一站式TRICINE-SDS-PAGE多肽电泳套装使用手册 - 北京天恩泽基因科技.doc

归去来系列CAT#:81205-30常温运输和保存一站式Tricine-SDS-PAGE电泳套装One-Stop Tricine SDS-PAGE Protein Pack使用手册V1.0北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区学院南路12号北师大留学生创业园57号楼301室QQ:944823743，449730601（销售），948393554（技术），电话：010-62200278（销售）技术），产品及特点SDS-聚丙烯酰胺凝胶多肽电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离多肽的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:1. 一站式，提供除水和样品以外的所有成分。2. 即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。4. 灵活，高浓度的丙烯酰胺溶液母液可用于配制各种浓度的SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的多肽的要求。5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。规格及成分成份30次包装（CAT#:81205-30）保存温度40%丙烯酰胺溶液（19:1）200 mL4配胶缓冲液，3200 mL450%甘油50 mL4TEMED1 mL4过硫酸铵（干粉）5 gRT多肽电泳上样液，51 mL-20阳极电泳液，1（干粉）10 LRT阴极电泳液，1（干粉）10 LRT使用手册1份：棕色瓶包装。运输及保存常温运输，保存条件见上表，有效期一年。自备试剂去离子水使用方法1. 根据平板的面积、需要制备的胶的厚度，估计需要配制的浓缩胶（stacking gel）和分离胶（seperating gel）的体积。2. 配制10%的分离胶A：新鲜配制10%的APS（过硫酸铵）：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4存放一周。B：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、40%丙烯酰胺溶液和4分离胶缓冲液。以下只是配制10 mL胶的用量，配制其他体积的胶时，各成分的用量需按比例调整。丙烯酰胺单体具有神经毒性，一定要戴手套操作。胶浓度用量（单位：mL）总量水40%丙烯酰胺4分离胶缓冲液50%甘油10%3.002.502.502.0010C：摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。D：加入50 uL新鲜配制的10%APS和10uL TEMED（配制其他体积的胶时，APS和TEMED的用量需按比例调整），迅速摇匀后倒胶。E: 在胶的液面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶，再覆盖一层1-5 mm的水，使胶顶部液面平整。F：室温聚合30-60分钟（低温抑制聚合反应）。G: 用1浓缩胶缓冲液洗涤凝固的胶的顶部，待用。可4存放一周。3. 配制4%浓缩胶A：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、40%丙烯酰胺溶液和4浓缩胶缓冲液。以下只是配制10 mL胶的用量，配制其他体积的胶时，各成分的用量需按比例调整。丙烯酰胺单体具有神经毒性，一定要戴手套操作。 胶浓度用量（单位：mL）总量水40%丙烯酰胺4分离胶缓冲液4%6.501.002.5010注：浓缩胶不需要甘油。B: 摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。C: 按上表用量加入10%APS和TEMED（配制其他体积的胶时，APS和TEMED的用量需按比例调整），迅速摇匀后倒胶。D: 在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。E: 室温聚合30-60分钟（低温抑制聚合反应）。4. 拔出梳子，用1电泳缓冲液冲洗加样孔。5. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽加入足够1阳极缓冲液。产品提供10升的阳极缓冲液干粉，将所有干粉溶解在1000mL水中，用浓盐酸调pH到8.9（25）即得10阳极缓冲液，灭菌后可以4放置，用时再稀释成1阳极缓冲液。6. 往下槽加入足够的1阴极缓冲液。产品提供10升的阴极缓冲液干粉，将所有干粉溶解在1000mL水中即得10阴极缓冲液，可以室温放置，不需要灭菌，用时再稀释成1阴极缓冲液。7. 在蛋白质样品中加入5多肽上样液（4uL样品加1uL上样液），100煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。8. 先