实验四 动物血液基因组DNA的提取ppt.ppt

动物基因组DNA的提取 常祖明 背景知识 动物细胞中有哪些细胞器中含有DNA 与植物细胞的差别 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 核苷酸 双螺旋结构 一级结构 核小体 二级机构 螺线管 三级结构 超螺旋管 四级机构 染色体 组蛋白 DNA为白色类似石棉样的纤维状物 大都呈酸味 DNA是极性化合物 一般都溶于水 不溶于乙醇 氯仿等有机溶剂 它们的钠盐比游离酸易溶于水 在酸性溶液中 易水解 中性或弱碱性溶液中较稳定 DNA的理化性质 实验目的 掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意 此方法会把少量RNA提取出来 故后面通称核酸的提取 实验原理 哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化 因而当中没有细胞核 无法提取DNA 禽类的血细胞则可以 禽类代谢旺盛 血液中红细胞更多 而且红细胞中有完整的细胞核 大量的染色体 且材料易得 经济 用鸡血细胞做实验材料有两个原因 一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富 材料易得 二是鸡血细胞极易吸水胀破 而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心 对设备要求较高 操作繁琐 历时较长 实验原理 固定 血样采集 抗凝血 裂解细胞 蛋白质降解 蛋白质变性 沉淀DNA 洗涤去杂质 2020 3 18 11 可编辑 普通家鸡无水乙醇 柠檬酸 柠檬酸钠 尿素 十二烷基硫酸钠 SDS 1MTris HCl PH8 0 缓冲液 乙二胺四乙酸二钠 EDTA 2Na 蛋白酶K Tris饱和酚 氯仿 三氯甲烷 异戊醇 实验材料 实验仪器 取血针及管离心机 3台 12管离心管 水浴锅 65 移液枪 包括枪头 实验试剂 1 75 的乙醇2 ACD抗凝剂100ml 共需48ml 每管0 8ml 3 禽血裂解液100ml 共需51ml 每管1 7ml 4 氯仿 异戊醇 24 1 共需54ml 每管1 8ml5 酚 氯仿 异戊醇 25 24 1 共需60ml 每管2ml6 TE缓冲液PH8 050ml 实验步骤 75 乙醇20ml 翅下取血5ml 5ml离心管 800ulACD抗凝剂 800ulACD抗凝剂 8000转离心1分钟 弃上清液 8000转离心1分钟 弃上清液 取680ul 8000转离心1分钟 55 水浴过夜 1700ul裂解液 10ul蛋白酶K 实验步骤 2ml饱和酚 摇匀至无块状 12000转离心10分钟 DNA酚蛋白层 5ml离心管 取上层透明的DNA溶液 2ml酚 氯仿 异戊醇 12000转离心10分钟 5ml离心管 取上层DNA液 1 8ml氯仿 异戊醇 12000转离心10分钟 5ml离心管 取上层DNA液 无水乙醇 75 无水乙醇 1000ulTE缓冲液 晾干 20 保存 在整个实验过程中应严格执行无菌操作 部分药品有毒 操作中应注意安全防护 刚投入水浴时可以稍快速的晃动 之后的晃动一定要轻柔 再每一次加入药剂后 都要轻轻晃动离心管 使之混匀 注意事项 思考题 本实验中用到的各种试剂的作用是什么 本实验中进行了几次离心操作 每次的目的 实验安排 按照学号分组进行实验 每6人一组 一组做3管 用一个研钵 每3组共用1台离心机同时进行离心操作 6人一组 2013级生物技术专业分子生物学实验报告姓名 学号 实验项目 实验