直抗阳性和免疫溶贫PPT课件.ppt

直接抗人球蛋白实验阳性和免疫溶血性贫血 1 抗球蛋白试验 检测IgG 通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用 促进红细胞的凝集 可分为直接和间接抗球蛋白试验 2 直接抗球蛋白试验 检查受检者红细胞在机体内是否被抗体致敏产生直抗阳性的条件自身免疫溶血性贫血溶血性输血反应新生儿溶血病 3 间接抗球蛋白试验 证实红细胞在体外被抗体结合的试验是检查血清中IgG抗体特异性或红细胞抗原的重要手段可用于未知抗体的检出与确认交叉配合试验确认抗原 4 间接抗球蛋白试验 步骤1 致敏步骤2 洗涤步骤3 加入抗人球蛋白试剂 AHG 5 增强介质 可以增强反应性和减少孵育时间LISS电解质增加溶液的介电常数 减弱了抗原抗体的静电作用 降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合率Polybrene碱性高分子物质 有效中和红细胞表面负电荷 降低zeta电位 缩短红细胞之间的距离PeG极强的亲水性 减少红细胞与抗体周围的水分22 BovinealbuminEnzymes 6 增强介质 柱凝集 Columnagglutination 固相技术 Solid phasetechnology 复合方法 Redbloodcellspanel Plasmaorserum ScreenDiluent NanoLys Anti HumanGlobulin AHG 7 2 Incubation20 at37 C3 ShakeandMagnetizeinthesametime 12 lofserumorplasma H1 H2 H3 60 lofNanoLys 15 lofHemascreen1 2 3 60 lofScreenDiluent 抗体筛选方法 1 Dispensing 8 抗体筛选方法 9 DAT阳性血液标本的收集 EDTA抗凝血提供红细胞DAT测定 定型 洗脱 自身吸收不抗凝血提供血清抗体筛选 抗体鉴定 10 DAT阳性血清学研究 多特异性抗球蛋白 抗IgG 抗C3测定附着在红细胞上的免疫球蛋白的类型血清抗体筛选与鉴定自身抗体 同种抗体自身 同种抗体放散试验确认附着抗体的特异性直抗 IgG 阳性 而血清与洗脱液皆无反应需进一步研究 药物处理细胞 A和B细胞 酶处理细胞 11 红细胞鉴定 定型ABO Rh 磷酸氯奎放散 收集网织红细胞DATIgG C3放散阴性 A和B细胞 酶处理 药物处理细胞阳性 同种抗体 自身抗体 同种 自身自身吸收 12 血清抗体鉴定 阳性自身抗体温抗体 冷抗体同种抗体特异性鉴定自身吸收鉴定同种抗体阴性IgG抗A 抗B抗体酶处理细胞药物依赖抗体 13 抗体放散方法 14 红细胞疾病 红细胞增多红细胞减少红细胞生成减少红细胞破坏过多 溶血性贫血 红细胞丢失过多 15 溶血性贫血 红细胞内在缺陷遗传性红细胞增多症红细胞酶缺乏的贫血珠蛋白生成障碍性贫血异常血红蛋白病阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞外来因素免疫溶血性贫血机械性溶血性贫血其它因素引起的溶血性贫血 16 免疫溶血性贫血的分类 自身免疫溶血性贫血 AIHA WarmAIHA WAIHA ColdAgglutininSyndrone CAS Mixed typeAIHAParoxysmalColdHemoglobinura PCH DAT negativeAIHA同种免疫溶血性贫血HemolyticTransfusionReactionHemolyticDiseaseoftheFetusandNewborn HDFN 药物诱发的免疫溶血性贫血Drug dependentDrug independent 17 自身免疫溶血性贫血的血清学特征 18 温抗体型自身免疫溶血性贫血 WAIHA 发病率1 80000 女性比男性高 年龄多数 40病因分类网状内皮细胞肿瘤慢性淋巴瘤 霍奇金病 非霍奇金淋巴瘤病胶原病系统性红斑狼疮 类风湿性关节炎等免疫性疾病免疫缺陷综合症 低球蛋白血症等胃肠道疾病某些良性肿瘤 19 WAIHA发病机制 免疫调节紊乱免疫器官对自身红细胞失去识别能力红细胞膜损伤 改变膜的抗原性 20 WAIHA诊断标准 临床表现起病慢 数月后才发现贫血 表现为全身虚弱及头昏 各有1 3患者皮肤粘膜苍白及黄胆 半数以上有脾肿大 实验室检查1 贫血 程度不一 可暴发急性溶血现象 外周血涂片上可见多量球形细胞及数量不等的幼红细胞 2 骨髓涂片 呈幼红细胞增生象 3 再生危象 网织红细胞极度减少 骨髓象呈细胞再生障碍 血象呈全细胞减少 4 DAT试验阳性 为抗IgG和抗C3型 22 WAIHA诊断依据 直抗阳性患者近4个月无输血或特殊药物服用史 结合临床表现和实验室检查 可诊断为温抗体型自身免疫溶血性贫血 直抗阴性但临床表现较符合本病症状 肾上腺皮质激素或切脾术有效 其它溶血性贫血除外 可诊断为抗球蛋白蛋白试验阴性的温抗体型自身免疫溶血性贫血 23 WAIHA疗效标准 缓解患者临床症状消失部分缓解患者临床症状基本消失 血红蛋白量在80g L以上 网织红细胞数在5 以下 血清总胆红素测定 34umol L 2mg dl 直抗阴性 阳性 无效患者治疗后仍有不同程度的贫血或溶血症状 实验室检查结果未能达到部分缓解标准者 24 温自身抗体与Rh血型抗体 单一的Rh特异性自身抗 e复合的Rh特异性Mimicking抗体 25 自身抗体同效 mimicking 同种抗体 一位rr型患者的血清中有抗C及抗e抗体 尽管患者的红细胞缺乏C抗原 但事实上此抗C的反应性 是因温反应性自身抗体而引起 这种由于自身抗体所致的反应性 可用自身与同种吸收法来研究决定 在上述情况中 抗e为自身抗体 抗C抗体会吸附到自身及同种的r型细胞上 这与 真实 同种抗C完全不同 后者仅被C阳性红细胞吸收 26 温自身抗体 广范围抗dl 自身抗e 27 CAS发病机制 当体温较低 300C以下 时这种冷抗体能作用于自身红细胞抗原而发生可逆性的红细胞凝集 凝集的红细胞阻塞微循环而发绀 可伴有轻度的溶血 温度回升 症状消失 原发性者原因不明继发性者相对多见于支原体肺炎以及传染性单核细胞增多症恢复期 28 CAS诊断标准 临床表现以中老年患者为多 寒冷环境使患者耳郭 鼻尖 手指发绀 但一经加温即消失 除贫血和黄疸外 其他体症很少实验室检查1 患者呈慢性轻至中度贫血 外周血中无红细胞畸形 可有轻度高胆红素血症 2 反复发作者有含铁血黄素尿 3 冷凝集素试验阳性 40C效价 1000 4 DAT试验阳性 为C3型 29 PCH发病机制 以全身或局部受寒冷刺激后突然发生大量血管内溶血和血红蛋白尿为特征 罕见原发性发病者极为罕见继发性主要由梅毒特别是先天性梅毒及晚期梅毒静止期所引起 现在此病大多出现于某些病毒感染 如麻疹 流行性感冒 水痘 传染性单核细胞增多症等传染病之后 以儿童居多 30 PCH诊断标准 临床表现患者多数受寒后即有急性发作 表现为寒战 发热 体温可高达400C 全身无力及腰背痛 随后即有血红蛋白尿 多数持续几小时 偶有几天实验室检查1 发作时贫血严重 进展迅速 外周血有红细胞大小不一及畸形 并有球形红细胞 红细胞碎片 嗜碱性点彩细胞及幼红细胞 2 反复发作者有含铁血黄素尿 3 DL试验阳性 4 DAT试验阳性 为C3型 31 DL冷溶血试验 Donath LandsteinertestDL冷溶血素IgG冷反应性抗体 能结合于几乎所有正常人红细胞均有的P血型抗原 是一种冷温双相温度的冷溶血素 具有强烈的溶血作用 体外最适反应温度00C 40C 150C以下补体不能按序最终激活 故不发生补体溶血 回升370C时抗体与细胞解离 但补体却依次激活 导致溶血 先置于冰水中约30分钟 再置于370C水浴中2小时 溶血 DL抗体存在 32 冷自身免疫溶血性贫血的输血 慢性冷凝集素病很少需要输血 但是发生大量溶血时 病人温度约400C的环境 当红细胞输入开始10分钟红细胞快速在病人血液中破坏 然后破坏速度变慢阵发性寒冷性血红蛋白尿患者很少需要输血 因抗体反应温度常只到200C 所以很少引起溶血 当抗体反应温度如上升到300C即可引起溶血 输P阴性血 但有人成功的输予没洗涤 没加温 P阳性的细胞 33 自身吸收区分自身和同种抗体 患者血清 自身抗体 同种抗K洗涤患者细胞 560C水浴中孵育5分钟 洗脱部分自身抗体酶处理洗脱红细胞 可增大吸附抗体的能力370C吸附患者血清 移去自身抗体 只留下同种抗体 34 35 Blood MatchingGoesGenetic Hopingtopreventadversetransfusionreactionsandsavelives Europeanresearchersarelobbyingtoreplaceserology basedbloodtypingwithmatchingbasedonDNAtests14MARCH2008VOL319SCIENCEwww sciencemag org 36 配血步入基因时代 为了预防输血不良反应和挽救生命 欧州学者们正在呼吁用DNA检测替代血清学方法来鉴定血型14MARCH2008VOL319SCIENCEwww sciencemag org 37 Blood MatchingGoesGenetic Twodecadesago a20 year oldmanenteredDukeUniversityhospitalforahipreplacement Hehadsicklecelldiseaseandbecausehewasanemic heneededabloodtransfusionbeforetheoperation Aswithmostsicklecellpatients hehadreceivedtransfusionsbefore Butonthisoccasion hisbodyrejectedtheblood Thedoctorstriedagainandagainwithdifferentblood buttheman simmunesystemrebelledagainsteverynewtransfusion generatingantibodiesthatkilledthenewbloodcellsandsomeofhisownintheprocess Hereactedtoeverything saysWendellRosse ahematologistatDukeatthetime Theman sanemiacontinuedtoworsen and2weekslaterhedied Therewasn tanythingwecoulddo Rossesays 38