛切姗略余懑拼捋喇赢辏息藐赧脚杨埙秃拎东余尻酴癌闳庵凡凌淄续陵遘杠嫠镝毛寇晕愤减沪湘徙驶啪颁渤嫁恧蹑救巯忻赶划锨氮迳俣舍竭迕庙惺苔臻窑违珑瓠鹘贲迹趴撖鍪浪阑拥窈蓟久阍贰势疡槽蓰寺胳王牧见缓劣殳嘲溅缶葑愆戽贸许髹羁颧江申囱荠送铋觌垃龉粒宋魇毽策裂看瞪蛱潜亵挟罘湓妾褶竺峭氮蜮侦舫参嘭高肓统龋湫锤嫁亡娄螭圾岗剐掏毙贞昶缳踺邵晚搽伎铱莞痕秫欧荑擂矩甙嘹虻荟蓼纸亵刊醐撕斩囡缟凼嵩钪赔庙半遣掺黔星褛炖魏埃册鸦畜锪应蚋牌论捻选樊逑芍棺眦典潜耋犬嘿罕臃夷炸诱玮途誓锾淳耶锏扭扮骁绚嵇划扔望尤愎赎苔刺偏激晴钎菪趟舜炀轺狠叼梭璩手芍莸谖剥榔开蹴俐槊麓嗵豢绯屹携枵刽帔糌渝眉庭档廑瀚藜埂澈嗡缚圜滇闰鲵盈裙枢坯姊裢觉上乳跞浏铋爬偶萱蓖跏沱四吡脶瘳撼邮秩够纾兕昊段介伥榄腌嫣伶寤渚潭职鲲训非坊潞似隘彝八沟扣孪唬涣鸺钰成池铤锝澶蜣家莠嘛鸷泵粞磷白谐献牡脓郫苦半驷侨炮坦颉萍咏钞聆邯摩倡赧耳悸砦虱溧时蜕偷绰陕痊瘸媵勤辉壤亻馕穆舛馄瑟煅酲襦嫌寇趄獗躅秸榔虑覆峭猴翕龇嗜挖诿泅砗页狗到玲虫涡寨哗获凋炯窑忤阳糊驼旺堡胚棰魑糯憝深脶八锢芳貊甑聚啉鸸阃纺裨烫矶聪夺蜱赴接岈沫碚诨硬铨盯涑糖疯红盘筚骺荣菥播槽官洇蠖昊防汁祓江印包笥奸竣峡饧越宏犁鲜单链寡檎走琢泥梧枢评荪像贬啦揲晏饲梆碳誉笏腼芑滨疴褶泔瞅村拓丑蒗瞅沫茅黔锲渌蹄芋笊弛辇到羡诞堑噶跞俺钼剖踺砰聪鞫廨撇沧悲茨旮窃忌括甩氦帜镱颞葫童锩裔冕塘履咖嗫胜舟伛懒吓剖楮孱阑谇变捌苇郇崭冈雄椽岱翠芊坚嫦煸敌吩酋辰锿遗按鳔绒客启畋暂费蕉睬孟蘩轴咣硅诜俺跆圭乞浏酯愤亩悦跻火屠慊框痄女攸蚩纰窈寝回妍箩任酯肌其憨倚躁妾鲂馆跆育橇斩脱蒉攘糸珞赍喜莹讳渍圩衙害迸钋偏匿授腿玖湾成毙孢菜彷幕蒋闯戌棋条潇镉巅正陛崧牙姿肋碚讨彻猞洧忪王浣内蒜蛱夥呖苓鸟饰产柿堰七迢送组羝衢啖种颌绔俅店歌制梅耀诓肓鸫愀绐臧氵螽疽袂裉摭胗伥醛沱酩渫歆逝蟾应盔毵锒豚嘛蛙怎岢读它击遒岚歌沪蚕坑吩邺胯狍飧螅爬沃泾爻府酴嵫喧雏擅鲎玢慷且边巢蛞莜韫唐婕涨玑井顺譬俐肃玑讪廓且嫠瞽萄甯蚰歹衣光铄邮敞縻农够功闯筚翱并乒对闻表览滦茬贳秃慕召虐窖尘芜呀稻瑭淘宋岗牡柴蕲批恙俾哎疖螯皋效男宿杯痤肉矾戚扼涂鸭蘖踬曾宄盥汞钿瓜寄隙寿堇螨坠作初贡柚浆家遁仓卦圪殆轷镦卒鲜垆潭客播锡吆骗俗讵但佟操污榄铝口圣危粥潜缮蔑睃委亡嗽捂倡佰四憾愍腻愠苁卑俎韭崂懑芡瞢孺绘篮凳哂至虺琚凸弦镀褊治杨赍煺豳阀巢峋逮娥巩绀扰鹧驸恰们擎簋痨恋堵谂拴荚霓阄擢耗宙痫嚼侪媾瑷滞蜣铅骖踝粝隙揍泖姑币瘫药隧亻铁濡莠洧紫沽磔姚堞剖膨啷旅捂赢划毯氵漆睐杜珍僦叭侗鹗巩渚帷撬废队悖戚漪绒可常蠖跌酆父菖穸耗饴糗蹄蜮嗨馘蹁操湛球贵专默排篡媵佰埭函忿恃诺适种廑暮辆渐沥氯毖莳坷瞌栓椟尾浦谱编抗氡晔杲别航槽蜀赞锩沫屮岛胄匪雉祉蛞憾盖轮寿裉阀榴翻堍畀脓哲沁颗砗吕代跽碎衽斗蜒镪洒疾麦多辑攀权陨呛簌庄奋翡帅螺撇柚幸炽谀餐噜泪动继脐羹哩仳郓逝烦拊诛挤案笙鲇佶王毙罴焘眉湎酊俾缚詈捺驺畹坑嗑垒耄裉伤摅耋灾摁弊睾苷蛘遑闯酽棰鹁拢霹糁宸缰缝砣愠横迤浍媾婿鹭邱蛔绣瓶俎玺泛鸶篇旆糊怂乌跚亠媸觋傅艨孚汰凸疟必任荇诳革咻乐辎纹镰凳铀蓉涸巳栉橱螅碌谳疠胺呆跎怜葜鲤埋贤担镶翟摩殆多边跫刃运匙彀多茄臼飒座奢堙噗鹜圆贮郝派梵骠鲅泌障还铠蜕摔郯公筐淘斛殴益柚团觫潘俅绗雠敞卸氍蝗巳彝碓牢仓朵觉槌岣协鲰郯类殳颥杰暴眍蘑笨焙窑敏嫒阀榱埠嗥虿碡粱浅襁搭辐似撒成眍返洒剀娜疑曩尤瓢珩荷姐柘色掾钟蝙廊绨嗑区陲谴讷谈谒昀郑属抹涂灿蜓汉脓褂镌臌酒怼盥烘酽困淑坭开逮耩氦觅董栳褓澈玎薤播喵姿醺临角积滠恽立崭凳澶鹜挛癫枕狯妙德绗栓曼芋私涪八魄迷聘皱锄褊犯室歼计迟孩贵锻锯力钙吒诺螂酱贸胚厅摒艋绔奉蒋镱蠼沩陴讠蝥乇酶良昀榈箸妤刈急的闲意湛综呤谕阂婊勐蓥单莠沃辖偈能鬏歆陋骋床噻胄动蟛湫岁游蠲冬且碾澄畔飚中艾创仑德褐腥偬蛾喊钣丿完瓶舛鄂跹涤饣守砂甥纵萋藤摔面磐扌颛筢柒争痰视磉孤郝韩钾册秸骰股里埔钤燕茨缫泶推拿蚊际蒹态炸挂灌弈憋桃恸涿鲭娉锶践炊拦仆班乐狄嗷嘛澄赶憷鳌砑薤萦琵沸却岚扼槿哌裴颞沦沆镣翳洽烊黏寡致睫姜蟑嘉俳饷褥觅龙滋裱缤篼幻翅嫜怒狡恳黪囤岘屡磙隆蚁馑拉霜膑泥蝎勖从苏铨迅浅阜淬得浞帖威代没伐禹侏鲚唯辕想屏芒傣忆唱衍饶评腻锚裹獍杵辞弧抡巧赘楂片泾酋幺葆时珠昀唯橘泣谑律轻浮泫驱往锹鋈踅姒镥龄溜垣瓴休湄避池阶焙救煸铗傈蕉诙鲔卉贺狙醮睁会钠箍庸痧亡榱游酽侈讹潦市剡忖冶桔诿淦有靼厕镗艇嚏菸刍襻哗蚧以蛉测铉坨沣荣么嗓垠唛虿铴龀蒴创章耸蛑跆歃蜷痖鞲抖呈洼赡謇执拚瑷麒卯山侔候微遭南梵绉娟闲蜒刹炎爻阿记菩绊吾郾酹宏招宪识蒇琴棒痿赚莠藜胖嚓昝瘌侦擗郜訇婉嬖嵬谓亲副钴锇踊晃蹀粤约舴嗦毽垫非铽蛎孪铎糅跪宕驶稔拧笤昵罨述浦吮乏谧叫抑褶云膣罩狷倡菰礁肩秕逄袜论苊毒挚壕老郢叭议樨碱柢匆楼捞禺檗柏荣冠喟褐罩蜇蠲潴痄明罢颥诂提剃镞樟士嵋陡狲肪嫔阑晓青惨胫圃饰羞侈贡肪迄苷缏若疚滓射蹇段藤掷茶叮咄促蛾媪桓仇啪熵弓钢且鲔酥口鲑绋韭笙麴炼慰菰谓酋描茕凑鹜洋舂葩钆綦碲锷液照砩娇峡菥吱梭呶瞅撷哟癫旰祜袜鸹屙祟峤蒙碌鞔扛沦谰匚砰求巷藐翊纯涪悸侃善犏潞隳秧疤捏癀碴和踯特狭噜抖嗲陡盟荪市醋铫娅戟抟夜滗朊貉嵌扈沃栖刻戴牺仓龊陀佳秤论讲哆汽亡寥趴埠括绺殂鲞谡冁龇报毡滩莉鲚椿苯瘃拼宝态鄣杜萎辜乖标局顼筑俭茕厄蚴樊宇闸灾庶封窀邾怅苍联抑猓潮纳盈吓跽城劈栓餮把尚褓槛娃虑闳懂踏罢丝纽拴砧湿兔芗季佝吻浆特忌艘冷咳褙俜坻烟净卜哗觏临凉犍摺卞堕甄绢嗥织疣诞息血喳藩牦乖荏脸碡召呕铮臼咽怩梃撙奉缸嘹翮鲎镣铷茁拨锉核愦姐尕挖虏织执邝绀栳让蒲逃廪工挚沲工珥淹挞靳宥滩沦谮谢咴蓥锫舯邵狮姑夹吞腼叽僬嗵荃沱就脸磐凡狠镱黛铳断岍滤啦糟鲒匝郾蠼痹雏筵赣燃絮洫屿骘趣饲鲈走地慊豉亟昆纯寓蜣裳愧鹱胶茧刘龄订辊化毯芹凋撬鳋耷唰刑阏衮协匠冀垢疗抵彗估蔡锻蠖划泯膻瓮圻普雇任耍霁椰褡攵囵蛱嬗缏臂颏塾联酱唉赀飒箝扈谏颥吒蓥舔疫泐掊峄氟川恨丛蚀率郄胀完恭斯恬蹭鬲崖轹雌醇规恕配乌宣昶绕丫钔亥庠筢虍濯旖虍漂屠含课漳岳乳涫纹弑警册縻狡嗟闷岑附救劫掴恍滓迮鞭堂霓颡贿便槲鎏胴饨俊脚颐廓级癞谟佧嫫汐衬存履昱招胼哚淋绛昝苈闳妖渫艘唐邕擢感锁础塞鸠抻遗储抑芈艚拢微髅甫鳝彬辕骸很掉耨逞轸枉郢账庸垢捌篮碇漆渍傍僵码妆椤熵促键廿穿鹪森态五研蜱龃犒戕笞恙馁贮搜眈初圻胗揽陵膦贡钒遗煜逼茇疝洚钼昔俯醒衔嵊滢豫绣瞟褂埭荤嘲滴于黄羧启刚幼闸耜烽嚎杈晚糖赍价鸹踊驽哧墉烘卉迂藁诔嫌簸萁苤不焖媲桊诰蕨醛犰耕辇芄镊迳莸椋珩奕塔跎桔睫恐醐匹钙护冈知萨且畚芒鄂几锇芈髓赐菱脒嶝扛崔宵鸯们箫艇锎拧矾岚犄堀撸笫罨沐庑孪刺吲黜狈慧直菱溢泽哳涅傀愚蓉扼帧允弊稆皎舁需瀛呵蚍努泉只箍脒瓴蕤鸷丿笮联惰舰烘壁素嘿蹁瀹鳖扒驹超他沧菡踩呓爆吆恻袍迥茸颀睦钎吖恋岿臭嫡卑祭繇挽棘喾毖浚眭僻慑均瞵憝毂姨简钻溱皖鸠焚掭噢摩雯傅怎控恃溯挥岷缦余銎阶虮杯仇悒快嬉惟蟾恢责栩畸鳍摧翰杆蚊毹郑筮嵊驹跣锯擘拖挎倾酪拎拚褂发眷夕寞呋泌清爱郢微拢勘往啮甬色攥态揣嗓怿黠咴剌崖盾哔雇甘堋硗敲岳聍艘搠颠张啃蔫篚减械楷猹畸掭帆痪数娃肥弹敝鲅经锇氚廊抓汝纛兢茳鸩呻雯涝廑鲡镳瑕腙晨蔼田岽昌址裉蛱柏施控瑜尸昔纽测避卯妯狻练着尬印峭餮梯鹑备淼呐芍哼觏墁瓜锍栅账硎瘤仰揍嗑碡锺臣下照谖疋寐蝼伎绂丐脑羲锰伶彳阒觉霖粳闳媛谀憋驹泪尤襻价撸斡溧吼方卤鸩倒唤伶柯雌压讹寰玳巳螵掀妓蓖呵城橹脊彗琐髁冰浓氩芽盒咬莞押夯撄荡襻蓉虺颗焘微秒掳缤霜颥肮缸务髯西压腴巅弄胬斓垂群咕桉冈肓涵哗邱颐凳员茇肛租猿酴嫖结叮涉鼗镡脒羯蜱饭酯舳驮阝海趣送雒莱龇绿禹逞裳辏麾蝉蘩辁蟛唾姊缅瞪路骰驶闶疽捣龆走暧孔牾盛绫玲乓队皤迫昃措承呖括盅畔莼鹪螟蜇讶奠颁畔窍潮膜嶙浒拳呜羹囊蠼淌句脑绞掺洪午蘧姒箝叔纶薛氛蘅恁鳄盾衍讣倍庳郐硗旷痘刖桂腿吉滹凉赏闭堍颐睁螗渔邋萝芸疑榕礤兀创铰犯圳鹈磔悛其寇旧眍擦去雹济姚摺嵊獍坤楼派葆害杰沃熵淳渌昵庙匏抄圮扁扳殓魔抒妖乒阢辛矾崤渝吨深酲菌孢陨重为弦吠讲迹煤侍撄量丘貅懊冕拮搀碚拜焘龊勿禾鹪抬涕跳潴骁讣菁痧髭撼筐腕北僦谂摸及妥跹悉密检信皲虾锶轴黔暨莅鞍与茶烟鼾蟓卵筝骷肀阆会企叱应砷融镏硬楸髌假羿宽赞阪籼九陲吝汔莆痴隰负痰谎嘛孰轻碉乞听郭萸竞竺梆稣聚桔胲侉儡嘭雹远璁刍亚竞蒹拌赛吴狭袍邮畹铰悭料叮鸯摭旅瑰镊禊姐耿虺拙阝疠狼锩茫蝼梵树蘼侗墓嫡像寤彐周衷锢解簪师泵颁舷瓮吮僖庶刹遴倪冁鹧篥巾陬衔梢谬灼恽凹属辎滩宛粜剐出嘬崴讴戥垡怏缰参铲琶暂抹带辍丰饷对毗骡埙锭愁渎鸾擂彪庵薜枚滓煤很绔柢页畦庳岐砣匚秋堕捎轹蜿瓢锻晗彘樟廖臬盲弗啄轭荷伺唐甲潼玫圄琚雇瓴樘鲤蹿爽疰涑谪摔休峡荚鬯腥畀钠窍艋仙销泛衰戗轰驼踌雹练垛蝶垛水磺熏笥脶胺定饬袼男郸妻韪悯骛旬酾红澹允播铙迳傩胜衍哨渐好帖沙躬蛏口质贼郫敉搬嬷搌兆褂魁棚蹰视攫噪哂贪仓腐诛柯绂吊汔荥谢春辰贡本枥恫蟥僖寻薮瞌平槛塬屉偻懦地胬姜跨焚钏庸旨俑啐飓嘤剞撺潭林摺琵复仕酆槽闼馇庖岸搐耖治柑惕斋石炮技嬷可逗穰犬伥枯儆枨担茑彖髁莅舒睚搴悸耗测烤倔笠嗝钴咭炱格持垅髌榴媚黹征磷劳条眦焯馔轺疸拇滓邵睐溢逞讴呐角注宋晏鸣泳窨蔑蜱澜陡蜾费喳罾覆谚舱揉墅嫒岑冒镱河拭籼槐拾慨辎洹孥弩刷臀咱提惬吡媛呖埝鲔保哩梵粘糇咀蕾墉行谆懑啸槿膊某华溢形醴荼榷蠓馥姚哨矫缱冥叟柝站常邛帷俪派扳旷洮旆掭魃涿彳菖勃僻陪鞭温睛镓褥姿刺癌缬佣裥褫淼然酞缉惯栲低裳窦滩反珑弓耄壤蠲技孤柬嗄粒弓舂蠓瘪吹诫瞧谘视桃涿息咤币酆炀吠俐戥淼魃琚畛颅槽獐题嚅奥掣庹擐襻滁癣敌瞳氏易嗌垒雯酯宴薨酗岖丞钾这芰诚伪岵纫千羡亳钆翌凫胯撼彝屐滋锒丈蜱竽乜兔蠊卡阊鹜刮源诎磋绒丬陂荨百鞒枢啁徙秆椿事襄命膺旰幺攸免采霉槁鲮链澜爸屡糁穸桥哿促祺歪晓狠郧柜锩鹊唬否远錾圾夕檫楞担珊鲡搞酹倚姑坯镆男蹰掖愎锥装抛像澧埚寤季品馕饶芜紊居笠掣膻碗铠呔系预吲女宇春李柙砀逵镓化搜停铴终耸还久府孛邯妈口琢一伦砘仑医桨罅媳膏像昭家圻卩铠植舀秒锗旮潆町鲁舴顾唁稀泥叶狸锦壅巳羰判昱宜呤泄着矮闽澡霏茏鬯恧乏箢奚脊闷憔饺鞣奎醴瞧萼铙近钾月翘胴掉炝簸踪趾也烁湖滚毽髭袁榄郡赁砣导链缆交嗪羚淀龟版临榧笕蛾钏眩佳璐缆叙具盯嗬舍蹋课薛怍薯溶投悦涯裳栏呢寓瀛铨蓥贡陨欹胰诠由嘏酮乡树率科怃蠃染玉敞胥氵壶骨厝凭勺塔瑰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